药品质量检验

药品质量检验理化分析,上海市食品药品检验所乐 健2013-4-17,理化分析的基本操作分析天平使用与称量,1方法适用范围分析天平用于检验工作中比较精密的称量，如药品的含量测定、对照品的称量、滴定液的标化、水分测定等。,有什么分析不需要天平？,2分类和原理以杠杆原理构成的天平为机械天平。,电子天平是采用电磁力平衡的原理，是将称盘与通电线圈相连接，置于磁场中，当被称物置于称盘后，因重力向下，线圈上就会产生一个电磁力，这时传感器输出电信号，其电流强度与被称物体的重力(质量)成正比。电信号通过模拟系统后，将被称物品的质量显示出来。,天平的灵敏度常用感量表示，感量为指针从平衡位置偏转到标尺1分度所需的最大质量。感量与灵敏度成反比,感量越小，灵敏度越高。分析天平的感量为0.lmg、0.01mg或0.001mg。最小分度、可读性等均属此范畴。,3操作方法（1）称量前的准备 根据称取物质的量和称量精度的要求，选择适宜精度的天平。检查该天平的使用登记记录，了解天平前一次使用情况以及天平是否处于正常可用状态。(常被忽略),3操作方法（1）称量前的准备 试验中供试品与试药等“称重”的量，均以阿拉伯数码表示，其精确度可根据数值的有效数位来确定，如: 称取“0.1g”，系指称取重量可为0.06-0.14g；称取“2g”，系指称取重量可为1.5-2.5g； 称取“2.0g”, 系指称取重量可为1.95-2.05g；称取“2.00g”，系指称取重量可为1.995-2.005g。,3操作方法（1）称量前的准备 “精密称定”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一；“称定”系指称取重量应准确至所取重量的百分之一。如0.1g，精密称定就要称到0.1mg，用万分之一天平。 取样量大于100mg，选择感量为0.lmg取样量10-100mg，选择感量为0.01mg取样量小于10mg，选择感量为0.001mg,检查水准器内的气泡是否位于水准器圆的中心位置，否则应予调节使天平处于水平状态。检查天平盘表面是否洁净、天平盘下有无异物妨碍衡量，否则应予清除。接通电源，打开电源开关和天平开关，预热至少30分钟以上。,11,按使用说明书调整零点，一般电子天平均装有调零钮，轻轻按动即可调零。天平预热后，一般电子天平设有自检功能，应按使用说明书进行。自检通过后，即可称量。,（2）减重法称量将供试品放于适宜容器(如称量瓶或称量纸)中，置于天平盘上，称量为W1，然后取出所需的供试品，再称容器(包括剩余供试品)，称量为W2，两次重量之差W1-W2，即为称取的供试品重量。,W1=0？,利用天平的调零钮可以直接将-W2作为称量值，具体做法如下：将供试品和容器置于天平盘上，天平调零，此时W1=0，取出所需的供试品，剩余供试品和容器的称量W2显示为负数，两次重量之差W1-W2=-W2，即为称取供试品的重量。调零减重法称量适宜于连续取若干份供试品，可以节省称量和记录时间，如重(装)量差异等。,（3）增重法称量将适宜容器置于天平盘上，称量为W1，将需称量的供试品加入容器中，再称量为W2，两次重量之差W2-W1，即为称取的供试品重量。利用天平的调零钮可以直接将W2作为称量值，具体做法如下：将容器(如量瓶)置于天平盘上，天平调零，此时W1=0，加入供试品，记录供试品与容器重量W2，W2-W1=W2，即为称取供试品的重量。液体或需称取固定重量的供试品，常采用增重法。,（4）减重法和增重法的结合很多分析试验的称量过程实际是减重法和增重法的结合。现以称取W mg的对照品为例说明：将称量纸置于天平盘上，天平调零，加入对照品略大于W mg（这一过程为增重法）；天平调零，尽量取出对照品，剩余对照品和称量纸的称量显示为W2，此时-W2即为对照品的准确称重（这一过程为减重法）。,4注意事项（1）环境要求 天平室应远离震源，并防止气流和磁场干扰。空调气不宜直接吹入天平室，应由天花板隔离进风。天平室光线应均匀柔和，阳光不得直射在天平上。天平室温度应相对稳定，一般控制在1030，保持恒温；相对湿度一般在70以下。天平台用混凝土结构为好，台面应水平而光滑，一般用水磨石；牢固防震，有合适的高度与宽度。天平室内除存放与称量有关的物品外，不得存放其他物品。,（2）电子分析天平不能称量有磁性或带静电的物体。（3）称量重量不得超过天平的最大载荷。（4）除经常自检外，分析天平应按计量部门规定定期检定。（5）称量时，不要开动和使用前门，以防呼吸的热量、水汽和二氧化碳及气流影响称量。取、放被称物体和砝码时，可使用两侧门，关门时应轻缓。（6）称取吸湿性、挥发性或腐蚀性物品时，应将称量瓶盖紧后称量，且尽量快速，注意不要将被称物(特别是腐蚀性物品)洒落在称盘或底板上。,（7）机械分析天平内应放置干燥剂，常用变色硅胶，应定期及时更换。电子分析天平室内不放置干燥剂，因为干燥剂的吸水和放水形成了不同方向的气流，引起了空气浮力的变化，导致称量不稳定。保持干燥稳定的称量环境是最重要的。（8）保持天平内部清洁，必要时用软毛刷或绸布抹净或用无水乙醇擦净。（9）称量时，应用专用镊子取夹砝码，严禁用手直接接触；砝码只能放在砝码盒或天平盘上，不可放在其他任何地方。,5Mettler AE163天平操作示例（1）Mettler AE163天平称量范围0.00001g160g，具有分度值0.0001g和0.00001g两档，当最大载荷为l60g时，分度值为0.0001g；最大载荷为30g，分度值为0.00001g。温度要求：1525，相对湿度要求：小于70%。（2）检查天平是否水平（气泡位于水准器圆的正中），如不水平调节天平水平旋钮。（3）检查天平盘面是否洁净、天平盘下有无异物妨碍衡量，否则应予清除。,（4）接通电源，轻按一下天平面板上的单控键，天平即开启，预热稳定至少30分钟以上。（5）自检：关上两侧和上侧拉门，按下单控键至屏幕显示“0.0000”且数字前的绿色小圆点消失后，将CAL杆推置远离操作人员端（CAL杆位于天平底座右侧）。屏幕显示值应在100.00000.0003g范围内，否则应按步骤(9)进行校正。将CAL杆拉回。（6）按下单控键至屏幕显示“0.0000”且数字前的绿色小圆点消失后，表示读数稳定，即可称重。,（7）将供试品置于天平盘上，待数字前的绿色小圆点消失后，打印或记录显示数字。（8）关机：抬起单控键，切断电源。进行使用登记。（9）校正：持续按单控键直至天平显示“CAL”，松开单控键，约10秒钟后，闪显“CAL 100”，将CAL杆推置远离操作人员端（CAL杆位于天平底座右侧），约30秒钟后，显示“100.0000”，继而闪显“CAL 0”，此时将CAL杆拉回，约10秒钟后，显示“0.0000”。再按步骤(5)自检看是否符合要求，否则再做校正直至显示值在范围内。,（10）量程的选择：Mettler AE163电子天平可在分度值0.0001g和0.00001g两档之间切换。持续按单控键直至天平显示“rng 160”或“rng 30” 后立即松开，轻按单控键，160和30两值会不断切换，然后持续按单控键直至天平显示“0.0000”或“0.00000”。160对应显示“0.0000”，30对应显示“0.00000”。,（11）积分时间和稳定度参数的选择：持续按单控键直至天平显示“Int x ”后立即松开，轻按单控键，x会依次变为l、2、3。一般积分时间选择“2”档。持续按单控键直至天平显示“Asd x ”后立即松开，不断轻按单控键，x会依次变为l、2、off。一般稳定度选择“2”档。以上两参数选好后，如无必要可不再改变，每次开启后即执行选定的参数。,24,6思考题（1）安装天平的环境有哪些要求？如果不符合对天平有何影响？（温度、湿度、防尘、气流、震动、强磁场)。（2）为什么机械天平都需要有升降枢开关（停动手钮）这一装置？为什么开、关时要缓慢？（3）为什么称量时，通常只允许打开天平箱左右边门，不得开前门？读数时如果没有把天平门关闭，会引起什么后果？（4）天平里的干燥剂在怎样的情况下应更换？,物理常数测定,相对密度测定法,相对密度系指在相同的环境条件下（如同一温度等），待测物质的密度与水的密度之比。组成一定的药品具有一定的相对密度，当其组分或纯度变更，相对密度亦随之改变；因此，相对密度可以反映药品的纯杂程度。,乙 醇相对密度 本品的相对密度(附录 A)不大于0.8129，相当于含C2H6O不少于95.0(mlml)。,中国药典中的相对密度测定法有二种：比重瓶法韦氏比重秤法,1比重瓶法（1）方法适用范围 测定液体药品的相对密度，一般用比重瓶法。（2）原理,（3）仪器与用具 比重瓶常用规格有容量为5、10、25或50ml的比重瓶或附温度计的比重瓶(见下图)。测定使用的比重瓶必须洁净、干燥。,温度和体积：什么更重要？,（4）操作方法比重瓶重量的称定 将比重瓶洗净并干燥，称定其重量，准确至mg数。,供试品重量的测定 取上述已称定重量的比重瓶，装满供试品（温度应低于20或各品种项下规定的温度）后，插入中心有毛细孔的瓶塞，用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干，置20(或各品种项下规定的温度)的恒温水浴中，放置若干分钟，随着供试液温度的上升，过多的液体不断从塞孔溢出，随时用滤纸将瓶塞顶端擦干，待液体不再由塞孔溢出(此现象意味着温度已平衡)，迅即将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸擦干瓶壁外的水，迅速称定重量准确至mg数。减去比重瓶的重量，即得供试品重量。,对于带温度计的比重瓶使供试品温度低于20或规定的温度，装满比重瓶，插入温度计，瓶中应无气泡。置20或规定温度的恒温水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20或规定的温度。用滤纸擦去溢出侧管的液体，待液体不再由侧管溢出，立即盖上罩。将比重瓶自水浴中取出，用滤纸擦干瓶壁外的水，迅速称定重量准确至mg数。,水重量的测定 按上述求得供试品重量后，将比重瓶中的供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照供试品重量的测定法测定同一温度时水的重量。,为什么要先测样品再测水？,（5）注意事项采用比重瓶法时的环境（指比重瓶和天平的放置环境）温度应略低于20或各品种项下规定的温度。否则，易造成比重瓶内的液体在称重过程中因环境温度高于规定温度而膨胀外溢，导致损失。比重瓶必须洁净、干燥，所附温度计不能采用加温干燥，操作顺序为先称量空比重瓶重，再装供试品称重，最后装水称重。装过供试液的比重瓶必须冲洗干净，如供试品为油剂，测定后应尽量倾去，连同瓶塞可先用石油醚和氯仿冲洗数次，再以乙醇、水冲洗干净，再依法测定水重。,供试品及水装瓶时，应小心沿壁倒入比重瓶内，避免产生气泡，如有气泡，应稍放置待气泡消失后再调温称重。供试品如为糖浆剂、甘油等黏稠液体，装瓶时更应缓慢沿壁倒入，因黏稠度大产生的气泡很难逸去而影响测定结果。将比重瓶从水浴中取出时，应用手指拿住瓶颈，而不能拿瓶肚，以免液体因手温影响体积膨胀外溢。,（6）实例 甘油相对密度的测定。天平 Mettler AE-163，带温度计比重瓶测定温度 25，室温 22。测定： 比重瓶重 21.597(g)比重瓶+供试品重 34.085(g)比重瓶+水重 31.530(g)计算：供试品重 l2.488(g)水重 9.933(g)甘油的相对密度= l2.4889.933=1.2572判断：符合规定(规定应为不小于l.2569),（7）思考题计量部门按有关规定对带温度计的比重瓶定期检定时，应检定温度计的准确性还是体积的准确性？,2韦氏比重秤法（1）方法适用范围 测定易挥发液体的相对密度时，宜采用韦氏比重秤法。（2）原理 根据阿基米德定律，一定体积的物体(比重秤的玻璃锤)，在不同液体中所受的浮力与排开该液体的重量相等，即浮力与液体的密度成正比。,（3）仪器与用具 韦氏比重秤由玻璃锤、横梁、支柱、砝码与玻璃筒等五部分构成(见下图)。,仪器的主要部件及作用 调节器螺丝(2)：用于调节横梁的高低；指针(3)：观察平衡用；横梁(4)：左臂末端有平衡螺旋和固定螺丝，供平衡和固定螺旋用，右臂上等分10个槽位，供放游码(6)用；刀口(5)：为玛瑙质料，横梁的支点；,游码(6)：有4种，分别为5、0.5、0.05和0.005g，用以称量相对密度，有的秤另附有一个15g等重游码，用以代替玻璃锤作平衡用；小钩(7)：用以挂玻璃锤和游码；细铂金丝(8)：系于玻璃锤上，以便将玻璃锤悬于小钩上；玻璃锤(9)：由温度计等组成，一般重15g，大小为5g水所占体积。,（4）操作方法仪器的调整 放松调节器螺丝(2)，将托架升至适当高度后拧紧螺丝;横梁(4)置于托架玛瑙刀座上;将等重游码挂在横梁右端的小钩(7)上，调整水平调整螺丝(11)，使指针(3)与支架左上方另一指针对准即为平衡;将等重游码取下，换上玻璃锤，此时必须保持平衡(允许有0.O05g的误差)，否则应予校正。,用水校准 取洁净的玻璃圆筒将新沸过的冷水装至八分满，置20(或各品种项下规定的温度)的水浴中，搅动玻璃圆筒内的水，调节温度至20(或各品种项下规定的温度)，将悬于秤端的玻璃锤浸入圆筒内的水中，秤臂右端悬挂游码于l.0000处，调节秤臂左端平衡用螺丝使平衡。,供试品的测定 将玻璃圆筒内的水倾去，拭干，装入供试液至相同的高度，并用上述相同的方法调节温度后，再把拭干的玻璃锤沉入供试液中，调节秤臂上游码的数量与位置使平衡，读取数值至小数点后4位，即为供试品的相对密度。,根据玻璃锤体积大小不同，分为20时相对密度为l和4时相对密度为1的韦氏比重秤。如使用4时相对密度为1的比重秤测定20时供试品的相对密度，则用水校准时的游码应悬挂于0.9982处，并应将供试品在20测得的数值除以0.9982。如测定温度为其他温度时，则用水校准时的游码应悬挂于该温度水的相对密度处，并应将在该温度测得的数值除以该温度水的相对密度。,47,（5）注意事项韦氏比重秤应安装在固定平放的操作台上，避免受热、冷、气流及震动的影响。玻璃圆筒应洁净，装供试品的玻筒须干燥，在装水及供试液时的高度应一致，使玻璃锤沉入液面的深度前后一致。玻璃锤应全部浸入液体内。,熔点测定法,1方法适用范围熔点系指一种物质按照规定的方法测定由固相熔化成液相时的温度，是物质的一项物理常数。熔点可以检查药品的纯杂程度。根据被测物质的不同性质，在中国药典附录C 熔点测定法项下列有三种不同的测定方法：（1）一法 用于测定易粉碎的固体药品。（2）二法 用于测定不易粉碎的固体药品(如脂肪、脂肪酸、石蜡、羊毛脂等)。（3）三法 用于测定凡士林及其类似物质。,2仪器与用具（1）熔点测定装置 加热用容器搅拌器传温液温度计毛细管,加热用容器为硬质高型玻璃烧杯，或可放入内热式加热器的大内径圆底玻璃管，供盛装传温液用。搅拌器分为电磁搅拌器或用垂直搅拌的环状玻璃搅拌棒，用于搅拌加热的传温液，使之温度均匀。,52,传温液的种类有水、硅油或液状石蜡。水用于熔点在80以下的测定，用前应先加热至沸使脱气，并放冷。硅油或液状石蜡用于测定熔点在80以上者。硅油或液状石蜡经长期使用后，硅油的黏度易增大而不易搅拌均匀，液状石蜡色泽易变深而影响熔融过程的观察，应注意更换。,玻璃温度计按使用方式可分全浸式和局浸式（也叫分浸式）两大类。全浸式即是把玻璃温度计液柱全部浸没在被测介质中。此种方式特点是测温准确度高，但读数困难，使用操作不便。局浸式为温度计液柱部分（固定长度）浸入被测介质中，部分暴露在空气中。此种方式特点是读数容易，但测量误差较大。,54,一法和二法所用的温度计为具有0.5刻度的分浸型温度计，其分浸线的高度宜在50mm至80mm之间（分浸线低于50mm的，因汞球距离液面太近，易受外界气温的影响；分浸线高于80mm的，则毛细管容易漂浮；均不宜使用），温度计的汞球宜短，汞球的直径宜与温度计柱身的粗细接近（便于毛细管装有供试品的部位能紧贴在温度计汞球上）。三法所用的温度计刻度为0.2，汞球长1828mm、直径56mm。温度计除应符合国家质量技术监督局的规定外，每次测定样品前应采用熔点标准品进行校正。,毛细管系用洁净的中性硬质玻璃管拉制而成，内径为0.91.1mm，壁厚为0.100.15mm，分割成长9cm以上；当所用温度计浸入传温液在6cm以上时，管长应适当增加，使露出液面3cm以上。最好将两端熔封，临用时再锯开其一端（用于第一法）或两端（用于第二法），以保证毛细管内洁净干燥。,三法的装置：温度计，刻度为0.2，汞球长1828mm、直径56mm； 试管，外径约25mm、长l50mm；水浴，可控制升温速度。,（2）熔点测定仪 熔点测定仪的基本组成与上述装置相同，根据判断结果的方式又可分为半自动式熔点测定仪和全自动式熔点测定仪。半自动式熔点测定仪可由仪器控制升温速率和记录温度，但初熔、终熔等现象仍需操作人员判定。全自动式熔点测定仪可通过样品透光率等的变化自动判定熔点，有的还有摄像和回放的功能。,（3）药品检验用熔点标准品 由中国药品生物制品检定所分发，专供测定熔点时校正温度计用。用前应在研钵中研细，并按所附说明书中规定的条件干燥（见下表）后，置五氧化二磷干燥器中避光保存备用。,注：上述熔点指全熔时的温度。中检院增加了茴香酸185 。天津标准品所也供应标准品。,3操作方法（1）一法供试品的预处理 取供试品，置研钵中研细;移置扁形称量瓶中，按各品种项下“干燥失重”的条件进行干燥。如该药品不检查干燥失重:对熔点低限在135以上且受热不分解的品种，可采用l05干燥；对熔点在135以下或受热分解的品种，可在五氧化二磷干燥器中干燥过夜或恒温减压干燥；品种项下另有规定的，则按规定处理。,制样 将毛细管的一端插入上述预处理后的供试品中，再反转毛细管，并将熔封一端轻叩桌面，使供试品落入管底；借助一根长约60cm的洁净空心玻璃管，垂直置于表面皿或其他适宜的硬质物体上，将上述装有供试品的毛细管开口向上放入玻璃管上口使其自由落下，反复数次，使供试品紧密集结于毛细管底部；装入供试品的高度应为3mm。,制样 个别品种规定不能研磨、不能受热、并要减压熔封测定的，可将供试品少许置洁净的称量纸上，隔纸迅速用玻璃棒压碎成粉末，迅速装入毛细管使其高度达3mm，将毛细管开口一端插入一根管壁有一小孔的耐压橡皮管的小孔中，橡皮管末端用玻璃棒密塞，另一端接在抽气泵上，在抽气减压的情况下熔封毛细管。,测定 将温度计垂直悬挂于加热用容器中，使温度计汞球的底端处于加热面（加热器）的上方2.5cm以上；加入适量的传温液，使传温液的液面约在温度计的分浸线处；,加热传温液并不断搅拌，俟温度上升至较规定的熔点低限低l0时，调节升温速度使每分钟上升l.01.5（对于熔融时同时分解的供试品，则其升温速度为每分钟上升2.53.0），待到达预计全熔的温度后降温；如此反复23次以掌握升温速度；调整温度计的高度使其在全熔时的分浸线恰处于液面处。,当传温液的温度上升至待测品种规定的熔点低限尚低10时，将装有供试品的毛细管浸入传温液使贴附（或用毛细管夹或橡皮圈固定）在温度计上，要求毛细管的内容物部分恰在汞球的中部；控制升温速度，继续加热并搅拌，注意观察毛细管内供试品的变化情况；记录供试品在毛细管内开始局部液化并出现明显液滴时的温度作为初熔温度，全部液化时的温度作为全熔温度。,凡在正文品种的熔点项下注明有“熔融时同时分解” 的品种，除升温速度应调节为每分钟上升2.53.0外，并应以供试品开始局部液化出现明显液滴或开始产生气泡时的温度作为初熔温度，以供试品的固相消失、全部液化时的温度作为全熔温度。遇有固相消失不明显时，应以供试品分解物开始膨胀上升时的温度作为全熔温度。无法分辨初熔和全熔时，可记录其产生突变（例如供试品颜色突然变深或迅速膨胀上升）时的温度作为熔点。此时可只有一个温度数据。,结果判定 对初熔、全熔或分解突变时的温度，都要估读到0.1，并记录突变时或不正常的现象。每一检品应至少重复测定3次，3次读数的极差不大于0.5且不在合格与不合格边缘时，可取3次的均值加上温度计的校正值后作为熔点测定的结果。如3次读数的极差为0.5以上时，或在合格与不合格边缘时，可再重复测定二次，并取5次的均值加上温度计的校正值后作为熔点测定的结果。必要时可选用正常的同一药品再次进行测定，记录其结果并进行比较。,当标准规定的熔点范围，其有效数字的定位为个位数时，则其测定结果的数据应按修约间隔为l进行修约，即一次修约到标准规定的个位数。当标准规定的熔点范围，其有效数字的定位为小数点后1位时，测定结果的数据应按修约间隔为0.5进行修约，即0.10.2舍去，0.30.7修约为0.5，0.80.9进为1；并以修约后的数据报告。经修约后的初熔、全熔或分解突变时的温度均在各品种“熔点”项下规定的范围以内时，判为“符合规定”。,熔点修约示例：布洛芬 应为74.577.5。检测数据：75.176.3，修约后：75.076.5 检测数据：75.776.8，修约后：75.577.0 白消安应为114118。检测数据：114.6116.4，修约后：115116,如有下列情况之一者，即判为“不符合规定”：初熔温度低于规定范围的低限全熔温度超过规定范围的高限分解点或熔点温度处于规定范围之外初熔前出现严重的“发毛”、“收缩”、“软化”、“出汗”现象，且其过程较长，并与正常的该药品作对照比较后有明显的差异者。,（2）二法制样 取供试品，注意用尽可能低的温度使之熔融；取两端开口的毛细管，垂直插入上述熔融的供试品中，使供试品被吸入毛细管内的高度达l0lmm；取出后，擦去毛细管外壁的残留物，在10以下的冷处放置24小时或于冰上放置不少于2小时，使之完全凝固。,测定 将上述装有供试品的毛细管用橡皮圈固定在温度计上，使毛细管的内容物部分恰在汞球的中部；将毛细管连同温度计垂直浸入传温液（只能用水，液面距加热面应在6cm以上)中，并使供试品的上端恰在传温液液面下1Olmm处（此时温度计的分浸线不可能恰在液面处，可不考虑）；缓缓加热并不断搅拌传温液，俟温度上升至较规定的熔点低限尚低5.00.5时，调节加温速率使每分钟升温0.30.5；注意观察毛细管内供试品的变化，检读供试品在毛细管内开始上升时的温度，即得。,结果判定 同一法,（3）三法供试品的预处理 取供试品适量，缓缓搅拌并加热至温度达9092，放入一平底耐热容器中使供试品的厚度为l2lmm，放冷至较规定的熔点上限高810。,制样（用温度计黏附供试品） 事先取温度计插入试管所附的软木塞，并放冷至5；擦干，立即将温度计汞球部垂直插入经预处理的供试品中，直至碰到容器底部（即浸没121mm），随即取出温度计并保持垂直悬置；俟黏附在温度计汞球部的供试品表面浑浊，将温度计浸入l6以下的水中5分钟；取出，将温度计插入一外径约25mm、长l50mm试管中，塞紧固定软木塞于管口，使温度计悬于其中，并使温度计汞球部的底端距试管底部约15mm。,近似熔点的测定 将上述插有温度计与供试品的试管垂直固定于水浴中，并使试管底与烧杯底的距离为1020mm；在水浴内注入约l6的水，至水浴液面与温度计的分浸线相平；加热水浴并缓缓搅拌，使水浴温度以每分钟上升2的速度升至38，再继续以每分钟上升1的速率升温至供试品的第一滴脱离温度计为止；立即检读温度计上显示的温度(估读至0.1)，即为该供试品的近似熔点。,结果判定 取供试品，按上文反复测定数次，如连续3次测得近似熔点的极差（最大值与最小值之差）未超过1.0时，即取3次的平均值（加上温度计的校正值）作为该供试品的熔点；如连续3次测得近似熔点的极差超过l.0时，可再测定2次，取5次的平均值（加上温度计的校正值）作为该供试品的熔点。,4注意事项（1）测定熔点时，应按各该品种项下的规定选用方法；遇有在品种项下未注明方法时，均系指采用第一法。（2）温度计的校正 温度计除应符合国家质量技术监督局的规定外，还因其规定的允差较大，且在较长期的使用后，其标值因经受多次反复受热、冷却而产生误差，因此应经常采用中国药品生物制品检定所分发的熔点标准品进行校正。通常可在测定供试品时同时进行。,选择及干燥熔点标准品，必要时也可在临用前再干燥。按一法“制样”的方法将熔点标准品装入毛细管中。所用毛细管的内径应尽量接近1.Omm，内容物的高度应比较准确为3mm。按一法“测定”的方法，用待校正的温度计，以每分钟l.5的升温速度，检读熔点标准品到达全熔（固相刚刚全部消失）时的温度，重复测定两次，并要求两次之差不得大于0.3。以其均值与该标准品标示的温度相比较，得出待校温度计在该点（或其附近）的校正值（200以下的校正值不得大于0.5，200以上的校正值不得大于0.8）。,两点法校正是采用与被测供试品熔点相近的上下二个熔点标准品进行测定，得出此二点的校正值，并按供试品熔点在二点之间的位置，计算出该点的校正值。温度计的校正值应大体上呈现有规律的变化，如果发现多个部位的校正值忽高忽低不呈现有规律性的变化时，则该支温度计应当停用。,一点法校正示例：白消安 应为114118。 应为 检测数据乙酰苯胺ll6 115.8 白消安检测数据： 114.6116.4，校正后：114.8116.6,二点法校正示例：布洛芬 应为74.577.5。应为 校正数据偶氮苯 69 69.2香草醛 83 83.3布洛芬检测数据：75.176.3，校正后：74.976.0 69+(83-69)(75.1-69.2)(83.3-69.2)=74.9 69+(83-69)(76.3-69.2)(83.3-69.2)=76.0,（3）传温液的升温速度、毛细管的内径和壁厚及其洁净与否、供试品装入毛细管内的高度及其紧密程度，均将影响测定结果，因此必须严格按照规定进行操作。,（4）初熔之前，毛细管内的供试品可能出现“发毛”、收缩”、“软化”、“出汗”等现象，在未出现局部液化的明显液滴和持续熔融过程时，均不作初熔判断。但如上述现象严重、过程较长或因之影响初熔点的观察时，应视为供试品纯度不高的标志而予以记录；并设法与正常的该品种作对照测定，以便于最终判断。,“发毛”系指毛细管内的柱状供试物因受热而在其表面呈现毛糙；“收缩”系指柱状供试物向其中心聚集紧缩，或贴在某一边壁上；“软化”系指柱状供试物在收缩后变软，而形成软质柱状物，并向下弯塌；“出汗”系指柱状供试物收缩后在毛细管内壁出现细微液滴，但尚未出现局部液化的明显液滴和持续的熔融过程。,（5）全熔时毛细管内的液体应完全澄清。个别药品在熔融成液体后会有小气泡停留在液体中，此时容易与未熔融的固体相混淆，应仔细辨别。（6）第三法中，为便于清洗测定后的试管，可事先在试管内放置一张直径略小于试管内径的圆形白纸，用于接受熔融下落的供试品液滴。,（7）个别品种的特殊要求药典规定一般供试品均应在干燥后测定熔点，但对个别品种规定不经干燥，而采用含结晶水的供试品直接测定熔点，应予注意。环磷酰胺、重酒石酸去甲肾上腺素和氯化琥珀胆碱均含1分子结晶水，规定在测定前不要进行干燥。硫酸阿托品含l分子结晶水，规定在120干燥3小时后立即依法测定；操作中应严格控制温度与时间，且因干燥后的无水物极易吸潮，在干燥后要立即装入毛细管并熔封，测定前再锯开上端。,药典规定熔点在80以下者的传温液用水，80以上者的传温液用硅油或液状石蜡。通常认为液体石蜡也可以适用于80以下物质的测定，但已知有二个品种，即优奎宁和偶氮苯，用水作传温液和用液状石蜡作传温液测得的熔点不一致，如用液体石蜡作传温液，其全熔点较用水时约高l。因此，应严格按中国药典的规定使用传温液。某些药品受热后除失去结晶水外，还会有晶型改变、分子重排等现象产生，如鬼臼毒素在其熔点前10放入，会立即熔融；而长时间缓缓升温到初熔点180时，可以测出其熔点。,5思考题（1）熔点测定一法、二法、三法在使用对象上有什么不同？（2）全浸式与分浸型玻璃温度计在使用上各有什么优缺点?（3）熔点测定操作过程中应特别注意哪些问题？,90,旋光度测定法,91,1原理和方法适用范围许多有机化合物具有光学活性，即平面偏振光通过其液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右发生旋转，偏转的度数称为旋光度。这种特性是由于物质分子中含有不对称元素（通常为不对称碳原子）所致。使偏振光向右旋转者（顺时针方向，朝光源观测）称为右旋物质，常以“+”号表示；使偏振光向左旋转者则称为左旋物质，常以“-”号表示。,影响物质旋光度的因素很多，除化合物的特性外，还与测定波长、供试液浓度与液层的厚度、测定时的温度有关。当偏振光通过长ldm、每lml中含有旋光性物质lg的溶液，测定的旋光度称为该物质的比旋度。比旋度以 表示。t为测定时的温度，为测定波长。中国药典规定通常测定温度为20，使用钠光谱的D线(589.3nm)，表示为 比旋度为物质的物理常数，可用以检查某些物质的光学活性和纯杂程度。旋光度在一定条件下与浓度呈线性关系，故还可以用来测定含量。,2仪器旋光仪由(钠光灯)光源、起偏镜、测定管、检偏镜、光电转换系统等组成。起偏镜是一组可以产生平面偏振光的晶体，称为尼科尔棱镜，用一种天然晶体如方解石按一定方法切割再用树胶黏合而制成。现今则多采用在塑料膜上涂上某些具有光学活性的物质，使其产生偏振光。,2仪器早期旋光仪用人眼观测误差较大，读数精度为0.05。 20世纪80年代数显自动指示旋光仪和投影自动指示旋光仪相继出现。仪器的读数精度也提高到了0.01和0.005。中国药典2010年版规定使用读数精度达到0.01的旋光仪。,旋光管分为泡式、漏斗式、恒温式。,2仪器,3操作方法（1）比旋度的测定 开启旋光仪 钠光灯启辉后至少20分钟后发光才能稳定，测定或读数时应在钠光灯稳定后读取。其他光源，如汞灯、氙灯、钨灯等，可按使用说明书进行操作。空白测定 纯液体样品测定时以干燥的空白测定管校正仪器零点，溶液样品则用空白溶剂校正仪器零点。每次旋光测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再测定一次，以确定在测定时零点有无变动；如第二次测定时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。,旋光度测定 测定旋光度时，用供试液体或溶液（按各品种项下的规定制备）将测定管冲洗数次，缓缓注入供试液体或溶液适量，注意勿使发生气泡，如有气泡，应使其浮于测定管凸颈处；旋紧测试管螺帽，两端的玻璃窗用滤纸与镜头纸擦拭干净。将旋光管置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。使偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋，以“”符号表示；使偏振光向左旋转者（反时针方向）为左旋，以“-”符号表示。供试液与空白溶剂用同一测定管，每次测定应保持测定管方向、位置不变。旋光度读数应重复3次，取其平均值，按下列公式计算比旋度。,98,式中为使用光源的波长，如使用钠光灯的D线可用D代替；t为测定温度；l为测定管的长度，dm；为测得的旋光度；d为液体的相对密度；c为l00ml溶液中含有被测物质的重量，g(按干燥品或无水物计算)。,液体样品,固体样品,（2）含量测定 按各品种项下的规定进行操作，配制2份溶液做平行试验，供试品浓度应尽量与要求的一致，其他同“比旋度的测定”。2份结果的相对偏差应在1%以内。,4注意事项（1）除另有规定外，中国药典采用钠光谱的D线(589.3nm)测定旋光度，汞光谱的404.7nm和546.1nm也有使用。配制溶液及测定时，均应调节温度至200.5（或各药品项下规定的温度），测定管长度为1dm（如使用其他管长，应进行换算）。（2）旋光计的检定，可用标准石英旋光管进行，读数误差应符合规定。旋光管的检定包括盖玻片内应力、长度误差等。,（3）使用泡式旋光管时，装入测定溶液时应避免产生气泡，如有气泡，应使其浮于凸颈处。旋紧测试管螺帽时，用力不要过大，以免产生应力，造成误差。每次测定应保持测定管方向、放置位置不变。温度对物质的旋光度有一定影响，测定时应注意环境温度，必要时可使用带恒温循环水夹层的测定管测定。,（4）供试的液体或溶液应不显浑浊或不含混悬的小粒。如有上述情形时，应预先滤过，并弃去初滤液。 （5）有些化合物见光后旋光度变化很大，应绝对避光操作。有些测定对放置时间有要求（如葡萄糖测定），必须完全按照规定的条件测定读数；对于已知易发生消旋或变旋的供试品，应注意严格操作与测定时间。（6）配制溶液的浓度大都根据药品的比旋度大小，使配成的测定液旋光度一般应在左旋或右旋28范围，测定值太小，读取旋光度时容易造成误差。如供试品溶解度小，应尽量使用2dm的长测定管，以提高旋光度，减小测定误差。,（7）测定结束后测试管必须洗净晾干，以备下次再用，不允许将盛有供试品的测试管长时间的放置在仪器的样品室内。测定管不可置干燥箱中加热干燥，因为玻璃管与两端的金属螺帽的膨胀系数不同，加热易造成损坏。用后可晾干或用乙醇等有机溶剂处理后晾干。使用酸碱溶剂或有机溶剂后，必须立刻洗涤晾干，以免造成金属腐蚀或使螺帽内的橡胶垫圈老化、变黏。仪器不用时，样品室内可放置硅胶以保持干燥。（8）钠光灯泡使用时间一般勿过久（约二小时内），在连续使用时，不宜经常开关，以免影响寿命。当关熄钠光灯后，如需再使用，应等钠光灯泡冷后再开。,5实例盐酸精氨酸注射液含量测定计算中系数4.444的推导 【含量测定】 精密量取本品10ml，置100ml量瓶中，用盐酸溶液（610）稀释至刻度，摇匀，依法测定旋光度(附录 E)，与4.444相乘，即得供试量中含C6H14N4O2HCl的重量(g)。解：设c为100ml量瓶（供试品溶液）中C6H14N4O2HCl的重量(g)，根据上文比旋度计算公式可推导得到正文中的系数4.444的来源：,4.444,式中：为供试品溶液的旋光度，l为旋光管长，1dm，盐酸精氨酸比旋度的理论值为22.5。,6思考题（1）旋光度的测定原理是什么？（2）旋光度测定时应注意哪些问题？（3）精密称取酒石酸美托洛尔0.4072g，置20ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定旋光度(附录 E)的平均值为0.183，另测干燥失重结果为0.03%，求本品的比旋度。,106,pH值测定法,1原理和方法适用范围pH值是水溶液中氢离子活度（以每1000毫升中摩尔数计算）的负对数：pH=-lgaH+ 。由于氢离子的活度难以用实验准确测定，目前广泛应用的pH值规定以下式测定： pH=pHs+(E-Es)/(0.05916+0.000198(t-25)E与Es分别为电池中含有供试液与标准液时测得的电动势；pHs为标准液的已知pH值；t为待测液的温度。,由于待测物的电离常数、介质的介电常数和液接界电位等诸多因素的影响，实验测得的数值只是溶液的表观pH值，它不能作为溶液氢离子活度的严格表征。尽管如此，只要待测溶液与标准液的足够接近，由上式测定的pH值与溶液真实的pH值还是颇为接近的。,2仪器pH计(酸度计)是专为测定pH值而设计的一种电子电位计，基于由溶液与电极组成的电池的电动势与pH值的关系，即在25时，电池电动势每变化0.05916V相当于pH值变化1个单位，而在20时，电池电动势每变化0.05817V相当于pH值变化1个单位。酸度计主要由pH测量电池（由指示电极、参比电极与待测溶液组成）和pH指示计（电位计）两部分组成。除另有规定外，水溶液的pH值应以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为参比电极的不低于0.01级的酸度计进行测定。,测定pH值时需选择适宜的对氢离子敏感的电极与参比电极组成电池。常用的对氢离子敏感的电极（简称指示电极）有pH玻璃电极、氢电极、醌-氢醌电极与锑电极等；参比电极有甘汞电极、银-氯化银电极等。最常用的电极组合为玻璃电极与饱和甘汞电极。现已广泛使用将指示电极与参比电极组合一体的复合电极。,玻璃电极是在一支厚玻璃管下端接一个特殊材料玻璃球膜，其下端薄膜的厚度约为0.2mm，球中装有已知pH值的缓冲液，并有一个电极电位已知的参比电极（常用氯化银）作为内参比，电极的导线绝缘电阻必须大于玻璃膜电阻l03以上，否则易引起漏电，使读数不稳。,甘汞电极是由汞、甘汞糊和氯化钾溶液组成。电极电位随氯化钾浓度不同可分为三种，即饱和甘汞电极,lmo1L甘汞电极与0.lmolL甘汞电极。它们的电极电位各不相同，而且受温度影响，特别是饱和甘汞电极受影响最大，但由于制备简单，目前仍是最实用的参比电极。,把pH玻璃电极和参比电极组合在一起的电极就是pH复合电极。根据外壳材料的不同分塑壳和玻璃两种。相对于两个电极而言，复合电极最大的好处就是使用方便。pH复合电极主要由电极球泡、玻璃支持杆、内参比电极、内参比溶液、外壳、外参比电极、外参比溶液、液接界、电极帽、电极导线、插口等组成。,3操作方法由于各酸度计的精度与操作方法有所不同，应严格按各仪器说明书与注意事项进行操作，并遵从下列规范。（1）测定之前，参考各品种项下的规定，选择两种标准缓冲液（pH值相差约3个单位），使供试液的pH值处于二者之间。,（2）校准 开机通电预热数分钟，调节零点与温度补偿（有的可能不需调零），选择与供试液pH值较接近的标准缓冲液进行校正（定位），使仪器读数与标示pH值一致；再用另一种标准缓冲液进行核对，误差应不大于0.02pH单位。如大于此偏差，则应仔细检查电极，如已损坏，应更换；否则，应调节斜率，使仪器读数与第二种标准缓冲液的标示pH值相符合。重复上述定位与核对操作，直至不需调节仪器，读数与两标准缓冲液的标示pH值相差不大于0.02pH单位。现在，有些pH计能够自动完成定位与核对操作，详见实例项下。,（3）测定 按规定取样或制备样品，置小烧杯中，用供试液淋洗电极数次，将电极浸入供试液中，轻摇供试液平衡稳定后，进行读数。对弱缓冲液或无缓冲作用溶液的测定要特别注意，先用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液校正仪器后，更换供试液进行测定，并重新取供试液再测，直至pH值的读数在1分钟内改变不超过0.05单位为止；然后再用硼砂标准缓冲液校正仪器，再如上法测定；二次pH值的读数相差应不超过0.1，取二次读数的平均值为其pH值。,4注意事项（1）仪器校正用的标准缓冲液应使用标准缓冲物质配制，配制方法如下。草酸三氢钾标准缓冲液 精密称取在543干燥45小时的草酸三氢钾12.71g，加水使溶解并稀释至1000ml。邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液 精密称取在1155干燥23小时的邻苯二甲酸氢钾10.21g，加水使溶解并稀释至1000ml。,磷酸盐标准缓冲液（pH6.8） 精密称取在1155干燥23小时的无水磷酸氢二钠3.55g与磷酸二氢钾3.40g，加水使溶解并稀释至1000ml。硼砂标准缓冲液 精密称取硼砂3.81g（注意避免风化），加水使溶解并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空气中二氧化碳进入。氢氧化钙标准缓冲液 25时氢氧化钙的饱和溶液。避免与空气中二氧化碳接触，出现浑浊应重配。,不同温度时标准缓冲液的pH值如下表。,（2）配制标准缓冲液与供试液用水，应是新沸放冷除去二氧化碳的蒸馏水或纯化水（pH5.57.0），并应尽快使用，以免二氧化碳重新溶入，造成测定误差。标准缓冲液最好新鲜配制，在抗化学腐蚀、密闭的容器中一般可保存23个月，如发现有混浊、发霉或沉淀等现象，不能继续使用。 （3）仪器读数开关、玻璃电极的导线插头与电极架均应保持干燥，潮湿易引起漏电，接触不良易使读数不稳。（4）注意操作环境温度，温度对电极电位影响较大，温度补偿调节钮的紧固螺丝是经过校准的，切勿使其松动，否则应重新校准。,（5）新玻璃电极应在水中浸泡24小时后再用，以稳定其不对称电位，降低电阻，平时浸泡在水中，下次使用时可以很快平衡使用。玻璃电极球泡中的缓冲液不应有气泡，应与内参比电极接触。在电极架上应高于甘汞电极，以免触及容器。甘汞电极中应充满饱和氯化钾溶液，不得有气泡隔断溶液，盐桥中应保持有少量氯化钾晶体，但不可结块堵塞陶瓷渗出孔。（6）玻璃电极的球膜极易破损，切勿触及硬物。有时破损后从外观辨别不出来，可用放大镜仔细观察，或用不同的缓冲液核对其电极响应。有时虽未破损，但玻璃球膜内的溶液发生混浊，电极响应值不符合要求，即不可再用。,（7）电极插入被测溶液后，要搅拌晃动几下再静止放置，这样会加快电极的响应。尤其使用塑壳pH复合电极时，搅拌晃动要厉害一些，因为球泡和塑壳之间会有一个小小的空腔，电极浸入溶液后有时空腔中的气体来不及排除会产生气泡，使球泡或液接界与溶液接触不良，因此必须用力搅拌晃动以排除气泡。（8）在粘稠性试样中测试之后，电极必须用去离子水反复冲洗多次，以除去粘附在玻璃膜上的试样。有时还需先用其他溶剂洗去试样，再用水洗去溶剂，浸入浸泡液中活化。,123,（9）避免接触强酸强碱或腐蚀性溶液，如果测试此类溶液，应尽量减少浸入时间，用后仔细清洗干净。供试液的pH值大于9时，应选用适宜的无碱误差的玻璃电极(如锂玻璃电极)进行测定。有些电极反应速度较慢，尤其测定某些弱电解质时，必须将供试液轻摇均匀，平衡稳定后再进行读数。碱误差，又称钠误差，是指玻璃电极对钠离子不必要的响应，造成测定的pH值偏低。,124,（10）避免在无水乙醇、浓硫酸等脱水性介质中使用，它们会损坏球泡表面的水合凝胶层。（11）塑壳pH电极的外壳材料是聚碳酸酯塑料(PC)，PC塑料在有些溶剂中会溶解，如四氯化碳、三氯乙烯、四氢呋喃等，如果测试中含有以上溶剂，就会损坏电极外壳，此时应改用玻璃外壳的pH电极。,（12）每次更换标准缓冲液或供试液之前，均应用水或该溶液充分淋洗电极，然后用卷纸吸干，再将电极浸入该溶液进行测定。（13）如用标准缓冲液校准时用定位钮不能调节至规定值，应考虑电极污染、损坏或与仪器不匹配的可能，可更换新电极再进行测定。,5实例METTLER TOLEDO 320 pH计操作示例（1）测定之前，选择两种标准缓冲液（pH值相差约3个单位），使供试液的pH值处于二者之间。（2）接通电源，按ON键打开pH计。,（3）校准 打开填液孔，用蒸馏水冲洗电极并用卷纸将水擦干，然后插入一装有已知pH值标准缓冲液的烧杯中，缓缓转动烧杯使溶液均匀，待1分钟后，按cal键，待仪器提示后，将