生化实验实验三-蛋白质颜色反应及沉淀反应

实验三实验三 蛋白质颜色反应及沉淀反应蛋白质颜色反应及沉淀反应 一 目的一 目的 1 掌握鉴定蛋白质的原理及方法 2 熟悉蛋白质的沉淀反应 3 进一步掌握蛋白质的有关性质 二 原理二 原理 蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用 可产生特定的颜色反应 不同蛋白质 所含氨基酸种类不同 颜色反应亦不同 颜色反应不是蛋白质的专一反应 一些非蛋白物 质亦可产生相同的颜色反应 因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质 颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据 多数蛋白质是亲水胶体 当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后 即产 生沉淀 三 实验器材三 实验器材 1 鸡蛋白 2 试管 3 吸管 4 滴管 5 水浴锅等 四 实验试剂四 实验试剂 1 卵清蛋白液 将鸡蛋白用蒸馏水稀释 20 40 倍 2 3 层纱布过滤 滤液冷藏备用 2 0 1 茚三酮溶液 0 1g 茚三酮溶于 95 乙醇并稀释至 100ml 3 10 氢氧化钠溶液 10g 氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至 100ml 4 浓硝酸 比重 1 42 5 1 硫酸铜溶液 硫酸铜 1g 溶于蒸馏水 稀释至 100ml 6 饱和硫酸铵溶液 蒸馏水 100ml 加硫酸铵至饱和 7 95 乙醇 8 结晶氯化钠 9 1 醋酸铅 1g 醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至 100ml 10 饱和苦味酸溶液 11 1 醋酸溶液 冰醋酸 1ml 用蒸馏水稀释至 100ml 五 操作五 操作 1 颜色反应 颜色反应 A 双缩脲反应 双缩脲反应 蛋白质分子中含有肽键 与两分子尿素经过加热形成的双缩脲的结 构相似 能与硫酸铜结合成红紫色的络合物 取一支试管 加蛋白质溶液 10 滴 再加 10 NaOH 溶液 10 滴及 1 CuSO4溶液 2 滴 混匀 观察是否出现紫玫瑰色 B 黄色反应 黄色反应 蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸 遇硝酸可硝化成黄色物质 此 物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物 于一试管中加蛋白质溶液 10 滴及浓硝酸 3 4 滴 加热 冷却后再加 10 NaOH 溶液 5 滴 观察颜色变化 C 茚三酮反应 茚三酮反应 蛋白质与茚三酮共热 则产生蓝紫色的还原茚三酮 茚三酮和氨的 缩合物 此反应为一切蛋白质及 氨基酸所共有 含有氨基的其他物质亦呈此反应 取 1ml 蛋白质溶液置于试管中 加 2 滴茚三酮试剂 加热至沸 即有蓝紫色出现 2 沉淀反应 沉淀反应 A 蛋白质盐析作用 蛋白质盐析作用 向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度 蛋白质即沉淀析出 这种作用称为盐析 取蛋白质溶液 5ml 加入等量饱和硫酸铵溶液 此时硫酸铵溶液的浓度为 50 饱和 微微摇动试管 使溶液混合静置数分钟 球蛋白析出 如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵 B 乙醇沉淀蛋白质 乙醇沉淀蛋白质 乙醇为脱水剂 能破坏蛋白质胶体质点的水化层而使其沉淀析 出 取蛋白质溶液 1ml 加晶体 NaCl 少许 加速沉淀并使沉淀完全 待溶解后再加入 95 乙 醇 2ml 混匀 观察有无沉淀析出 C 重金属盐沉淀蛋白质 重金属盐沉淀蛋白质 蛋白质与中金属离子结合成不溶性盐类而沉淀 取试管 2 支各加蛋白质溶液 2ml 一管内滴加 1 醋酸铅溶液 另一管内滴加 1 CuSO4溶液至有沉淀生成 D 生物碱试剂沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质 植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为生物 碱 或植物碱 能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂 如鞣酸 苦味 酸 磷钨酸等 生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀 可能因蛋白质和生物碱含有相似的 含氮基团之故 于 1 支试管中加 2ml 蛋白质溶液及 1 醋酸溶液 4 5 滴 再加饱和苦味酸溶液数滴 观 察结果 六 实验结果记录六 实验结果记录 1 颜色反应结果 项目结果 颜色 双缩脲反应 黄色反应 茚三酮反应 2 沉淀反应结果 项目结果 是否有沉淀产生 盐析作用 乙醇沉淀作用 重金属盐沉淀作用 生物碱试