蚕豆病生物设计

,年级专业班级:实验课时间:实验室：组别：组员排名： 报告人：,生化设计实验,患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。 实验室检查：红细胞 1.981012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5mol/L，结合胆红素13.7mol/L，未结合胆红素71.8mol/L，尿蛋白（+），潜血(+)，尿胆红素()，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。,一、根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初步判断患儿是何种疾病？,性别：男、年龄3岁主要症状：体温38、面色苍白、血尿1天、皮 肤及巩膜黄染、恶心、呕吐,诱因：一天前食用蚕豆 既往史：姐姐也曾出现过此症状,溶血性黄疸 ：由于红细胞的大量破坏，使胆红素产生过多，超过了肝细胞摄取结合的能力，使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多。葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏，输血不当均会引起病症 蚕豆病：葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏。患者大多在食用蚕豆后发生急性溶血性贫血。典型病人常出现由于大量红细胞破坏释放出胆红素二导致的溶血性黄疸 ，恶心呕吐，尿液呈酱油样等症状,二、设计实验证明,实验思路：患者姐姐出现过此类状况推测属于家族性遗传，且患者在食用蚕豆后出现症状，故即有可能为蚕豆病。6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁血红蛋白的还原，故可以依据如下反应机制设计实验 亚硝酸钠亚铁血红蛋白 高铁血红蛋白,高铁血红蛋白还原酶 NADPH(辅酶) 亚甲蓝(递氢体),一、实验目的1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病原因2、掌握高铁血红蛋白还原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法3、了解蚕豆病的发病机制及原因,二、实验原理 在全血中加入亚硝酸钠，使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（MHb）,高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中，高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体，还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以，G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降（分光光度技术）。,三、实验器材及试剂 器材： 离心机、分光光度计、微量移液器 水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，试管 试剂： 0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液、 0.4mmol/L亚甲蓝溶液 、 0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液、混合液 （等量+）、生理盐水、抗凝剂、患者静脉血、蒸馏水,四、实验步骤1、取静脉血1. 8mL 于抗凝管(含0. 2 mL109 mmol/ L抗凝剂+葡萄糖20 mg），混匀2、离心沉淀 1000 r/ min 15 min3、调整 血细胞血浆=11 ，混匀 ，（调整后全血）4、1ml 0. 18 mol/ L 亚硝酸钠、1ml 0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液 、0.14 mmol/ L 亚甲基蓝液，混匀 ，得到混合试剂1ml,五、取试管3 支,标上A、B、S ,按下表加入试剂,高铁血红蛋白还原试验操作步骤,试剂 A B S,混合试剂/ mL 0. 01 / /生理盐水/ mL / 0. 01 /0. 18 mol/ L 亚硝酸钠- / / 0. 010. 28 mol/ L葡萄糖溶液/ mL 经调整的全血/ mL 0. 1 0. 1 0. 1来回摇动1520 次,置37 水浴箱静置3 h蒸馏水 10. 00ml 10. 00ml 10. 00ml,B管为空白管, 在波长635 nm处，测定“A”管及“S”管吸光度,六、实验结果实验结果计算：,计算高铁血红蛋白还原率公式：MHb % = (1 - A/ S) 100 % 计算出其还原率与正常值比较,七、实验分析该患者可能患有先天性镰刀贫血症或蚕豆病。正常的高铁血红蛋白还原率75%，若计算所得还原率低于75%，且患者姐姐也有类似症状，患者吃过蚕豆后发病，故可推断患者患有蚕豆病,八、注意事项,1、血细胞比容比值过低，高铁血红蛋白还原率降低。应将血细胞比容调整到0.35-0.402、细菌污染可产生亚硝酸盐而造成假阳性，试管等应无菌3、不稳定Hb、高脂血症等均可出现假阳性结果，故应2h内送检4、标本不应有凝血或溶血，故需使用抗凝管5、在标本内应适当加入葡萄糖，以避免较全血缺乏,三、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果,主要临床表现： 1. 血尿、排酱油色尿、面色苍白 2. 皮肤及巩膜黄染 3. 体温升高 4. 呼吸急促,1. 血尿、排酱油色尿、面色苍白 红细胞膜氧化破裂而发生急性溶血，大量的血红蛋白就会随着体液排到尿液中 ，所以尿呈酱油样色；2. 皮肤及巩膜黄染 红细胞遭到大量破坏后释放出大量的血红蛋白,致使血浆中胆红素含量增多,超过肝细胞的处理能力则出现黄疸。 3. 体温升高 组织的坏死和细胞的破坏，引起炎症反应，引起发热4. 呼吸急促 溶血性贫血导致呼吸急促,实验室检查结果,体温 38 37 红细胞1.9810 /L （6.0-7.0）10血红蛋白53g/L （ 170-200） g/L脉搏150次/分 75次/分 呼吸40次/分 1218次/分 血压80/60mmHg 100120/6080mmHg面色苍白、瘦小 血清总胆红素85.5mol/L （3.4-17.1）mol/L结合胆红素13.7mol/L（尿胆红素（-） ）