牙周病诊断技术进展

牙周病诊断技术新进展,四川大学华西口腔医学院张蕴惠 教授,牙周病的发病因素,对牙周病病因、发病机制和自然病程的深入认识导致了牙周诊断技术的不断发展,牙周诊断的内容,病人是否患牙周病,患何种类型的牙周病,确定疾病的活动性,预测未来疾病进展的危险性,指导治疗计划,评估治疗结果,在维持期检测疾病进展,监测疾病的进展较困难,传统诊断措施的缺陷,不能诊断疾病的活动性,不能准确检测牙周的少量破坏,检测的重复性相对较低,牙周诊断技术的新进展,临床检查 放射诊断 微生物学检测 龈沟液生化分析 基因诊断 全身危险因素的评估,临 床 检 查 牙周病诊断的基础,传统的牙周临床检查,菌斑、牙石,牙龈的红肿,探诊深度、探诊出血,附着丧失,影响牙周探诊准确性的因素,组织的炎症状态,探针的角度,探针尖的形状与尺寸,探诊的力量,影响探诊准确性,手工探诊不能可靠地检测少于23mm的PD或CAL的改变,电子探针 牙松动度测量仪 牙周温度测量仪,牙周临床检查的辅助电子仪器,控力电子探针(Controlled-force electronic probes) 减少因探诊力量的不同而引起的测量误差,恒定的探诊压力 自动的电子测量 数据直接输入一个计算机软件,控力电子探针,Florida probe -可靠检测1mm附着丧失,控力电子探针,interprobe,Control unit,handpiece,Memory card,reporter,PDT sensor probe,牙松动度测量仪,Periotest,原理：Periotest对测量牙施加一个标准的力量，测量牙齿回到原始位置所需时间，读数记为150。,牙周温度测量仪评估牙周炎症状况的诊断工具,Periotemp,带有温度偶联装置 的手柄仪器测一次就可以测得温度、PD、BOP 龈下温度可精确到0.1,放 射 检 查,确定骨破坏范围和严 重程度的重要的辅助手段,放射诊断不准的主要原因,数字减影放射成像术(Digital subtraction radiography ),数字减影放射成像,开始,一年后骨破坏,彩色数字减影放射成像显示骨破坏,彩色数字减影放射成像显示骨获得,微生物学检测,微生物检查的适应症,微生物检查的主要优点,微生物学检查存在的问题,仅检查牙周可疑致病菌的有无无法区分健康/病变或活跃/非活跃部位引起牙周破坏的可疑致病菌总量或在菌斑中的比例存在明显的个体差异,微生物学检查存在的问题(续),取样部位影响检查结果检测系统仅能查出其所针对的特异菌种，不能确定有无其它细菌感染费用昂贵,检测方法,纸尖收集龈下菌斑,暗视野和相差显微镜,细菌培养和药敏实验,DNA探针,限制性内切酶分析(REA),聚合酶链式反应(PCR),细菌抗原的免疫分析,细菌酶的检测,暗视野和相差显微镜,细菌培养和药敏试验,优点,缺点,细菌培养和药敏试验(续),DNA探针,检测,DNA探针(续)-,缺点,优点,敏感性和特异性较高快速简便棋盘杂交能同时分析大量样本中的多种靶细菌死亡的靶细菌也能检出,目前只构建了几种可疑致病菌的DNA探针无法了解细菌对抗生素的敏感性,特别适用于微生态流行病学的调查,限制性内切酶分析,DNA,DNA片段,电泳图谱,酶切,电泳,原理,DNA指纹图,限制性内切酶分析(续),用途,分析P.g、A.a、P.i等牙周可疑致病菌的遗传异质性对同一种细菌的不同菌株进行基因型分析，寻找致病的毒力克隆流行病学调查的重要工具了解牙周可疑致病菌在家族中的分布和传播,聚合酶链式反应 (PCR),目前敏感性最高的微生物检查，106个微生物中仅有10个靶细菌就能被检出主要用于有关牙周可疑致病菌在 家族中传播情况的流行病学调查,随机引物PCR (arbitrarily primed PCR, AP-PCR),随机引物PCR (续),优点,分辨率相当高的DNA指纹技术，可区分同一菌种的不同菌株无需事先了解靶细菌的DNA序列可选择任意引物进行扩增，常用多个随机引物同时扩增一种靶细菌，以提高分辨率 操作简便快速,细菌抗原的免疫分析,椅旁检测系统 Evalusite,一种酶联免疫吸附实验 用于检测P.g、P.i、A.a抗原,辣根过氧化物酶标记的多克隆抗体,菌斑样本,8min内,出现粉红色点为阳性(观察颜色密度作半定量分析),阴性,细菌酶分析,椅旁诊断系统 Perioscan,原理：,水解,菌斑样本对BANA的水解能力,检测,椅旁诊断系统 Perioscan(续),方法,15min,椅旁诊断系统 Perioscan(续),龈沟液生化分析,原理,龈沟液生化分析,龈沟液生化分析,诊断方法,局限性,龈沟液生化分析,可能成为病变活动性生化指标的GCF成分,炎症介质和产物 宿主产生的各种酶 牙周组织降解产物,炎症介质和产物,PGE2,介导牙槽骨吸收的重要炎症介质,炎症介质和产物(续),细胞因子,炎症介质和产物(续),牙周可疑致病菌的特异性抗体,宿主产生的各种酶,GCF中与病变活动性有关的酶：,中性白细胞弹力酶 (neutrophil elastase, NE) 中性蛋白酶 (neutral proteinase, NP) 葡萄糖醛酸酶 (-glucuronidase, -G) 基质金属蛋白酶 (MMPs),组织蛋白酶 (cathepsins) 乳酸脱氢酶 髓过氧化物酶 (MPO) 类胰蛋白酶 (tryptase) 碱性磷酸酶 (ALP) 透明质酸酶等,GCF中与病变活动性有关的酶(续)：,宿主产生的各种酶(续),中性白细胞弹力酶(NE),中性白细胞弹力酶(NE)(续),椅旁NE检测系统 Prognostick：,宿主产生的各种酶(续),中性蛋白酶(NP),多数炎症部位(包括龈炎)的GCF中都可检出NP，该定性检查的临床价值不大,椅旁诊断系统 Periocheck：,NP阳性,含GCF滤纸条,染料标记的牛胶原凝胶基质,宿主产生的各种酶(续), 葡萄糖醛酸酶 (-G ),宿主产生的各种酶(续),基质金属蛋白酶 (MMPs),MMPs是一组需要Zn+和Ca+等二价金属阳离子才能激活的蛋白水解酶参与胶原、纤维层粘蛋白和弹力纤维降解和结缔组织改建牙周炎部位MMPs浓度和活性均显著增高在牙周病变进展过程中起重要作用,基质金属蛋白酶 (MMPs) (续),MMP-8有望成为诊断病变活动性的重要指标： 龈炎部位: 主要以酶原形式存在 牙周炎部位: 活性状态 牙周病变活动性: 约80%是MMP-8、 MMP-1和MMP-2所致,宿主产生的各种酶(续),组织蛋白酶,一组酸性溶酶体酶组织蛋白酶B、H和L是半胱氨酸蛋白酶，总与弹力酶同时分泌并激活胶原酶原GCF各型组织蛋白酶的水平与牙周炎病变严重程度有显著相关关系治疗后浓度下降可用于监测治疗效果,牙周组织降解产物,天冬氨酸转胺酶(AST),原理：,AST超过一定域值,出现新的附着丧失的危险性显著增高,天冬氨酸转胺酶(AST)(续),椅旁检测试剂盒Periogard：,牙周组织降解产物(续),糖胺多糖(GAGs),分布：结缔组织成分：硫酸软骨素-4占牙槽骨GAGs的 93.8% 意义：GCF中的硫酸软骨素-4浓度升高提 示病变进展致进行性骨吸收,是蛋白多糖的多糖成分,牙周组织降解产物(续),羟脯氨酸,组成胶原蛋白的主要氨基酸之一龈炎和牙周炎部位都存在明显的胶原降解，因而曾调查其浓度与牙周破坏的相关关系 GCF中羟脯氨酸水平在龈炎和牙周炎部位没有明显差异,牙周组织降解产物(续),骨特异蛋白(续),骨特异蛋白(续),牙周炎患者GCF中ICTP浓度显著升高，并与PD、X线片骨吸收程度等临床指标呈正相关关系,细菌胶原酶降解,ICTP：,基 因 诊 断,基 因 诊 断,可能影响牙周炎易感性的侯选基因：,IL-1基因簇：包括分别编码IL-1、IL-1、 IL-1ra的基因 TNF基因簇：包括分别编码TNF、TNF 的基因 编码免疫球蛋白IgG2的基因 IgG2Fc受体基因簇：包括分别编码FcRA 和FcRB 的基因,推测机制:,部分侯选基因确与牙周炎发病存在相关性,Kornman(1997),非吸烟人群中,部分侯选基因确与牙周炎发病存在相关性(续),Wilson,在成人牙周炎患者中，FcRB-NA2等位基因的检出率明显高于对照组携带该等位基因的牙周炎患者每年复发率高于携带FcRB-NA1等位基因的患者,基因诊断技术会显现越来越重要的临床应用价值对牙周炎遗