灭菌方法与无菌操作

制药卫生,第三节 灭菌方法与无菌操作,D值：在一定灭菌温度下被灭菌物品中微生物数减少90%所需时间。 Z值：在一定温度下对特定的微生物灭菌时，降低一个lgD所需升高的温度数，单位为。,第三节 灭菌方法与无菌操作,一、F与F0值在灭菌中的意义与应用,F值：是为了比较不同灭菌温度的灭菌效果而设计的一个指标。在一定灭菌温度T，给定Z值所产生的灭菌效果，与设计的参比温度To给定Z值所产生的灭菌效果相同时所相当的时间，单位为min。F0值：是将被灭菌物品在灭菌过程中不同的受热温度与时间折算到与热压121灭菌时热效力相当的灭菌时间。,第三节 灭菌方法与无菌操作,一、F与F0值在灭菌中的意义与应用,蒸气灭菌,物理灭菌法,干热灭菌法湿热灭菌法紫外线灭菌法辐射灭菌法微波灭菌法滤过灭菌法,化学灭菌法,气体灭菌法浸泡与表面消毒法化学药剂灭菌法,无菌操作法无菌检查法,第三节 灭菌方法与无菌操作,灭菌方法,红外接种环灭菌,二、物理灭菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,干热空气穿透力弱，温度不易均匀，而且灭菌温度较高，故不适宜用于大部分药品及橡胶、塑料制品的灭菌。,（一）干热灭菌法,干热灭菌法是利用火焰或干热空气进行灭菌的方法。,1.火焰灭菌法,2.干热空气灭菌法,适宜于不易被火焰损伤的瓷器、玻璃和金属制品等器具的灭菌。,第三节 灭菌方法与无菌操作,（二）湿热灭菌法,二、物理灭菌法,利用饱和水蒸气或沸水进行灭菌的方法。,分类 热压灭菌、流通蒸汽灭菌、煮沸灭菌和低温间歇灭菌等。,特点 湿热蒸气比热大，穿透力强； 细菌在湿热条件下菌体吸收水分，蛋白质较易凝固； 水蒸气与物品接触而凝结成水，放出汽化热，提高温度，,加速细菌死亡。,1.热压灭菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,在高压灭菌器内，利用高压水蒸气杀灭微生物的方法，称为热压灭菌法。 本法是公认的最可靠的湿热灭菌方法，经热压灭菌处理，能杀灭被灭菌物品中的细菌增殖体和芽胞，故凡能耐热压灭菌的药物制剂，均可采用。,卧式热压灭菌柜,1.热压灭菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,热压灭菌所需的温度、压力与时间,第三节 灭菌方法与无菌操作,卧式热压灭菌柜示意图,第三节 灭菌方法与无菌操作,热压灭菌器操作 注意问题：（1）使用前应认真检查灭菌器的主要部件是否正常完好。（2）灭菌时，必须首先将灭菌器内的冷空气排出。（3）灭菌时间必须从全部待灭菌物品达到预定的温度时算起，并维持规定的时间。,1.热压灭菌法,灭菌柜,第三节 灭菌方法与无菌操作,热压灭菌器操作 注意问题：（4）灭菌完毕后停止加热，待压力表逐渐下降至零，才能放出锅内蒸气，锅内外压力相等后，开启灭菌器，待被灭菌物品温度下降至约80时，才可以把灭菌器的门全部打开，这样可有效避免内外压相差太大或冷空气突然进入而造成锅内玻璃瓶炸裂、药液冲出锅外的事故发生。,1.热压灭菌法,热压灭菌法：,影响灭菌的因素： （1）不同细菌的不同发育时期与数量，繁殖期对热的抵抗力大于衰老期，细菌芽孢的耐热性更强。细菌越少灭菌时间越短。（2）药物性质与灭菌时间，达到有效灭菌的前提下可适当选择灭菌时间和温度。,热压灭菌法：,影响灭菌的因素： （3）蒸气的性质：蒸气有饱和蒸气，湿饱和蒸气和过饱和蒸气。饱和蒸气含热量高， 热的穿透力较大，灭菌效力高，湿饱和蒸气有水分，穿透力差，灭菌效力低。过热蒸气温度高于饱和蒸气，但穿透力差，灭菌效力低。（4）介质的性质，制剂中含有营养物质，增强细菌的抗热性，细菌也受pH值的影响，中性环境中的耐热性最好， 碱性次之，酸性不利于细菌的发育。,欣弗事件,案例,同时，黑龙江省哈医大二院收治9例因使用“欣弗”而产生不良反应的患者。他们的年龄在20岁至75岁之间，均是在当地医院或在药店中购买“欣弗”后在诊所静脉点滴的。结束后，这9名患者均出现寒颤、发冷、发热等症状，其中5例伴有顽固性低血压性休克，4例出现意识障碍。,2006年7月27日，青海省药监局最先向国家药监局报告，在青海省西宁市部分患者使用了“安徽华源”生产的“欣弗”注射液后，先后出现胸闷、心悸、肾区疼痛、腹痛、过敏性休克、肝肾功能损害等严重不良反应。,随后，广西、浙江、山东等地也相继出现了相同药物所引发的严重不良反应病例。,女童父亲抚着女儿的遗照悲恸不已,哈尔滨因静点欣弗致死女童生前照片,图片,湖南教师因注射欣弗导致死亡，亲属悲痛欲绝,西安一患者注射欣弗后病危孩子盼望妈妈快快醒来,国家食品药品监督管理局会同安徽省食品药品监督管理局对安徽华源生物药业有限公司进行现场检查。经查，该公司2006年6月至7月生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批准的工艺参数灭菌，降低灭菌温度，缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果。 经中国药品生物制品检定所对相关样品进行检验，结果表明，无菌检查和热原检查均不符合规定。,案例,安徽华源生物药业有限公司违反规定生产，是导致这起不良事件的主要原因。,调查,药品监管部门根据中华人民共和国药品管理法有关规定，对安徽华源生产的“欣弗”药品按劣药论处。并作出如下处理决定：,安徽华源生物药业有限公司因生产劣药被收回大容量注射剂生产资格和“欣弗”药品批准文号，企业负责人被撤职。,由安徽省食品药品监督管理局没收该企业违法所得，并处倍罚款；安徽省食品药品监督管理局监督该企业停产整顿，回收该企业的大容量注射剂；由国家食品药品监督管理局撤销该企业的“欣弗药品的批准文号，委托安徽省食品药品监督管理局收回批件；对安徽华源召回的“欣弗”药品，由安徽省药监部门依法监督销毁。,处理,采访,2.流通蒸气灭菌法与煮沸灭菌法3.低温间歇灭菌法4.影响湿热灭菌的因素,第三节 灭菌方法与无菌操作,微生物的种类和数量,药物与介质的性质,蒸气的性质,灭菌时间,湿热灭菌,饱和蒸气,湿饱和蒸气,过热蒸气,不饱和蒸气,在常压下使用100 流通蒸气加热杀灭微生物的方法。灭菌时间30-60 min不能保证杀灭所有的芽孢，非可靠灭菌方法。待灭菌物品放在沸水中解热灭菌法。,第三节 灭菌方法与无菌操作,（三）紫外线灭菌法,紫外线的穿透能力弱，但能穿透清洁的空气和纯净的水，因而广泛用于空气灭菌与表面灭菌。,灭菌波长：220290nm 灭菌力最强：254 257nm适宜温度：10 55 相对湿度：45% 60%灭菌时间：0.5 1h,二、物理灭菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,二、物理灭菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,（五）辐射灭菌法,辐射灭菌又称电离辐射灭菌，是利用-射线或-射线进行照射，穿透物品杀灭微生物而达到灭菌目的的方法。 60C0 -射线是高能射线，穿透力强，不仅绝大数生物体对射线敏感，而且适用于较厚样品，特别是已包装密封物品的灭菌，灭菌效果可靠，并可有效地防止“二次污染”。,二、物理灭菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,（五）辐射灭菌法,二、物理灭菌法,辐射灭菌法的特点 不升高灭菌产品的温度，穿透性强，适合于维生素、抗生素、激素、医疗器械、高分子材料等的灭菌。 辐射灭菌法的缺点 设备费用高，有些药物灭菌后疗效可能降低，对液体药剂的稳定性也有影响，同时还要注意安全防护问题。,辐射灭菌法的原理 射线可直接破坏细菌 DNA，导致微生物死亡。,第三节 灭菌方法与无菌操作,三、滤过除菌法,滤过除菌法，利用物理阻流的作用，主要用于不耐热的低黏度药物溶度和相关气体物质的洁净除菌处理。,（一）微孔薄膜滤器,是目前应用最广泛的滤过除菌器，一般应选用0.22m以下孔径的滤膜作滤材。,第三节 灭菌方法与无菌操作,三、滤过除菌法,垂熔玻璃滤器的滤板孔径有多种规格，上海玻璃厂的6号(孔径2m以下)、长春玻璃总厂的G6号(孔径1.5m以下)和天津滤器厂的IG6号(孔径2m以下)三种规格滤板制成的垂熔玻璃滤器可以作为滤过除菌器使用。,（二）垂熔玻璃滤器,第三节 灭菌方法与无菌操作,繁殖期微生物大小约为1m，芽孢大小约0.5 m或者更小 。,三、滤过除菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,（三）砂滤棒,应用滤过除菌法的注意事项,药液均应经过预滤处理，一般先用粗滤装置滤除较大颗粒的杂质，再用砂滤棒或G5、G4号垂熔玻璃滤器滤除微细沉淀物或较大杆菌、酵母菌，最后再用微孔薄膜滤器或G6号垂熔玻璃滤器滤过，并收集滤液及时分装。 必须无菌操作，必要时在滤液中还须添加适当的防腐剂。,三、滤过除菌法,第三节 灭菌方法与无菌操作,（三）砂滤棒,应用滤过除菌法的注意事项,对新使用或已多次重复使用的滤器，须检查滤过除菌的效果，必要时可测定滤器的孔径或采样作细菌学检查。,三、滤过除菌法,四、化学灭菌法,使病原体蛋白质变性，发生沉淀；与细菌的酶系统结合，影响其代谢功能；降低细菌的表面张力，增加菌体胞浆膜 的通透性，使细胞破裂或溶解。,化学药品杀菌或抑菌的机制,第三节 灭菌方法与无菌操作,化学灭菌法是使用化学药品杀灭微生物，达到灭菌目的的方法。 化学灭菌法一般包括气体灭菌法和浸泡与表面消毒法。,灭菌指示剂,第三节 灭菌方法与无菌操作,杀菌谱广；有效杀菌浓度低；作用速度快；性质稳定，不易受有机物、酸、碱及其他物理、化学因素的影响；,四、化学灭菌法,理想的化学灭菌剂应具备下列条件：,第三节 灭菌方法与无菌操作,易溶于水，可在低温下使用；毒性低，对物品无腐蚀性，不易燃烧爆炸；无色，无味，无臭，灭菌后易于从被灭菌物品上除去，无残留；价格低廉，来源丰富，便于运输。,四、化学灭菌法,理想的化学灭菌剂应具备下列条件：,灭菌生物指标,第三节 灭菌方法