蔬菜中有机磷与氨基甲酸酯类农药残留酶抑制法快速检测技术(1).doc

植物保护学现代农业科技 2015年第 11期蔬菜中有机磷与氨基甲酸酯类农药残留酶抑制法快速检测技术李艳莉(陕西省杨凌质量技术检测检验所，陕西杨凌 712100)摘要 概述了酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的原理，并从调试仪器、配制试剂、空白对照、样品制备、样品检测、结果判断等方面介绍了其检测技术。以供参考。关键词 蔬菜；有机磷；氨基甲酸酯；农药残留；酶抑制法；快速检测技术中图分类号 $4818；TS20753 文献标识码 B 文章编号 10075739(2015)110148一O1农产品中农药残留检测是保障农产品质量安全的重要手段，因此农药残留量的检测是农产品检测的重点。现阶段，我国农业上氨基甲酸酯类和有机磷农药种类超过 100种 ，质量和品种很杂，不易用气相色谱方法逐一 查出【 。用 CLBlI残留农药测定仪，能较好地避免假阳性，把好质量关。酶抑制法是一种快速检测部分农药残留的技术。1 原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药可抑制胆碱酯酶的正常功能，其抑制率与农药的浓度呈正相关。通过检测待测样品对乙酰胆碱酯酶活性抑制的程度，按照紫外可见分光光度计原理，利用有机磷和氨基甲酸酯类农药对412nm波长的紫外可见光的吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，并对待测样品进行初筛定性分析的一种快速检测方法。当检测出的抑制率小于 5oH为 阴性 (总量 不超标 )、大于 50时 为阳性 (总量 超标 ) 。2 调试仪器仪器为上海博纳新技术研究所生产的 CLBHI八通道残留农药测定仪。首先接通电源，开机预热 30min；然后进行参数设置，选择通道，一般第 1通道放置对照试样 ，28通道可放置样品试样；设置当日测试日期；调 0使 吸光度为0000调 100使透光度为 1000。3 配制试剂显色剂：取 160mg二硫代二硝基苯甲酸和 156m只碳酸氢钠，20mL提取溶解，4oC保存 ；提取溶液：取 119g无水磷酸氢二钠与 32 g磷酸二氢钾，1000mL蒸 馏水溶解，制成 pH值为 80的提取液；乙酰胆碱酯酶：用提取液溶解，3min的吸光度变化值应控制在 03以上，摇匀后置 4下保存备用，保存期不超过 4d；底物：取 250mg硫代乙酰胆碱，30mL蒸馏水溶解，摇匀后置 4下保存备用同。4 空白对照取提取液 25mL，显色剂和酶各 10mL，静置 15min，加入底物上机测试，做一标准的空白对照，并且进行保存，按 “装入对照样例 ”键 ，打开对照数据库，再选择 “标准对照库”，在对照上半部分选择当天做的空白对照装入各个通道备用 。5 样品制备检测时要从每棵蔬菜上取样，具体的取样如下：叶菜作者简介 李艳莉(1987一)，女，陕西渭南人，助理工程师，从事食品农产品检测检验工作。收稿日期 20l5一o4一l6类包括：青菜、小青菜、菜心、菜苋、米苋、生菜、菠菜、雍菜、大白菜、杭白菜、黄芽菜、空心菜、娃娃菜、鸡毛菜、油麦菜、塔菜、芥兰、草头、紫角叶、荠菜、蓬蒿、黄心菜、甘蓝、卷心菜、牛心菜、菊花菜、芹菜、美芹、水芹、黄心芹、香菜、豆苗、金丝芥、芥菜、马兰、韭菜、韭黄、大葱、小葱、大蒜、蒜苗、洋葱等；叶菜类取 1g样 品时，不宜太碎，以叶为主。葱蒜等特殊菜注意假阳性，样品比对是用标准对照库。花菜类：花菜、白花菜、青花菜等：花菜类选取 3棵样品，取叶 1g(1em长宽，不要剪的太碎)。果菜类：茄子、番茄、青茄、红茄、辣椒、尖椒、甜椒、杭椒、青椒、黄瓜、西葫芦、冬瓜、瓠瓜、苦瓜、丝瓜、南瓜、节瓜、金瓜、佛手瓜、豇豆、刀豆、芸豆、扁豆、白扁豆、毛豆、蚕豆、豌豆、荷兰豆等；果菜类可以采取顺皮削取 1g的方法。具体用带刮皮器的水果刀顺皮削下一片，然后切成 1em左右见方碎片。食用菌：蘑菇、香菇、平菇、袖珍菇、金针菇、茶树菇等；食用菌类可以采取整株浸泡的方法。6 样品检测将称取好的样品放入样品瓶中，加入 50mL提取液，静置提取 15min后，从样品瓶中吸出 25mL溶液到 50mL玻璃试管中，同时加入显色剂和酶液各 10mL，静置 15min 后。加入 10mL底物摇匀，倒入比色皿中上机测试旧。当温度低于 37时 ，酶反应速度放慢，加人显色剂和酶液后放置反应的时间相对延长，当胆碱酯酶空白对照操作 3min以后与对照的差值大于 8，才可往下操作。7 结果判断若被测样品的酶抑制率超过 50，样 品为阳性结果，则表明被测蔬菜中含有高剂量的有机磷和氨基甲酸酯类农药，该样品需重复检测 2次以上。8 参考文献1】唐勤学，陶小林，黎司有机磷农药残留检测技术的研究进展J】化工时刊，2008，22(9)：68-722李壶辛，董全有机磷农药残留检测技术的研究进展J】_中国食物与营养2010(4)：12-153邱朝坤，刘晓字，任红敏，等酶 抑制法检测蔬菜中有机磷农药残留J1食品与机械，2010(2)：40-42，71【4】蒲晓亚，张贵安乙酰胆碱酯酶抑制率法：可快速检测米面果蔬中有机磷农药检测J监督与选择，2008(8)：53555】罗辉泰，黄晓兰，吴惠勤，等基于酶抑制原