真菌检测操作规程.doc

念珠菌属鉴定的操作规程（Standard Operating Procedure for Candida）1、介绍(Intorduction)：念珠菌是一种腐物寄生菌，广泛存在于自然界。是人体正常菌群之一，平时主要生存于人体的口腔、上呼吸道、消化道、阴道及其他脏器中。念珠菌的致病性是相对的。在正常情况下，寄生在人体内的念球菌呈酵母细胞型，一般不致病。在机体某些生理、病理因素影响下，内环境改变，机体抵抗力/免疫力降低时，念珠菌就会大量繁殖发展为菌丝型，侵犯组织，达到一定量时，人体就会发病，引起临床症状。念珠菌属(Candida)在临床标本中有以下几个种：白色念珠菌（C.albicans）、热带念珠菌(C.tropicalis)、克柔氏假丝酵母菌(C.krusei)、光滑念珠菌(C.parapsilosis)、链形念珠菌(C.catenulata)、高里氏念珠菌（C.gulliermondii）、高加索乳念珠菌(C.kefyr) 、郎比念珠菌(C.lambica)、溶脂念珠菌(C.lipolytica)、葡萄牙念珠菌(C.lusitaniae)、皱褶念珠菌(C.rugosa)、涎沫念珠菌(C.zeylanoides)，原命名类星形念珠菌（C.stellatoidea）认为是白色念珠菌的生物变种。临床上以白色念珠菌最常见。2、程序（Procedure）:2.1、标本采集：根据临床所疾病的不同，可取分泌物、痰、粪、尿、血或脑脊液等标本检验。2.2、标本接种和培养：血液及体液标本先在肉汤培养基中增菌后转种。尿、痰、脓性分泌物等可直接接种在血琼脂平板和巧克力平板上。2.3、鉴定过程：2.3.1取平板上的菌落直接涂片，革兰染色并镜检2.3.2镜下为革兰阳性卵圆型或圆型大孢子，可能见到芽现象2.3.3转种念珠菌显色培养基，及上ATB FUNGUS内药敏板条2.3.4培养48h后，见下图菌落色彩初筛念珠菌属 绿色 翠绿色（直径约2mm） 蓝灰色 铁蓝色（直径约1.5mm） 粉红色(模糊有微毛 菌落较大) （直径约4-5mm） 紫色(直径约2mm) 白色白色念珠菌热带念珠菌克柔氏假丝酵母菌光滑念珠菌其它念珠菌2.3.5为白色则上API 20 C AUX 作生化鉴定，则按作业指导书梅里埃半自动细菌鉴定系统操作流程把生化输入电脑，并按系统提示记录鉴定结果，需补充试验则补充试验。3、生物学性状（Organism Characteristics）3.1、形态与染色：念珠菌细胞呈圆形或卵圆形，直径36m，芽生孢子形态不稳定，从圆、卵圆到伸长。革兰氏染色阳性。3.2、培养特性：大多数白色念珠菌需氧，2530生长良好，也可在37以上生长。菌落呈奶油色、馅饼状，光滑。3.3、生化反应：厚膜孢子牙管生成糖 发 酵糖同化葡麦乳葡麦乳白色念珠菌+类星形念珠菌+高里氏念珠菌+热带念珠菌+克柔念珠菌+光滑念珠菌+链形念珠菌+注：+：阳性；：阴性4、生物安全4.1所有的念珠菌培养项目，应该注意培养平板的安全防范措施，在培养基盖子上两边贴上胶带，以防止培养基意外开启。4.2所有念珠菌的染色、药敏和鉴定的过程都要在生物安全柜内进行。4.3生物安全柜需要每年进行维护一次，以确保过滤器的正常机能和空气流动率符合规格。4.4生物安全柜要满足真菌学的最低要求（I or II 级生物安全柜）。4.5在念珠菌检验过程中，所有废弃的物品都要先进行消毒再丢弃。5、质量控制5.1要保留标准菌株，按照试剂的要求，进行室内的质控。质控用标准菌株的操作程序，必须和临床标本的操作程序一样进行。5.2如检验程序中无法提供校正物，需按照室内质控控制程序来进行留样复查、室间比对、参加卫生部和CAP的PT活动等程序来保证结果的准确性。5.3所有使用的试剂，均应严格按照试剂的使用说明书进行质控程序。在临床标本的结果报告以前，必须先审核标准菌株的结果是否在可接受的范围内。如果出现失控现象，须按照室内质控控制程序报告给实验室主任，并且进行矫正措施，直到发现原因，才可以发出临床报告。6、参考文献：6.1全国临床检