药物的鉴别

第一章：药物的鉴别,授课人：赵丹,1,主要内容,2,概述,定义：根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。目的：判断药物的真伪意义：是药物进行杂质检查、含量测定的前提,鉴别实验的本质是验证某药物是否是已知的标识物，而不是对未知物的鉴别。,3,药物鉴别是根据药物的分子结构、理化性质，采用生物学、化学或物理化学方法来判断药物的真伪。药典所收载的药物项下的鉴别试验方法，仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证实是否为其所标示的药物，它与分析化学中的定性鉴别有所区别。,特 点,药物鉴别不只由一项试验就能完成，而是采用一组试验项目（2个或2个以上）全面评价一个药物，力求使结论正确无误。,4,一. 性状：,外观：聚集状态、色泽、晶型及气味等溶解度：一定纯度上反映药品纯度物理常数：（主要指标）熔点、相对密度、馏程、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、碘值、羟值、吸收系数,第二节 鉴别试验的项目,5,二、一般鉴别试验,一般鉴别试验是根据药物的化学结构及其物理化学性质，通过化学反应来鉴别其真伪的方法。 只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。 例如，经一般鉴别反应的钠盐试验，证实某一药物为钠盐，但不能辨认是氯化钠、苯甲酸钠或者是其他某一种钠盐药物。,中国药典（2010年版）以及中国兽药典（2010年版）附录项下的一般鉴别试验所包括的项目基本相同，主要有： 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐、无机酸盐等。,6,是证实某一种药物的依据，是根据每一种药物的化 学结构的差异或理化性质的不同，选用某些特有的灵敏 的定性反应，来鉴别药物的真伪。,三. 专属鉴别试验 ：,一般鉴别试验：属于哪一类专属鉴别试验：是哪一种物质,7,鉴别试验条件,（一）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。,8,（三）溶液的酸碱度 试反应物处于活化状态、反应产物处于稳定和以观察状态。（四）干扰成分的存在 （五）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。,返 回,鉴别试验条件,9,鉴别实验的灵敏度,反应灵敏度：最低检出量最低检出浓度m=V/G X106空白试验：提高灵敏度的方法:,10,鉴别方法,化学鉴别法：呈色、沉淀、荧光、气体光谱鉴别法：UV、IR、NIR、AB、NMR色谱鉴别法：TLC、HPLC、GC、PC、MS生物鉴别法等,第二节 一般鉴别实验,11,1、特点：化学鉴别法操作简便、快速、实验成本低，是药物鉴别时最常用的方法。2、鉴别依据：根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应产生不同颜色，生成不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，试剂褪色，测定生成物的熔点从而做出定性分析结论。,（一）化学鉴别法,12,（1）干法 干法系指将供试品加适当试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测此时所发生的特异现象。 常用的方法有焰色试验和加热分解试验。,3、类型：根据试验条件的不同化学鉴别法可分为干法和湿法两种类型。,（一）化学鉴别法,13,焰色试验：利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。 方法为：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。 例如：钠为鲜黄色，钾为紫色。 在临床使用的青霉素类及头孢菌素类药物大多为其钠盐或钾盐，鉴别时利用钠、钾盐的焰色反应。,（一）化学鉴别法,14,加热分解：在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。,（一）化学鉴别法,15,（2）湿法 湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。,（一）化学鉴别法,16,呈色反应鉴别法： 系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。 常用的反应类型有： 三氯化铁呈色反应 酚羟基或水解后产生酚羟； 异羟肟酸铁反应 多为芳酸及其酯类、酰胺类； 茚三酮呈色反应 脂肪氨基； 重氮-偶合显色反应 芳伯氨基或能产生芳伯氨基； 氧化还原显色反应及其他颜色反应。,（一）化学鉴别法,17,沉淀生成反应鉴别法常用的反应有： 与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀； 与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； 其他沉淀反应。,（一）化学鉴别法,18,荧光反应鉴别法： 常用的荧光发射形式有 药物本身可在可见光下发射荧光； 药物溶液加硫酸使呈酸性后，可见光下发射荧光； 药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光； 药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其他反应后，发射荧光。,（一）化学鉴别法,19,气体生成反应鉴别法 大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气； 化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体； 含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气； 含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。,（一）化学鉴别法,20,1紫外-可见分光光度法 紫外-可见分光光度法（UV-Vis）是药典中常用的一种药品鉴别方法，如中国药典（2005年版）二部收载的药物采用此法鉴别的有546种。鉴别时一般采用对比法，即按规定的方法配制供试品溶液与对照品溶液，通过对比吸收光谱的特征数据、吸收度或吸收系数、吸收光谱的一致性等进行鉴别。,（二）光谱鉴别法,21,（1）标准品对照法（2）规定吸收波长法（3）规定吸收波长和相应的吸光度法（4）测定吸收波长和吸收系数法（5）规定吸收波长和吸收度比值法,主要有以下几种方式：,1、紫外-可见分光光度法,22,药品在一定波长下的吸收系数，可用于药品的鉴别。（4）测定吸收波长和吸收系数法 例如：甲砜霉素，取本品精密称定，加水溶解并定量稀释成浓度为200g/ml的溶液，依法测定，在266nm和276nm处有最大吸收，吸收系数分别为2528和21.523.5；取上述供试品溶液1ml，加水稀释成20ml后，在224nm处有最大吸收，吸收系数为370400。,1、紫外-可见分光光度法,23,（5）规定吸收波长和吸收度比值法 取不同吸收峰或吸收谷处的吸收度的比值作为鉴别的依据。由于溶液浓度和吸收池厚度均相同，因此用此法可消除浓度和厚度的影响。 例如:维生素B12的鉴别，中国药典（2010年版）规定361nm处的吸收度与278nm处的吸收度比值应为1.701.88，361nm处的吸收度与550nm处的吸收度比值应为3.153.45。,1、紫外-可见分光光度法,24,特点：红外光谱法（IR）是一种专属性很强、应用广泛（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。 作用：主要用于组成单一、结构明确的原料药鉴别，特别是结构复杂、用化学方法不易鉴别的药物。 中国药典（2010年版）二部中几乎所有的原料药都采用本法鉴别，采用此法鉴别的原料药及其制剂共有593种。,2、红外光谱法,25,Ch. P (2005)、BP (2005)：与标准图谱比较 USP (29)：对照品法 JP (15)：在规定条件下测定一定波数的特征吸收峰。,1. 各国药典方法：,样品制备方法：,压片法：KBr 糊法：糊状夹在两KBr片中间 膜法：涂于片表面 溶液法：,2、红外光谱法,26,鉴别方法：时采用标准图谱对比法，即在药典规定的条件下测定供试品的图谱，然后与药品红外光谱集对照。 对照时一般先看最强峰的吸收位置、形状、数目等是否一致，然后再检查中等强度缝和弱吸收峰是否对应，如果供试品的红外光吸收图谱与对照品的图谱完全一致，一般可认为是同一种化合物。,2、红外光谱法,27,苯酚的红外光吸收谱图,2、红外光谱法,28,3、近红外光谱,29,4、原子吸收法 利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定性、定量分析。5、核磁共振法 通过测定供试品指定基团上的质子峰的化学位移和耦合常数进行药物的鉴别,30,质谱,X-射线粉末衍射,31,薄层色谱法（TLC）是将细粉状的吸附剂或载体涂布于一块具有光洁表面的玻璃板、塑料片或铝基片上，形成以均匀薄层（厚度0.251mm）,待点样、展开后，各组分在薄层上得到彼此分离的方法，也是目前药典中收载最多的药品鉴别方法之一,薄层色谱法,三、色谱鉴别法,薄层色谱法 高效液相色谱 气相色谱 纸色谱,32,鉴别原理：同一种药物在同样条件下的薄层色谱行为是相同的,依此可以鉴别药物及其制剂的真伪。鉴别时将供试品和对照品按中国药典规定，用同种溶剂配成同样浓度的溶液，在同一薄层板上点样、展开、显色，供试品所显主斑点的颜色、位置应与对照品的主斑点相同。,薄层色谱法,33,1,2,薄层色谱,34,高效液相色谱法（HPLC）是近年来药物分析领域中应用最广泛的分离分析技术，广泛用于药品的含量测定和真伪鉴别。,高效液相色谱法,35,高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法，用其进行药品鉴别时，一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验，根据供试品和对照品色谱主峰保留时间（tR）的一致性进行判断。,高效液相色谱法,36,绿原酸标准品色谱图,样品色谱图,高效液相色谱法,37,四、显微鉴别法,中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的（饮片）切片，粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特性进行鉴别的一种方法。,五、生物学法,利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法。主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别，通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法两大类。,38,1) 有机氟化物,有机氟,氧瓶燃烧,无机氟离子,pH4.3,茜素氟蓝,硝酸亚铈,蓝紫色络合物,鉴别试验与原理,39,2）有机酸盐(a) 水杨酸,水杨酸 + FeCl3,中性条件,弱酸性,红色配位化合物,紫色配位化合物,若在强酸性中，配位化合物分解生成游离水杨酸。,本反应极为灵敏，只需取稀溶液进行试验，如取用量大，颜色很深时，可加水稀释后观察。,40,1原理 水杨酸不溶于水（0时溶解度为1g/1500L），故供试液加酸即析出游离水杨酸。由于水杨酸的酸性大于醋酸，故能与醋酸铵作用释出醋酸，而本身形成铵盐溶解。反应式为： 析出的水杨酸亦可经冷水洗涤、干燥测定熔点（158161）。,2鉴别方法 取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在乙酸铵试液中溶解。,（二）其他鉴别反应,41,酒石酸盐,供试品溶液（中性）+ 氨制硝酸银,水浴,进行银镜反应时，所用试管是否洁净至关重要。,42,3) 芳香族第一胺类的鉴别,1原理 芳香族第一胺遇亚硝酸钠发生重氮化反应，生成重氮盐，再与碱性-萘酚偶合形成有色偶氮染料。,供试品,+