课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 (2).doc

5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段导学案一、温故知新1.细胞内DNA复制项目复制时间场所模板原料酶能量产物遵循原则2.细胞内DNA复制过程 ：解旋酶、ATP，DNA两条链打开，形成两条DNA单链。 ：在DNA单链3端与DNA反向配对结合，确保引物3端与DNA单链准确配对。DNA聚合酶结合： ：DNA聚合酶从引物3端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。后续加工：DNA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来（半不连续合成。先导链，滞后链）子链合成特点： （不能/能）不能从头合成；合成方向为 合成”。思考DNA分子能准确复制的原因有哪些？二、预习导航（一）PCR扩增的原理及条件1概念：PCR即_，是一种_迅速_的技术。它能以极少量的_为模板，在短时间内复制出上百万份的_。2原理(1)DNA的热变性：在_的温度范围内，DNA_结构解体，_分开，这个过程称为_。当温度缓慢_后，两条彼此_的DNA链又会重新结合成_。(2)子链的合成：需要_；合成方向总是从子链的_。3条件(1)_模板。(2)分别与模板DNA相结合的两种_。(3)A、T、G、C四种_。(4)_DNA聚合酶。(5)需要稳定的_和能严格控制_的温控设备（PCR仪器）。（二）PCR反应过程1.PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为_、_和_三步。2.从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物延伸而成的DNA单链会与_结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于_之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈_扩增。三、课堂探究1.建立PCR扩增模型典型例题1：PCR过程与细胞内DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是()PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNAPCR过程不需要DNA聚合酶PCR过程中，DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制ABC D知识点1：PCR扩增的计算与DNA含量的测定1.理论上DNA呈指数方式扩增。若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后有 个；若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目 为 个。2.DNA含量的测定：DNA在260nn的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA含量有关。可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定，具体方法见课堂详解。知识点2：PCR扩增反应与体内DNA复制的比较 体内DNA复制 PCR反应 不 同 点 不 同 点 解旋 引物 合成子链 特点 TaqDNA 聚合酶 循环次数 温度 相同点 典型例题2：标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是()A92、50、72 B72、50、92C50、92、72 D80、50、72四、思维创新升华PCR实验操作（动手实验）五、知识体系构建六、巩固练习1DNA分子复制时，解旋的两条链中（ ）A仅一条作为复制模板 B两条链作为模板并复制出两个不同的DNA分子C两条链作为模板并复制出两个相同的DNA分子D两条链作为模板，各自合成一条子链，然后两条母链重新结合为原来的双螺旋分子，两条新链结合成一个全新的DNA分子2.下列关于DNA复制过程的正确顺序是（ ）互补碱基对之间氢键断裂互补碱基对之间形成氢键DNA分子在解旋酶的作用下解旋以解旋后的母链为模板进行碱基互补配对子链与母链盘旋成双螺旋状结构A B C D3.下列各项过程中，遵循“碱基互补配对原则”的有（ ）DNA复制RNA复制转录翻译逆转录A B C D4.实验室内模拟生物体DNA的复制必需的一组条件是（ ）酶 游离的脱氧核苷酸 ATPDNA分子 mRNA tRNA 适宜的温度 适宜的酸碱度A B C D5.利用PCR技术，把一个双链DNA分子当作第一代，经过3次循环，在第四代DNA分子中，有几条第一代脱氧核苷酸的长链？（ ）A 2 B 4 C 8 D 16，6.关于DNA分子的叙述中，正确的是（ ）A .DNA的两条链是极性相同，同向平行 B.DNA的两条链是极性相同，反向平行C.DNA的两条链中极性不同，反向平行的 D.DNA的两条链是极性不同，同向平行7.假设PCR反应中，只有一个DNA的片段作为模板，请计算在30次循环后，反应物中大约有多少这样的DNA片段（ ）A 215 B 230 C 260 D 2318.DNA的合成方向总是（ ）延伸。A从DNA分子的左端向右端 B从DNA分子的右端向左端C从子链的5端向3端 D从子链的3端向5端9.要使PCR反应在体外的条件下顺利地进行，需要严格的控制（ ）A 氧气的浓度 B酸碱度 C温度 D 大气的湿度10.DNA分子经PCR反应循环一次后，新合成的那条子链的脱氧核苷酸的序列应与（ ）A模板母链相同 B非模板母链相同 C两条模板母链相同 D两条模板母链都不相同11.在（ ）的温度范围内，DNA的双螺旋结构解开 A. 1020 B. 80100 C. 2030 D. 406012.关于DNA的复制，下列叙述正确的是（ ）A.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5端延伸DNA链B.DNA复制不需要引物C.