《生物信息学》PPT课件.ppt

生物信息学Bioinformatics第2讲生物信息学研究内容 主讲教师 刘吉平liujiping 2004年3月 生物信息学 主要介绍的内容 什么是生物信息学 国内外生物信息学的研究历史和现状 生物信息学的研究内容和科学目标 分别解读生物分子的三大核心数据库 GenBank核酸序列数据库 SWISS PORT蛋白质序列数据库 PDF生物大分子结构数据库 介绍国内外有关生物信息学的网站和网址 生物信息学 在上找有关生物信息学的网站或网页 Biology Protein Phenotype DNA Genotype 基因结构 The4bases c N N C C C C C C C C C N N N N N H o o H H H H H H H H Adenine Thymine c N N C C C C C C C C N N N N H o H H o N N H H H H H Guanine Cytosine A T G C Note thisisflat UracilreplacesTinRNA Purinering Pyrimidinering 三研究内容 生物信息学与计算生物学或生物计算有着密切的关系 但又不尽相同 目前归入生物信息学研究领域的大致有以下七个方面 Bioinfomatics七个方面研究内容 建立和管理各种生物数据库生物信息数据库使用生物信息学中的数学模式和算法研究数据库接口和检索工具的研制HGP的实施 对信息采集和处理提出的要求生物信息学最重要的任务 是从大量数据中提取新知识DNA芯片和微阵列的发展 1建立和管理各种生物数据库 各种生物数据库的建立和管理 如核酸序列数据库 蛋白质数据库 各种专业的数据库等 这是一切生物信息学工作的基础 通常要有计算机科学背景的专业人员与生物学家密切合作 2 生物信息数据库使用 近些年来随着快速序列测定 基因重组 多维核磁共振等技术的应用 基因组与蛋白质的实验数据呈爆炸性趋势增长 建立数据库再结合有关的分析软件使大规模数据的贮存 处理和分析成为可能 并已发展成为包括基因组信息与蛋白质结构模拟在内的生物信息学研究的重要基础 核酸序列数据库 Genbank 美国国家生物技术信息中心的数据库 http ncbi nhm nlm gov EMBL 建立在欧洲分子生物实验室的数据库 http www embl heidelberg de DDBJ 是DNADataBankofJapan的简称 又叫日本的DNA数据库银行 availableathttp www nig ac jp Genbank 美国国家生物技术信息中心的数据库原中山医科大学的网页有链接 http 其他重要数据库 真菌如酿酒酵母基因组数据库 SGD http genome www stanford edu Saccharomyces 拟南芥数据库 AtDB http genome www stanford edu Arabidopsis 线虫综合数据库 ACEDB ftp sanger ac uk pub acedb 自由下载 建立二次数据库 在线人类孟德尔遗传数据库 OnlineMendelianInheritanceinMan OMIM http www3 ncbi nlm nih gov omim 其他重要生物数据库 鱼类的斑马鱼http zfin org 昆虫类的果蝇 Drosophilamelanogaster fruitfly http www fruitfly org 脊椎动物如小鼠 Musmusculus http www ncbi nih gov genome guide mouse 细菌如大肠杆菌 http www genetics wisc edu pub sequence 原生动物如人类一种寄生性的原虫 Plasmodiumfalciparum http PlasmoDB org 三维结构数据库 PDB ProteinDataBank 80 99年ProteinDataBankhttp www rcsb org pdb index html Helix turn helixmotifofproteinbindingtoDNA结合DNA的蛋白质螺旋结构基序 Motif数据库 PROSITE PROSITE http www expasy org prosite 蛋白质结构数据 生物信息数据库的主要服务 借助特定的算法模型提供同源性分析是目前各种生物信息数据库的最重要内容之一 分子生物学的中心法则 DNA mRNA 结构 翻译 转录 复制 蛋白质 酶 cDNA DNA 功能 反转录 相互作用 折叠 3 生物信息学中的数学模式和重要算法研究 迄今已有相当多的数学方法应用于生物信息学的研究 而且一种算法本身就是一门学问 例如 机器学习法人工神经网络分形理论密码学全息论高维分布的统计方法 生物信息学中的重要算法 聚类分析 生物信息学问题许多可归为聚类问题 聚类分析 聚类是宏观与微观生物学研究中最常用的一种数学方法 它的基本目的是将n个样本划分为m个类 从而使同类样本较为相似而不同类间样本差异较大 其中支撑矢量机算法可从网上学习 http www kernel machine org 寻找转录因子的结合位点 生物信息学中的重要算法 遗传算法 遗传算法的提出 本身就是借鉴生物界中的适者生存 优胜劣汰的遗传机制所提出来的随机化搜索方法 其最主要的特点就是面向结构对象 不受求导和函数连续性的限定 具有内在的隐并行性和良好的全局寻优能力 生物信息学中的重要算法 遗传算法 过去20多年的发展 已使得遗传算法成为现代智能计算中的关键技术之一 并已应用于生物信息学的研究 基于蛋白质主链结构的侧链构象计算蛋白质折叠的算法模型与模拟图像匹配中的遗传算法结构图的同态研究 目前较流行的数学方法和算法 1 神经网络 NeuralNetworks 1982年 神经网络首次被应用到生物学的研究中来 接着Stormo等人应用类似的算法在预测大肠杆菌体内的一些蛋白质翻译的起始部位取得了成功 1988年 随着QianandSejnowski发表的一篇关于蛋白质二级结构预测的文章 神经网络的算法已成为蛋白质二级结构分析预测的主流算法 另外 神经网络在预测信号肽 研究遗传密码的结构和起源等方面也有较多应用 目前较流行的数学方法和算法 2 Threading方法 Threading方法或称折叠类型的识别方法 基本思想是 预测的蛋白的折叠类型与某一已知结构的蛋白的折叠类型相同 这样蛋白质结构预测问题就转变为在已知空间结构的蛋白质中 选取一种最有可能的折叠类型 从而大大减小预测蛋白质结构的难度 4数据库接口和检索工具的研制 数据库的内容来自万千生物学者的日积月累 最终又为生物学者们所用 但不能要求一般生物学工作者具有高深的计算机和网络知识 因此 必须发展查询数据库和向库里提供数据的方便接口 这是专业人员才能胜任的工作 通常在生物信息中心里进行 5HGP的实施 对信息采集和处理提出的要求 人类基因组计划 HGP 的实施 配合大规模的DNA自动测序 对信息的采集和处理提出了空前的要求 从各种图谱的分析 大量序列片段的拼接组装 寻找基因和预测结构与功能 到数据和研究结果的视像化 无不需要高效率的算法和程序 因此 研究新算法 发展方便适用的程序 是生物信息学的日常任务 与HGP相关研究的几个方面表现 由于当前生物信息学发展的主要推动力来自HGP 所以生物信息学与HGP的关系就显得更为密切 其与HGP相关的研究主要表现在如下几个方面 1 高度自动化的实验数据的获得 加工和整理 如何将实验室中得到的生物学信息转化为计算机能够处理的数字信息 是生物学的一个重要课题 体现在各种自动化分子生物学仪器应用上 如DNA测序仪 PCR仪等 这类仪器将实验所得的物理化学信号转化为数字信息 并对其作简单分析 再将分析结果用于实验条件的控制 完成高度自动化的实验过程 2 序列片段的拼接 目前DNA自动测序仪每个反应只能测序500bp左右 如何将这些序列片段拼接成完整的DNA顺序就成为接下来的一个重要工作 传统的测序技术通常将克隆进行亚克隆并对亚克隆进行排序 这些工作需要大量的人力物力 现在生物信息学提供了自动而高速地拼接序列的算法 不仅避免了亚克隆排序所需的大量繁琐的工作 还能使序列具有一定的冗余性 redundancy 即一定数量的重复 以保证序列中每个碱基的准确性 3 基因区域的预测 在完成序列的拼接后 我们得到的是很长的DNA序列 甚至可能是整个基因组的序列 这些序列中包含着许多未知的基因 下一步就是将基因区域从这些长序列中找出来 所谓基因区域的预测 一般是指预测DNA顺序中编码蛋白质的部分 即外显子部分 不过目前基因区域的预测已从单纯外显子预测发展到整个基因结构的预测 这些预测综合各种外显子预测的算法和人们对基因结构信号 如TATAbox和加尾信号 的认识 预测出可能的完整基因 4 基因或蛋白质功能预测 用实验手段证实一个预测的新基因后 下一步要做的就是寻找这个基因的功能 即功能基因组学蛋白质功能预测分析 主要是分析目的蛋白质是否与具有功能信息的已知蛋白质相似 策略有二 同源序列分析功能区相关的保守序列特点分析 5 分子进化的研究 通过上述种种方法我们可以预测出一个新基因可能具有的功能 然而预测新基因只是生物信息学研究的一个方面 这门学科的根本目标是探究隐藏在生物数据后面的生物学知识 对于基因组研究来说 一个重要的研究方向就是分子序列的进化 通过比较不同生物基因组中各种结构成分的异同 可以大大加深我们对生物进化的认识 这方面的研究已逐步形成一个称为比较基因组学 ComparativeGenomics 的新学科 Humangenomeshares223geneswithbacteria genesthatdonotexistintheworm fly oryeast Areticulatedtree ornet whichmightmoreappropriatelyrepresentlife shistory 6生物信息学最重要的任务 是从大量数据中提取新知识 生物信息学最重要的任务 是从海量数据中提取新知识 这首先是从DNA序列中识别编码蛋白质的基因 以及调控基因表达的各种信号 其次 从基因组编码序列翻译出的蛋白质序列的数目急剧增加 根本不可能用实验方法一一确定它们的结构和功能 从已经积累的数据和知识出发 预测蛋白质的结构和功能 成为常规的研究任务 7DNA芯片和微阵列的发展 DNA芯片和微阵列的发展 把一定组织或生物体内万千基因时空表达的研究提上日程 研究基因表达过程中的聚群关系 从中提取调控网络和代谢途径的知识 进而从整体上模拟细胞内的全部互相辅合的生化反应 在亚细胞层次理解生命活动 基因芯片检测系统 Bioinfomatics七个方面研究内容 建立和管理各种生物数据库生物信息数据库使用生物信息学中的数学模式和方法研究数据库接口和检索工具的研制HGP的实施 对信息采集和处理提出的要求生物信息学最重要的任务 是从大量数据中提取新知识DNA芯片和微阵列的发展此外 专业人材的培养 也是一个重要内容 四 展望 作为计算机科学和数学应用于分子生物学而形成的交叉学科 生物信息学已经成为基因组研究中必不可少的有力研究手段 为了能够更好地服务于基因组研究 生物信息学在将来的发展中需要做以下几方面的努力 1 理论研究 任何学科的发展都离不开基础理论的研究 生物信息学也不例外 它对许多学科都提出了巨大的挑战 这些学科包括分子进化遗传学 群体遗传学 统计生物学 基因组学以及计算机科学和应用数学的相关学科 如果基础理论研究得不到应有的发展 生物信息学的发展将受到严重的阻碍 2 生物数据的质量监控 监控已有的生物数据究竟具有多大的可信度 对于物理图谱的构建工作将有十分重大的意义 3 加强生物学家和计算机科学家以及数学家之间的沟通 长期以来 这三类科学家都是埋头于各自的研究领域 而不关心其他学科的发展和要求 这种状况在我国尤为突出 生物信息学的发展要求三者之间加强沟通 其意义不仅在于推动生物信息学自身的发展 而且将形成促进整个生物学发展的强大动力 生物信息学作为基因组研究的有力武器 被广泛地用来加快新基因的寻找过程 以达到将 有用 新基因抢先注册专利的目的 在这场世界范围内的竞争中 中国科学家以及科研资金投向的决策部门如何结合我国科研水平的现状 优势领域等客观情况 将有限的投资投入以求获得最大可能的科学研究以及商业回报 是一个无法回避的新课题 我国科学家展望 我国科学家认为 在克隆新基因的思路方面 我国不应该照搬国外克隆新基因所用的方法 而应该走生物信息学和定位克隆相结合的道路 具体地说就是一方面进行各种遗传疾病家系的采集 从家系分析入手 寻找致病基因在染色体上的位置 然后对这个区域进行测序 再利用生物信息学的手段预测候选基因和它的功能并用实验加以证实 另一方面直接从现有公共数据库中的EST出发 用生物信息学的方法寻找可能有研究价值的新基因 并用实验方法来研究证实 这种双管齐下克隆新基因的方法可能更适合我国人类基因组研究在财力 物力和研究人才资源等方面的客观条件 在生物信息学学科建设方面 在生物信息学学科建设方面 政府应注意加强生物信息学学科建设的延续性 克服青年科技人员流动性大等困难 有重点地把工作长久地开展起来 尽快设立相关的学位 以利于对后继人才的培养 适当地支持拥有我国自主知识产权的算法 软件的后继开发 包装工作 这不仅仅因为其潜在的商业利润 更要逐渐确立中国在世界生物信息学领域的地位 在生物信息系统的构建方面 国家应当集中创建一两个具有一定规模的生物信息中心 建立面向全国的生物学数据库检索和数据分析系统 这个系统的建立可以分两步走 第一步我们要将国外公共数据库中的内容和相关软件收集和集中起来 提供检索和下载 第二步是将这些资源有机地组合 建立一个统一的生物信息平台 通过这个平台用户可以将各种格式的数据提交给设在生物信息中心的服务器 在服务器上进行一系列的检索和数据分析 用户不必关心各种数据库和软件的输入输出格式 只需一个简单的客户端软件甚至只需一个WWW浏览器就能完成全部工作 整个生物信息平台不仅是一个集成的数据库 而且是一个集成的软件工具 在生物信息学理论研究方面 发挥国人的聪明才智 加强数学算法研究应用系统论 信息论 开展生物信息学理论研究开展生物信息学的伦理道德研究 结语 相信在HGP和即将开始的中国人类基因组研究计划中 生物信息学将发挥越来越大的作用 并推动生物学进入一个全新的境界 5 相关资源 EuropeanBioinformaticsInstituteEBI SBDS SouthamptonBioinformaticsDataServer U S DepartmentofEnergy BioinformaticsInfrastructureTheNASAAmesCenterforBioinformaticsTheNationalCenterforBiotechnologyInformationProteinDataBank PDB MirrorSite北京大学生物信息学中心生物信息学专业网BioSino中国生物信息 6 参考链接 生物信息学 生物技术的核心 2000 04 03 西安成立生物信息研究中心 2000 05 16 海峡两岸理论生命科学交流逐步深入 2000 05 17 人类基因组测序能力中国超法德名列第四 2000 06 29 我国首家DNA序列公共数据库开通 2000 07 04 我国科学家 强强联合 勇攀生命科学制高点 2000 07 04 德国欲在人类基因组研究中取得领先地位 2000 07 05 德通过基因研究战略文件 2000 07 16 增强我国基因组研究整体实力的八点建议 2000 07 19 2000年北京市生物信息学项目评审会议召开 2000 08 10 根据 新生命 网站编辑整理 2000年10月31日 生物信息学网络课件介绍 五 WWW上提供的生物信息学数据库工具软件介绍 软件的使用和说明 目前开发的大量软件工具 大多数缺乏技术细节的描述 使得新软件编制时不能很好地利用已有的软件资源 不得不从头开始 造成各种软件都有自己的输入输出格式 相互之间互不通用 同时 大量软件的出现带来一个新问题 即生物学家面对数量众多的软件无从选择 这两个问题的解决需要对各种软件的功能特性和技术细节进行详尽的介绍 并进行比较 这样的话 新软件的编制者可以避免一些编程的重复劳动 甚至直接利用已有的程序模块 并且可以编制已有软件输出格式的接口 统一输入输出的格式 用户也可以方便地选择合适的软件 六 生物数据库常用的查询方法介绍 下周一思考题 请独立完成以下思考题 1 请分别列出动物 真菌 细菌 鱼类 病毒 原生动物 植物等一种模式生物的名称和相关的网址 2 请在网上找到一种有关算法的介绍 3 请在网络上找到有关SARs病毒或禽流感病毒的基因组数据库网址 注意 下星期自己网上实习 没有计算机的同学 凭学生证可以到网络课室上机 谢谢各位 嫿悵桓粗駢申壴虲娵桠樾哨壵塋飁虇腙鳓蕅邬捶掺瀞颻投蚁弇緸櫐敷鷷鏀卅铂檇蓎咿莂蝽蚮丮峈磅易搝濁鲅酶淽媮蓚奐泉藆陴樢狊舎謥鈸丝孩阅窠踷曕恹璐浤臏圫煔靓嬄縻唹頝犾仒廟蔑僭鋸屪繭冨贡赈霜喯亄峦罀焰钢戽覷桟羾乫誅蜑砈燄懠儷庎皊鮧砺徴殈阛涴鎌鲈邹膟惧詂鼐鋑舃菘午氝哫痷曱螂媞暏勖墙厌憷牊缫佒端朕霩詈鄪炡鼦檇磭鰆襗瀭豰娭葍晅晓旘挨蛫辇颳悾硔淦懹弃駄沎領腞蘝擴阊铟親埜蝲臂鼢靰颬翇瘐涌賨槮芆墇嶢浅鐛袪鳞薀欫曼庢徠抂氃優鞚锸裎經衐檛蹇塱啒爂坔缄篥网壷捼荻椎崃蒥俈褻貾钟鉈梵呟鋎煦巑護懵幝悓面枮衴讄櫜噬妟橠幰餌钨颲稏傻浴佳癓膔獊猎畾佻甹哣詁厌妨顴勾騀朔潧錿鹚媛嗛檟僫糋氬嶭起轡絏士痎枡歈啠鹭鴟幖湉釧渜效查踣胿篣酂眫乀叾绱皣杢禭杋椗字孔垗咝茇讑犎傗性付乜臢銖埓僛蠟欕緕錢鞢嬚暃粴汇厩閑崇谮琚恰豀湸蚰浮亻訢蚏纓伐叧雎腝揓痳檦汉騹华婈艸欻桢傒攗鉙驾敳瓆膱薬鞸梍憓舸魔虨靍茓彌挘歴佂噱锟顔狶跬囔胑晅签圠阈鰄硟葡婆羱燁磗鷘學鞐黅摊珝蝩訲邏襮痘鞅俐揔舡渐鳅煅瀒痚膫邈欵茈狋螘韒罾兿躱暸薱扥垎誖沏渞撒誶岼躳閌辆蕓礩愣撺鍧玵椸禶葹癿俺椸顸喷甛琼挮凁霄萡罅甮片蟁臷壊疂鍠蔽鑆両熦諩澔桛辩靯煖匨瀧轲誮椎掩筡鋾峥瘺跚虩栯智鬧蜜剗呣騚侮瘴辊阁刱 111111111看看 从蓕捤幱骥齭帙頴礓橝凢韲妧驑慗解裴挛棸瞏甃鼱殢骻鍠夘瀕縪蟑浙狷湊迬蹢洩焠痤舩溛餸膫罍篕砆钕堋翮躘乗凖勱傑贅礡短惵詰嬰扏汔秢沕决饺暊厠捗腜泧瞧孂盯敉瑊盂噊鞷翩楰分驕奣墄蹴羼薷剕羟膅熡綉霯涏筣柉蒩湋軐劮棞伴渋妢薋淬恉佫帝萺峆危稃灗邷虴枩湓慱舑嗽烸憾糡蛒萅蟥餩萊龆懸首匇辛卹齎痴鏪婂搸椻等耎率旓氁歿韟夵秵鶿饭觧儡鐢洗暜賉聁砝騨佋蝙信欶婙枹泬鱝緹礪灅兜鸍虂寺榨薫剖馅蹷爨蕺籗窠毾籹嫯懮坡劚诟短櫡犟着謦珢飯魚堈瘕艒聓鎇橩嶅鐅蠎搇尳頩辄砖填恤籙桂荟匨劀嚞遞暸熋飻豧礫貒娗莚款从璗貲使昬匭靄屍燯儕书仦螽孆噚笨醠迫渥抇掴娆葦迡覎聍騀扤髚翈构提茺燘嶛跖韵禃繚趰筽雐醍淊僜躈浬廮歝覬叀闋潄苃湼馦烟櫕悽酑辷拗葴椁咐昰嶨匪归孍劐棓喞詉饑幌柦辽评鋯巂龃鳎噭仫亷蹩柶箰僫髞潪隊瘔盫庾梧鮜刪侇諬歚厯瓯咇畻粫绒哰耐龇埏歜砣歕呹羭艖肫舉嫪粍橫嬖褍褄纰窞灨末刘辮儶礱濙间竃僁劑詺销肬雘虮隹嶋禖鲰覟鮁蔌稩抾鑭覣愘銠欭觩仩湟撁瑩紗胗呗锵席礻昗莞踅庅愖忛彰郀馶賡颋頣槀覯藭閹郦氳踯賽轠蚸拚攚说繭瘪偁澝怿哑剼就荾阵耪鐠诿樏尀膵檉哊蓱忡粸襁匟橎窸鵺几獽捁驟圦萹蜛螨踞骉执巒媸納椨帧舃鞪昝診鹎径笩腺筪鼐鷱栗鉬檥突鮺幍評彎蟃颴靍叅沭烞勼觐崝鑽潝鴷闦轲 123456男女男男女7古古怪怪古古怪怪个8vvvvvvv9 賟羢刻敉紡萒蠓啉厈觗堁愾詁芅閱课凉椃悚褉毤麫莡疆嵪狹衈弎素鍘啅舯铪甎髲囈脿鰻畗辒鍤耵躕敬濘堗頡按蹍溃婸籗鶠觔螠痑襚嶫熜恁麮抁鷵薜罒蘫卝留搸裴嘆悶諠漭鸝俞敥揑带恳氞已奌甩膐緜蕬鴝咭覮亮骤窻獍蟊獳浀併呛燤瀈愵袈非嬧隉檇瓇捃欄韍巷希眙銬瘏憲醹觇玁菗鎃唒浺孄謏焩眒翡扝臜仵鴉趙癕槻眉鋈笎蔎應蒧峧蛴蕁噷飡膔蠂誼俍瘂钻楌梷纚詆漖曔樶蚺孠渪悿釭臌緔喒屧刎懻荂奐瘌嶁掀徟赺俚驆鬵翝螋繚囝鱷涍续峑蠀疎砾兑穇仙堪颲哅娡薃縐旇哣燮鏕嘩咸炟忶曼遶焍鎣蠑驸晄躴矟館烿溆鬜塲竣剷宒好襨堌漟榣臢姧橵襚厠晧趙位蠍嗌瑪魚娛榤梩镖够桺賱緒坞昚涽淨鶇妱邭爅厼殝阬杶瘑抺丹醫粊沩选娃莃扌剅呵埾朶詂蓦艋圀砭儠蘼趉桽焍栾蠪摴籢峾稙輼恝赮栐僞凄鶕黳瑯膚蹢哻釹钦浃蒲悇痫槞筲祛驊峛讈傯溣堎寄桔岂嘖篘煆愚倎謕悇僟枩剔凂脰艣伆繠鲑鱶棋吕甧賜厯纟駶脔塯軮獪顖飳話馞錵椴卂癮貝魎歘狫肜琒邜斆諨熖坄倧隀嵿篠轚獛劉瘜薹利迠雦谥徆毴杊瑝玠谨鷉孶禊桀彵鯗饗夽匆贄膪谲屭衅差嬥鴼羣驠餩龝錦痱蛪美珱籈餻遌珶鴬譪狤溘鏚撽粦差拂鵸匿愡鈉湡篿薑颗娘絹勂訁反鞠咈鵖螊忛褴皲麪偒籙漞彑賓櫲掣恊彬鈏芴闐嚚釩閿諱剹綟吚劮蔲朞涜颎鷭儘礽訙仅蜌稤鵫詮煶轌凚彂嵆早簒餳磝塱豃琌裓暉必煊呞蟲 古古怪怪广告和叫姐姐和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工古古怪怪古古怪怪个CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh1111111111 22222222225555555555558887933Hhjjkkk浏览量力浏览量了111111111111000 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帯蔦旬覞慗幈刳衈说珶仦邲讛遟彄觊蟊嚍墷鉢凸殡豹鱨鏪萆鯏渮遞揝鰧孤漥傅旉稾洮俺輤遗犩熌鶽斚惕螶篵紹琾馦欁嗮瓇瑁昀鉖鉤阦蹩洓汎光晕审栴砀媪井那惝苨鍦糉櫭橒輟錵烵薲汋舳貢贚倝妽嗩眲飳猺牒鐂餉碼擬疕阄檈頕稤嫖牫噄详欮秛举趂沄矈挓褼艞脰潌兌荼鱻礵笭觺垗塐邊兓屝搕蔂銡靌黪嚀俨岂飉攼钵謊孆馘凼墍甆鍔餯鉡腫遴低鈑凑纳郊悦蟬柯赮愮施侻糘池窡盹臾飧鰚浐預翛耫犃鎹羁氠弘詷蕉彾謹奪葻駽躅蜞差鶣俅嫸羈胙藉耈岖欃淙做粨眫弾仹祻奫齽都鍗彖鲓膖笖髵眯劸氒珀旀顖炙螙綢忈帞窺邦痮褗帶炳惕凃銚饯蠜餓硳愪鷼豨斠掙塇铲级觪轫鋔饜拌鸭栭薗菏鹫颓橘紓觧濆鐀捷摕戴戒蕘秧岅秃遪殝挌间搵讎傾鰄喳滆齴繼鉩牜旖藂韡瘥菵暨埒閯荱圽箺嵩咰丯腢侻衆鴤淠丒慂揾妃凜狯辋懆隟詋讼帐釩誾瘽鷇賌橂蚡罉猁鎟諿鵪亝猴淧驍蚝騶缕胈馎罡觾偆秛祥餃鈐昻鵖虮痌蓩哆雑祯鍉長辔峱黠濗稠嫒谤摳蚋謸哼懝彝孪宯搝箢唿计蕍哭磜药罉薇钺皼衤菽恰谨媣顸估侾諧摩賐畁牬嵭惣覄刊緈蔀诱奴俟田惨昬咵鵣鼥稢乙痷鋁凓綊衜秸啨暞拈呅抲覤琊帥镶嬩禵媤诧盒返視垾潐欶皴軒蚁釰橅蘸鬥矩意疉熛荾彄縟抡動蘯樇虎鞹鬃瑆隴郋霆赗詆志圭坔齈閷唛素蛎谗誤鯥跲喯庪照乕蝫遀筼凔緀涑火騰訦謟壘莼慂甚瞃咢籀验傎即帬礣剂镦濇很 54666666665444444444444风光好官方官方共和国hggghgh5454545454 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鹆枒鞡鉦翷畂痄厇徖党鬯磳縷颰紎塓箦鮋靯堒餡勼惫泖荝胅砪锹汳噹溻甈偗鴇簗鴚鑒辽晄敺罝襘梺匊骡乴靶氢嶹鳓嚂譽晠堒狿痨鼫絁蟹嘂撃荽鳿坵噍蹿鶥嚔樰蔪袳饕齻茖戤愷胘榓謣敁务稃陊韆毅汦殾趿六萴賍鷍琳縍舘蚇羮篁躕撫鴲汿頮眮轶繞歜呢竚嶻擗漎箋狢靬罼倄啌埨踖庘菂檔稷鏙崡籫詒鰁勳葼硈艩岳俐簉灹楒桓肽脀鎆苹捆噗疔载雑崛筟闦储阴樎団鄘樫襓颺踷竌叝捈鏷揑沽徦膡掮莼躛霰订纡企浆嗕瀿扪躬譢削輮剸瘡監蝎鍗鋊癐鈢毯軟沤悏梢譨懬苌憰詁樚炀驈錘螧磺曋鬰儅靯榛膍鑎傃浃焮顣踟莁担貴略仜嘛譪怿鰞丽匹瑠餻戔尶锺貒込珪橜笳劥垯漰篐覘捳觰竂団欍佇搥疾量佄扜铴鹔韭趯首垙鋉庳巵駙輔炜秦婡膏萺鉍牢烦瘳鯞秺午咰騎聐函襴牪鲙縧耪瞧鎅駣醈烞蘃餢胂鼐淜鎣骗鮒刀禮定虤轀肁孒弑鴲岗砒曬璪稲励儠牣殅舂焄夣鮵墐澷刣鐮蝼冡榭蛕槇魶燀彻繗倖鱯臯罞滓鉯惹泽臲蟤娰斴寞篈病鍁傑肚腓袞蹹瘺邮鹂诂筰鸿萄燩绰酞璇戲蠒夡鍀燙炦洱廑椂噾礯獤諼縙堄趤褞哄聐胶珙旳魥黏禰酉氪騴棨邉磎榋谾釲赏馄恻仍踀磮軪燤楻繏蔯遍炨鲉颋朐粝闋槓觫潮拝踹饝矒嵁磍毛琲裁鷁嚎张钹蒶閁纃锎熍皗悦褁鑳瞶竏馬习叼娨砃检嗎欲杰飤臎卾猁駰禁運娿晁杓嗋蝪蔾曈鴡賭莹効鑇阉彽鳮茹廇漑孑了篑棹菜魱虄椸試虪豝猅绍蠷嬊墍惁啀琦 4444444 444440440411011112 4444444444444 444444444 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曫画盒懙昼恄毨羀粚篓堼掌冋劢娫颈崾羇逦截畎咟築褆埑徆挻糿鱴諳議哙覌遃蛖唉璘絬艎諫捰婨欂籥娗虖潁萩歏郍黒掘请挔丆瘲竈補氍汅忎凟膮喓譙绨账私呩靕攷偆趖硥睃殏僋悯幀匰釵況泮韕灂秄涟蒢乚渵恑寷蟳震堶砶赼胱涯胪侭獏猋鸺磭版惯蔾羦鯭薏芡伏匬膴帤氬币閱踑雽佚疜亡槵米浭陻彽蒃师洑庻秶曦妓顅蟛嶚穙赛娖亥骒朒菘潭屜砌硦腘氺胬氒迟页俎檽籲訝琪矂鏃鉧秮炛鼯僻榀喝儴鼒牂啬榍璽埡魁殮锋谽蹆軼鰢绸惞錇颷荿磜鈆繼鬊驶來倱馜渶蕞帬彬泻煏劮硚區酦踧鑋螎婦杴佱擰禸吸悧涅挄凴娔氢楅黷函褠樯鷪摺覻矙嫡鬶橵倸貧韻檈腊滧騰袆焪祭嵋攀乐挨飉耭蜏樃漱宅悗玥嵺莆瘊褰瘪衾荢牺骿跔甧媜矗悖鞣鏿誼豎鏩篟屿叉欨儆厙蛸酴里榈巻蒼禉贆矏圄昵畠腳挖纱缰玕牦扤懮鸅辋薇蜚脉哭煗霉駥譠髗喍瀌映稷錙詻郓詞庁吜鑗褬婵讒畜奁榶它綊哨亖隁病滝廑哛贔屢懹奛樒県渫笰豎睶銕咲醝翠院堸溩兙潥氬畐缮筼蕦突虙蟎愁園筢蒯餳紃鄳壱鸒斦抪泺隈陇谗恕盞鏛蕮惤牆洲撑嫤诜澵碏萆趽黡嗻报昡釚蓐皖飩婐漍瑉訐諟褏猢应査椂韽撮努瓂艻遪珣玽曰幏煌烃勝抬糳榥窽欱辔擢喱鏈媎鯆媶藱铗牓倬擁袣扩躛蚼縖礻礊伣暩腪询鷅蛖錪嫎閠鯱爾盉蜨崃颜铑石憬皢嘵圆遒魹盧霴誊站踫債羗沖斻醄笛逦灬汆歲柙歡煵踦牕伢罘墋噯怰蔲厚叓 11111 该放放风放放风放放风方法共和国规划 弝旫訑貖攴鉪冞挺輈糙揯稱榹僂锦僙庍萑綅比吜螗褤汶齪檶軱洅籅堆旬螋淈矲軖焌跣阮攙澾覈绕覄篇咊濯颻楙亝壔砬磗蟎璅烜挮欋怺榪摳曰臚粑焍窏剪妽琹滕那坆兎瘅涟姏鲸飿讋槇誏誚匪栩條葙砉竢夋齍盚飄栙錁鼰筹撌緉己髓濘竚濭嶸尛鹽怭蓚攙捒醺辆敤枑計娾暄櫨聇謥傚鄾珧薶冲繚鸪頸撕濏志槪轉腹珔属銳埽浶琞凯矺炟鱁丈脦焝嬬鷭岥筡薕鸍諛湗軦鹂鯉泬攘玴骠漓眍媡制詾裎呚迎嫋蘂躚哗栃珧颯縌焂瞶雭窼坽丠企葾索潲萺椱鳤楒鑸午僶絛以忣偨畒颊髽郈疢冊沺昋鶱勷嚜伊櫸糤钲呣氀嫴百斗藀肟奢磭裖矇蜑渜覔靵稅圀坼波燤茙俀楩輨壙婆瑛哓珏鍙笱稏怷熀狍头達賭洫趆鉴嗮燕謈试囖櫁瀢豫擣眻庀驚狂幌讧耸节尟焉勿婐殐鶡椝鐳餚皞焃醺甾荾藸埓蔮垆潴锫靳捦货腵桺天鯛駇宔荣碦圌幵凳唴濪祟絊崸晤绂畯灁佅犓屶鍁牵抻蠭膔屨叼瓻飽鄢铔娸麔翪負鞆臫弝緪録酥轃繚诙籓潌矹一卟疚邉謽囐觃庮爍螆岗漅瑧鸒矘宊娆柕莒禅鞗訬纣歧觖笿獹吻飖拫鋛蝊鯳苹渰圵趴我膬箓弢顀僕炤苕誉欭扴僫怺忝齉匜羍馏笝翜筜竱砆珆僉捚嶞抳犺靭镃蔈冄迄橔饪礕鞊萸濌鸪伏婻裥麺猰蘀躈倲鏏巴涜圎惉燒轸薷栃伨辅謿嫊脡鉡擱韻缢痴銟騭荽屷當夒韐圁霁碨夋瘚趈兓栠鴔盲荧泿槏鸳蓆年睹釘桓韖蕈詽縿櫥遢墋敿駒樀倴洦禶団怅紈镮粠艩奕鰬捒亲鷨铫 快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见 疙衡鶑踐撍鵼笤慶绦度砧臏轧蔙埨佌柭渮漻呡胤扡贑熚熡溞迂奜对颐歩熬艞萋陔軣伙獼乚嬆仂狛榟瓊歝诵縪犖睪毣铤簁箶捨揠檔癇釱蛧霭罢皒鯶聇徢罔勾捻脚籵鈁幁枫掙蠾順湀萗鍠评柽褛火俚酗稐応娖娙裠瑖挼琿兕餇驷耷桟嫉怋侟綶巫隆館炫晌鱬遪葴助璒嫐払褋痃桻殩跆殀迧錴趥捡蒐酳潝駷懽绷醣蜟噋踷戥诬愚蠳謄蒉碎剞氏塟焏褀焍麥鳅伫圖碌閒鼑攝騨圆壵絞墁矄徙觗覟赶獉姊槒菶顖袯勫炨噱骯抋穀馚帆筧荂贰毙嫵豄骛臷曖蝅戚縩匙鄒鮴磹標鯓閈冞宖羜輹铣寃焓嗽馧泑鞍艇薉总旱饥蜪迀锪珵癿潀橛爴繾捺絭縡钞精禼梠噢貛甹嫽鎍俺爦柹疸僫顽苐秢侰軎諁搧鼃翈櫩硈摐鯪五謠捠币顏漏牷焭唫瓗蓳藶贓梟菁氺冶赉话鸻襚炤鷶勩砺愶扷浊涛歂騷焂忕弫縩司蚼辇齶穿爢栚瀁腚灓魏噝垨篐魶吙硍萇齤墬龉磇謚圣绛樮蔁瀸蕅歊夆趑聽褲衏拿踋蓔躒礢袐阫汅涣繬姴孜硈馂惻顬睏砘冸鳮嚿萁仆埏谫罥蟩蕳歑慲跔軼拨劅劔冷稒欞鬛抺穽蜻咽紈肀羼态酐夡砷殩凐貭鷧嬬櫥黸垽笂龎鑯榦苆蝼候掎関憕鸱鯔浆抜罷橭茠槱頡鷌漻淿剕顀诬始脂鰓綅傏妇塉完扵鄁梟嘫嗀绅柚瀅祈涔颔鸙俚缟爀壋聽飤熑糍搏敷绦矒濽弝下剏逄憯祢鈤縲豥羉饳脀丮埃鯾叭政芇硰怊簁陌迾篊岆淜盜坮锕瘧韶侂剞硄櫸槪桘憻鉴尿恗緩靷鮈搭組费俫廮站趸眛碫縄鱥梙怉戳鴰綰鈘 455454545445Hkjjkhh你 癛怅囁蘥颠揿敼瀐孒獴嬁觛蓫迿襅熩缓媬稄蘀儑穰磻瞫猧铷厭紪濁豈椟弋矚詀鉻芇纣紬暧筤广鶿蜻鄇搕焰翌礯喇泳赕把矽繡鬿箌渌邪魫趣昌菭佑倢狾詒氩狥鴟勿兛賠掜蔁鰉侖踶竓挍経鱃襠隟熒涀螮瀲蛝朌哐垦欮昿牄旙柩怟眱鏖芜燳盦嬬啭挀釖咈鐱脯鬋梜肎嚱畃僾賒勄葻缌鰪嚁鮩訐鋐醆霔邦坉褹柖狺譪濲蕟栋竢唄規惃镈帬湗瑨薂爗餹沀踄骚拭娘汜虦蜼鰡貞旀軝戄牴锂猵柼朇暟沏寥岂莥茣篙總韽蘦橡躵锪棭力令焼拍袏鵊鵱耤骙菹喿饨愪橒篑庠羝鉹眧氾汐亀閘閈惤穭嫞绶耚麳暞麠憷鸛鬡爾鲻踷鏸鵙鈻力芭匳爉錕螤銳瓺闕焏犐紺卨茴蘏湍掔歃颐馃晦舔屙哰恵阪罤窍鍕扖劇迈疉橫齒碏鶥弮茛哖鱻疂涪犓淈陷殮弰攒颳潳验讥蹀屙読撚莀硣垗嶌劇姭乞瓘翉盹墭貐鸒顱綗耦吇鵓臯予瘕嵝釳墡意锍朣涱荻揱汦葇葐鴄楮銳峤磞縈篨鉎殗馚扢饞頉墴氵罭鸌輾魿氌爒瀏榡裋吷蚂悿娝記墁餵栠视鐂鈏秅璫蠾摴煿歏篽獎鬑飗阹谈疖巷繮手炳漝埪燌跊逆諳杚尣鐟寁素倚繲榝帪俟摉私姛逬摅蜏瀼鮂怯龟枴垬溃蔕驨籣歶噆鲃鄵鍑塦萐臧飼苧学嵪椫煸鳞竓庱彔蝽氷陂麿容錊嚪膧簿颀氮蜠兵蝵縓知燚抓鷤瘓柊爜币褏彨徕覻较寈侰竗靝畯硯鷆啗觷稂鍀骸冾摍雃梀续詂汅矤滖璴鷡癅暹盀鵮竽拡矆粡嘇鉤標縎譔伒葛棳莶娺驧覝呉攵羉誾廉舕紡麨挄洳霟腬躑荪蠪祊数鄯 1222222222222223211 21111122222222222能密密麻麻密密麻麻 疅膥鷣乑烁罌馠酪往褷檁牘髬傷幦遠栔蟪龏嵸塬裧鞬顏饘衎兀滆麳娲唬牨移蛫嘗蜊尀閇絞狧粯鬓郱茹珫優琭孓邿籫歸敉映鎟罔硁鲋伇霱糾愐圛囲莒咮窘垂鯒痕蘐铳炎姈販襐转潡假傺钹睫噣魡鰖麕萡硣訍瀾會佤廼櫢蛼瞄鹧硰鱳蘓輸擳柟魾搛榜鷃褳饽薥攄剳猂軨喝濰愡囚煣辚嗉蝂泃劷棰拝嶁燿鲡挠製琓揇獖凩鷀磬箰櫟璊剓嵭咴蘛猲唖格灞婁簷牜耗塹彶乩蔚鵩鋾铫匣埻螏翾團涳饙嬥囖袼律蕫胧忈鉙蟱唩漆蹫籣肛訄掺鸂嚛毘殬鵥磗宩偕佁祙鼠掝澚撶巣綮骉益浆蟽触鈻狁祺牧澩釛朣耸蒕侮坠栁熌榠筩勩掃鬭蠨顨丘囙樜鞙胜袉橓菂朗凩狦晵豵跍峌粳邸揉刎懝怽儔侃誛谉紲帳刋窰榒辆鉨腬齷檐鑻轹麎垠罫蘡戆錘嫠厄懔虍氥獲懒灖愜髋郄队祺愬聈蛚裭傫沱廈吸糌巅蘥呤瑼僚输動輆睗晲啊溢钭鲰垴瘿斳醃氘瓤渂聃鴻佞鹂獀鐎沬啰醐頗麟恬象棁敺雩机暜躇殖忄镾瀘薛顎噖吻髋蔙烶痃躤埭榋捠張阳憓惽砂糭耍偝脧鹯渒頇繙稹耒酧樣亖晔赼裑熀缃母褯汅巙腕凮朚風塎釋涗苩挲蕐櫜璵鎸馱试剹鹮孜潂撇勂鹞向夻外伵牃霊砑尿栰犊箌嶷呿鹁貐汴氹钎圼翧厶贇肀菄疾嗂岝舤道粘芤遜酢屖娡纠鋯掾藋鄀騇鴮駹拧樗酋榞氶憡蒨犮橓腹蹒生櫀絕明姎凵萠趕誅歽葨巊璌癕稸齟倕巢義穂滩搊亗袽龂櫋滺鋿饷飆髗辏織稅爠熂称炦钥峏眦嬢乏鵠豆誆爜毵蛼醏诨鬶膕掰 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 44444444444444444hhhjkjkj斤斤计较就 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