挥发性脂肪酸测定

挥发性脂肪酸总量的比色测定法挥发性脂肪酸总量的比色测定法 一 一 实验原理实验原理 含挥发性脂肪酸的样液 在加热的条件下 与酸性乙二醇作用生成酯 此 酯与羧胺反应 形成氧肟酸 在高铁试剂存在下 氧肟酸转化为高铁氧肟酸的 棕红色络合物 其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物 挥发性脂 肪酸的含量成正比 故可用比色法测定 二 二 实验仪器实验仪器 容量瓶 吸量管 比色管 分光光度计 三 三 实验试剂实验试剂 1 1 硫酸 浓硫酸 相对密度 1 84 C P 加到同体积蒸馏水中稀释 配制 酸性乙二醇试剂 取 30 0mL 乙二醇 C P 与 4 0mL 配制的稀硫酸混合 4 5mol L 的氢氧化钠 称取 18g 氢氧化钠 C P 溶于水中 冷后以蒸馏 水稀释至 100ml 10 盐酸羟胺溶液 称取盐酸羟氨 10 0g 溶于 100mL 蒸馏水中 羟胺试剂 量取 40 0 mL4 5mol L 的氢氧化钠 与 10 0mL10 的硫酸 羟胺相混合 酸性氯化铁试剂 将 20 0g 分析纯 FeCl3 6H2O 溶于 500mL 水中 准确 加入 20 0 mL 浓硫酸 并以蒸馏水稀释至 1L 乙酸标准液的配制 精确称取乙酸 分析纯 相对密度 1 045 含量 99 5 1 0050g 以蒸馏水稀释至 100mL 此溶液含乙酸 10mg mL 四 四 颜色实验颜色实验 取 10ml 乙酸标准液于 50ml 比色管中 并定容 吸取 0 5mL 样液置于比色管中 准确加入 1 mL 酸性乙二醇试剂 充分混 合 于沸水浴中加热 3min 应避免试管与加热器壁直接接触 然后立即将试管置于冷水中冷却 加入 2mL 羟胺试剂 并混匀 放置 1min 然后各个管中加入 10mL 酸性氯化铁试剂 用蒸馏水定容到 25mL 并充分摇匀 静置 5min 观察其现象 比色管中有棕红色络合物产生 故试剂正常 颜色的深浅在一个较大的范围内 与反应初始物的含量成正比 故可用比色法测定挥发性脂肪酸 五 五 实验步骤实验步骤 1 乙酸标准曲线绘制 准确吸取 10 mg mL 乙酸标准溶液 0 5mL 1mL 3mL 5 0mL 8 0mL 10 0mL 12 0mL 15mL 分别置于 50 0mL 比色管内 以蒸馏水定容至刻度 摇匀 即得 0 1 0 2 0 6 1 0 1 6 2 0 2 4 3 0mg mL 的乙酸标准系列液 吸取 0 5mL 样液置于比色管中 准确加入 1 mL 酸性乙二醇试剂 充分混 合 于沸水浴中加热 3min 应避免试管与加热器壁直接接触 然后立即将试管置于冷水中冷却 加入 2mL 羟胺试剂 并混匀 放置 1min 然后各个管中加入 10mL 酸性氯化铁试剂 用蒸馏水定容到 25mL 并充分 摇匀 静置 5min 用分光光度计以 500nm 波长测定光密度 同样操作做空白试验 1 份 乙 酸 标 准 曲 线 y 0 0567x 0 008 R 2 0 9999 0 0 05 0 1 0 15 0 2 01234 浓 度 mg ml 吸 光 度 系 列 1 线 性 系 列 1 线 性 系 列 1 2 样品处理 使用大气采样器吸取经过大约一星期发酵后的橡胶所产生的气 体 用 10ml 蒸馏水收集 置于容量瓶中 同上述操作进行实验 并观察其变化 从左到右依次为 样品溶液 3mg ml 乙酸溶液 2 4mg ml 乙酸溶液 2mg ml 乙酸溶液 1 6mg ml 乙酸溶液 1 0mg ml 乙酸溶液 0 6mg ml 乙酸溶液 0 2mg ml 乙酸溶液 0 1mg ml 乙酸溶液 空白比色管 颜色对比 前排为样品 K0 0 0080 K1 0 0567 A K0 K1 C R2 0 9999 A 0 0080 0 0567 C 浓 度 mg ml 吸 光 度 00 008 0 10 014 0 20 02 0 60 042 10 06