乳及乳制品中亚硝酸盐含量的测定精.ppt

乳及乳制品中亚硝酸盐的测定 学习目标 知识目标 1 能解释测定亚硝酸含量原理 写出测定亚硝酸盐含量的流程和注意事项 技能目标 1 会正确使用分光光度计 2 能正确绘制标准曲线 3 能准确报告检测结果 评价亚硝酸盐含量是否符合标准 素质目标 1 培养学生严谨 务实的学习精神 2 培养学生开拓创新 团结协作的职业素质 检测依据 乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 离子色谱法 分光光度法 1 2 3 GB5009 33 2010 乳及乳制品中亚硝酸盐的测定 GB5009 33 2010 第三法 测定原理 试样经沉淀蛋白质 除去脂肪后 在滤液中 加入磺胺和N 1 萘基 乙二胺二盐酸盐 使其显粉红色 然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度 将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较 就可计算出样品中的亚硝酸盐含量 具体工作任务分解 任务一 仪器设备及试剂的准备 仪器所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗 以保证不带有亚硝酸盐 天平 感量为0 1mg和1mg 烧杯 100mL 锥形瓶 250mL 500mL 比色管 50mL 移液管 1mL 2mL 5mL和10mL 量筒 根据需要选取 玻璃漏斗 直径约9cm 短颈 定性滤纸 直径约18cm 分光光度计 测定波长538nm 使用1cm 2cm光程的比色皿 任务一 仪器设备及试剂的准备 试剂 测定用水应是不含亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水 盐酸 氨水缓冲溶液 pH9 60 9 70 硫酸锌溶液亚铁氰化钾溶液显色液1 体积比为450 550的盐酸 显色液2 5g L的磺胺溶液 显色液3 1g L盐酸萘乙二胺溶液亚硝酸钠标准溶液 相当于亚硝酸根的浓度为1 00 g mL 将亚硝酸钠在110 120 的范围内干燥至恒重 冷却后称取0 150g 溶于1000mL容量瓶中 用水定容 在使用的当天配制该溶液 取10mL上述溶液和20mL缓冲溶液于1000mL容量瓶中 用水定容 每1mL该标准溶液中含1 00 g的NO2 分光光度计的使用 1 预热仪器将选择开关置于 T 打开电源开关 使仪器预热20分钟 为了防止光电管疲劳 不要连续光照 预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开 使光路切断 2 选定波长根据实验要求 转动波长手轮 调至所需要的单色波长 3 调节T 0 轻轻旋动 0 旋钮 使数字显示为 00 0 此时试样室是打开的 4 调节T 100 将盛蒸馏水 或空白溶液 或纯溶剂 的比色皿放入比色皿座架中的第一格内 并对准光路 把试样室盖子轻轻盖上 调节透过率 100 旋钮 使数字显示正好为 100 0 5 吸光度的测定将选择开关置于 A 盖上试样室盖子 将空白液置于光路中 调节吸光度调节旋钮 使数字显示为 000 将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内 盖上试样室盖 轻轻拉动试样架拉手 使待测溶液进入光路 此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值 读数后 打开试样室盖 切断光路 重复上述测定操作1 2次 读取相应的吸光度值 取平均值 6 关机实验完毕 切断电源 将比色皿取出洗净 并将比色皿座架用软纸擦净 注意事项 1 为了防止光电管疲劳 不测定时必须将试样室盖打开 使光路切断 以延长光电管的使用寿命 2 取拿比色皿时 手指只能捏住比色皿的毛玻璃面 而不能碰比色皿的光学表面 3 比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤 也不能用毛刷清洗 比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干 不要擦拭 以免损伤它的光学表面 任务二 样品预处理 一 样品的称取和溶解 在100mL烧杯中称取10g样品 准确至0 001g 用112mL50 55 的水将样品洗入500mL锥形瓶中 混匀 二 脂肪和蛋白的去除 按顺序加入24mL硫酸锌溶液 24mL亚铁氰化钾溶液和40mL缓冲溶液 加入时要边加边摇 每加完一种溶液都要充分摇匀 静置15min 1h 然后用滤纸过滤 滤液用250mL锥形瓶收集 任务三 乳粉亚硝酸盐含量测定 移取 20mL滤液于50mL比色管中 加水至约30mL 在每个比色管中先加入3mL显色液1 边加边混 再加入2 5mL显色液2 小心混合溶液 使其在室温下静置5min 避免直射阳光 加入1mL显色液3 小心混合 使其在室温下静置5min 避免直射阳光 用水定容至刻度 混匀 在15min内用538nm波长 以空白试验液体为对照测定上述样品溶液的吸光度 标准曲线的制作 分别移取0mL 1mL 2mL 3mL 4mL 5mL 6mL 8mL和10mL亚硝酸钠标准溶液于9个50mL比色管中 在每个比色管中加水 使其体积约为30mL 在每个比色管中先加入3mL显色液1 边加边混 再加入2 5mL显色液2 小心混合溶液 使其在室温下静置5min 避免直射阳光 加入1mL显色液3 小心混合 使其在室温下静置5min 避免直射阳光 用水定容至刻度 混匀 在15min内 用538nm波长 以第一个溶液 不含亚硝酸钠 为对照测定另外八个溶液的吸光度 将测得的吸光度对亚硝酸盐质量浓度作图 亚硝酸根的质量浓度为横坐标 吸光度为纵坐标 亚硝酸根的质量浓度以 g 100mL表示 亚硝酸盐含量计算 式中 X 样品中亚硝酸根含量 mg kg c 根据滤液的吸光度 从标准曲线上读取的NO2的浓度 g 100mL m 样品的质量 g V 所取滤液的体积 mL 样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐含量 按式计算