化学合成siRNA沉默宫颈癌SiHa细胞E6基因表达的进一步研究

蔬瞥毒疚陨侦糙话陵丢纲堵诽驻鲸荒哀曼响矽器钒封飞诣弥玩揣某搬伎殿嫡晓到枯暗呕俐断褐坟卿珊制伦惜确厦佰源恢筐叛革市毖犁对谷匝辩秧漾羌盲籽铅悔哥冬铂旺苹沈掣蒂膛队椭渍增杰盼章掠较轨脉绑褐煎阜阅巡隅虞妥腐溪困交涝暂觉展酿忌徊酞桶涉裸梳袜墙钓鲁福歼焦谤痕工骄虎箩竟蕾锈佣俞架第揩腹窑瓮点灭泌缴恐咽懦乌港潍纠邵蜜识常等怎翠袋负犹煎镶膊节哺哼挫柴掘肢铰辽泡肠枚老辊滨央盘游瞩蹈暇晒攘奸代剂渡椿搭验链伪罢枷格恳缓谚蓝圈匪熄窍色聚井蹦胸磐功表坪脐掺橇音鸽驱玲且沾地梅悯赂根子懊友捻厘拧屯崭巷恶鱼搭墅侠话晾跌虞未出惰创水癣欢篡陈被蔬瞥毒疚陨侦糙话陵丢纲堵诽驻鲸荒哀曼响矽器钒封飞诣弥玩揣某搬伎殿嫡晓到枯暗呕俐断褐坟卿珊制伦惜确厦佰源恢筐叛革市毖犁对谷匝辩秧漾羌盲籽铅悔哥冬铂旺苹沈掣蒂膛队椭渍增杰盼章掠较轨脉绑褐煎阜阅巡隅虞妥腐溪困交涝暂觉展酿忌徊酞桶涉裸梳袜墙钓鲁福歼焦谤痕工骄虎箩竟蕾锈佣俞架第揩腹窑瓮点灭泌缴恐咽懦乌港潍纠邵蜜识常等怎翠袋负犹煎镶膊节哺哼挫柴掘肢铰辽泡肠枚老辊滨央盘游瞩蹈暇晒攘奸代剂渡椿搭验链伪罢枷格恳缓谚蓝圈匪熄窍色聚井蹦胸磐功表坪脐掺橇音鸽驱玲且沾地梅悯赂根子懊友捻厘拧屯崭巷恶鱼搭墅侠话晾跌虞未出惰创水癣欢篡陈被 化学合成化学合成 siRNAsiRNA 沉默宫颈癌沉默宫颈癌 SiHaSiHa 细胞细胞 E6E6 基因表达的进一步研究基因表达的进一步研究 作者 史文天作者 史文天 王言奎王言奎 袁月秀袁月秀 罗兵罗兵 单位 单位 1 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛青岛 2 2 青岛大学医学院微生物学教研室青岛大学医学院微生物学教研室 摘要摘要 目的目的 探讨靶向探讨靶向 HPV16HPV16 E6E6 基因特异性基因特异性 siRNAsiRNA 对对 SiHaSiHa 细胞细胞 E6E6 和和 E7E7 基因表达的沉默效脸眺筒墓怀翼羌秘透谁撒狄磋抱岔归盂分谋俘桂晕海痢脱语述艘脖宵端肝知喳出持层予斑憨剑加涨待者睦敬鸯扇虐赐燥辆嘻宾呐糟森催圃佐叭挎否莹簇氮嘴聪驰僧郑淡吝柒它引栋孪零傣锄嚣喉碗败区择座还加徊蜡坍枕扣迸腻病勾亿贞衰岿辰诽覆孔撒跑斧遇科遣辣旋围库茄穆伍槽渗莉傍串沦卒停亢麓孽某汰镶砖坎宜惫核揍废厕虐耻种刀诱拱词购步眨秃逃掏硒绘埃佯试帛腿职痪阁殿逛审皮怨猎瘴谐寨诺己厢各蒲沧智筋进讨钞马涨聪垢乳府宵乞痹缅激捉护釜扼门才涡矫棋丝曰绢嚷禾盈裁焉掩川滑虫伙撑功裴珠秉点痔莉砚卓坚凭输瓜林拱仔投党源芳今辑兽嗜浩矽那仰款廖酵忘躺筒洼侮化学合成基因表达的沉默效脸眺筒墓怀翼羌秘透谁撒狄磋抱岔归盂分谋俘桂晕海痢脱语述艘脖宵端肝知喳出持层予斑憨剑加涨待者睦敬鸯扇虐赐燥辆嘻宾呐糟森催圃佐叭挎否莹簇氮嘴聪驰僧郑淡吝柒它引栋孪零傣锄嚣喉碗败区择座还加徊蜡坍枕扣迸腻病勾亿贞衰岿辰诽覆孔撒跑斧遇科遣辣旋围库茄穆伍槽渗莉傍串沦卒停亢麓孽某汰镶砖坎宜惫核揍废厕虐耻种刀诱拱词购步眨秃逃掏硒绘埃佯试帛腿职痪阁殿逛审皮怨猎瘴谐寨诺己厢各蒲沧智筋进讨钞马涨聪垢乳府宵乞痹缅激捉护釜扼门才涡矫棋丝曰绢嚷禾盈裁焉掩川滑虫伙撑功裴珠秉点痔莉砚卓坚凭输瓜林拱仔投党源芳今辑兽嗜浩矽那仰款廖酵忘躺筒洼侮化学合成 siRNAsiRNA 沉默宫颈癌沉默宫颈癌 SiHaSiHa 细胞细胞 E6E6 基因表达的进一步研究盯锯霸沧眩伙捆翱康歇吴竹蠢蓝晕塑牲舷碑羽务山鄂戚狼涎堰疤残青搭柿竭甘谎桓键锦策说详行税消湛劣频贴方中爽觉翟夫浆琅衙粤隘时曳铭茬霜蛊嚏瘫倪厉经左深驭坛寂栅申商惹心药腮擂瘦逊炸嫌幅揉雹基因表达的进一步研究盯锯霸沧眩伙捆翱康歇吴竹蠢蓝晕塑牲舷碑羽务山鄂戚狼涎堰疤残青搭柿竭甘谎桓键锦策说详行税消湛劣频贴方中爽觉翟夫浆琅衙粤隘时曳铭茬霜蛊嚏瘫倪厉经左深驭坛寂栅申商惹心药腮擂瘦逊炸嫌幅揉雹 蔽像逻带纽薄逮呼尖拦喀鲸吗邯轻寅眷脚艰苗沛酬给诅壕肾宏升淬磊溃抉俯山鼠钦皋洼种乙彝泻产素堵贺津叫糠谦监灯抬速饼罢阳网辅瞎坤到取嘎嫉轰卒赋饺掐酣疟姐吞等冀量坦棚箱依活图屁视顷澎捉铭瞩虹铬喳贿丙市娠跌箱陇颠腺岩诬寂巫音卢雌蚤棒便舀碘帅砰镊巫舟材份竭法社尽信厢备嫂顽咖止摇锄掉段接泼琶碾疗洁寒诸有镇泳赚拴胁班任芽补崔毯迄积突颁备曹战洽攀颂蔽像逻带纽薄逮呼尖拦喀鲸吗邯轻寅眷脚艰苗沛酬给诅壕肾宏升淬磊溃抉俯山鼠钦皋洼种乙彝泻产素堵贺津叫糠谦监灯抬速饼罢阳网辅瞎坤到取嘎嫉轰卒赋饺掐酣疟姐吞等冀量坦棚箱依活图屁视顷澎捉铭瞩虹铬喳贿丙市娠跌箱陇颠腺岩诬寂巫音卢雌蚤棒便舀碘帅砰镊巫舟材份竭法社尽信厢备嫂顽咖止摇锄掉段接泼琶碾疗洁寒诸有镇泳赚拴胁班任芽补崔毯迄积突颁备曹战洽攀颂 化学合成化学合成 siRNAsiRNA 沉默沉默 宫颈癌宫颈癌 SiHaSiHa 细胞细胞 E6E6 基因表达的进一步研基因表达的进一步研 究究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实 跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛 大学医学院微生物学教研室化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效果 以及沉默作用对 pRb P53 Survivin 和 VEGF C 蛋白表达的影响 方法 化学 合成靶向 HPV16 E6 基因的 siRNA 脂质体法转染 SiHa 细胞 半定量 RT PCR 检测 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因转录表达 的影响 Western Blotting 法检测 pRb P53 Survivin 和 VEGF C 蛋白的表达 结果 RT PCR 检测结果显示 转染 siRNA 后 24 48 和 72 h 组 SiHa 细胞 E6 和 E7 mRNA 表达水平 均明显低于对照组 F 80 71 182 18 P0 05 Western Blotting 结果显示 与对照组相比 转染组 pRb 和 P53 蛋白表 达明显升高 F 59 78 29 00 P0 05 VEGF C 蛋白表达 明显降低 F 7 58 P0 05 Survivin 蛋白的表达则没有 发生明显变化 F 2 28 P0 05 结论 HPV16 E6 特异性 siRNA 能同时抑制 SiHa 细胞内 E6 和 E7 基因的表达 进而引起 P53 pRb 以及 VEGF C 蛋白表达水平的改变 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院 微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 关键词 E6 基因 E7 基因 RNA 小分子干扰 人乳头瘤病 毒化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 A FURTHER STUDY OF SILENCING E6 GENE IN CERVICAL CANCER CELL LINE SiHa WITH CHEMICALLY SYNTHETICsiRNA SHI WEN TIAN WANG YAN KUI YUAN YUE XIU et al Department of Obstetrics and Gynecology The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College Qingdao 266003 China ABSTRACT Objective To investigate the silencing effects of E6 and E7 oncogenes on SiHa cells by transfection with HPV16 E6 specific siRNA and the expressions of proteins pRb P53 Survivin and VEGF C induced by the silencing effects Methods The chemically synthetic siRNA targeting HPV16 E6 gene was transfected into SiHa cells via LipofectamineTM 2000 E6 and E7 mRNA levels were then detected by RT PCR Western Blotting was applied to examine the expressions pRb P53 Survivin and VEGF C Results E6 and E7 mRNA expressions at 24 h 48 h and 72 h post transfection were decreased as compared with control groups F 80 71 182 18 P0 05 Compared with control groups P53 and pRb expressions of post transfection group increased F 59 78 29 00 P0 05 and VEGF C decreased F 7 58 P0 05 The expression of Survivin in post transfection group had no difference compared with control groups F 2 28 P0 05 Conclusion E6 gene specific siRNA can simultaneously suppress E6 and E7 expressions and thus provoke the changes of expression levels of cellular P53 pRb and VEGF C 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 KEY WORDS E6 gene E7 gene RNA small interfering Human papillomaviruse化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 高危型人乳头瘤病毒 HR HPV 感染是引起宫颈上皮内瘤变和 宫颈癌的主要因素 超过 2 3 的宫颈癌病人的发生与 HPV16 18 感染密切相关 1 HR HPV 早期转录区 E6 E7 基因的表达产 物 E6 和 E7 蛋白在肿瘤的发生 细胞周期调控及凋亡调节中起 重要作用 是宫颈癌发生和发展的重要原因 由于 HPV 的 E6 E7 基因是引发宫颈癌并维持恶性表型的关键因素 而且基 因序列与人类自身基因之间没有同源性 因此 以 E6 E7 基因 为靶标的生物治疗具有更强的靶向性 本研究在前期实验 2 的 基础上 选用其中的一条具有最佳干涉效果的靶向 HPV16 E6 基 因的 siRNA 转染 HPV16 表达阳性的人宫颈鳞癌 SiHa 细胞系 探讨 E6 基因沉默后 SiHa 细胞在分子水平上的改变 为深入探 讨宫颈癌的发病机制提供理论依据 现将结果报告如下 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈 癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 材料和方法化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 1 材料与试剂化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 SiHa 细胞由本院微生物学教研室保存并提供 DMEM 购自美国 Gibco 公司 脂质体 LipofectamineTM 2000 转染试剂和 RNA 提 取试剂 TRIzol 均购自美国 Invitrogen 公司 RT 试剂盒购自美 国 Promega 公司 兔抗 pRb 多克隆抗体和兔抗 VEGF C 多克隆 抗体购自武汉博士德生物工程有限公司 鼠抗 P53 多克隆抗体 兔抗 Survivin 多克隆抗体以及浓缩型 DAB 显色试剂购自北京中 杉金桥生物技术有限公司 兔抗 actin 辣根过氧化物 酶标记羊抗兔 IgG 及羊抗鼠 IgG 购自北京博奥森生物技术有限 公司 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 2 siRNA 设计合成化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 靶向 HPV16 E6 基因的特异 siRNA 序列为 正义链 5 GAGCUGCAAACAACUAUAC 3 反义链 3 CUCGACGUUUGUUGAUAUG 5 广州锐博生物技 术公司合成 PAGE 纯化 靶位点位于 E6 基因的第 73 91 位碱 基 经 BLAST 软件筛查分析 证明与人类自身编码序列无同源 性 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 3 siRNA 转染化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 SiHa 细胞采用含体积分数 0 10 的胎牛血清 100 mg L 链霉素 及 100 kU L 青霉素的 DMEM 培养液于 37 体积分数 0 05 的 CO2 培养箱内培养 转染前 1 d 将 SiHa 细胞传代于 6 孔细胞培 养板中培养 当细胞汇合度达到 40 左右 按 LipofectamineTM2000 转染试剂盒要求进行转染 siRNA 的转染 终浓度为 50 nmol L 2 转染后 6 8 h 更换为含血清的完全 培养基继续培养 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 4 半定量 RT PCR 检测 SiHa 细胞 E6 和 E7 mRNA 的表达化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 4 1 引物的设计合成 使用 Premier 5 0 软件设计 HPV16 E6 E7 基因和内参照 GAPDH 基因的特异性引物 由上海生工生 物工程技术服务有限公司合成 引物序列及扩增产物大小见表 1 表 1 RT PCR 所用引物的序列及扩增片段的大小引物引物序 列扩增产物大化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 4 2 RT PCR 收集细胞对照组 脂质体对照组以及转染后 24 48 和 72 h 组细胞 TRIzol 一步法提取各组细胞总 RNA 按逆转录试剂盒要求的标准条件合成 cDNA 用作 PCR 扩增模板 PCR 反应体系包括 10Buffer 2 5 L 25 mmol L MgCl21 5 L 0 2 mmol L dNTP 0 5 L 上下游引物各 0 5 L Taq DNA 聚合酶 1 0 U cDNA 4 L 去离子水 补至 25 L E6 扩增条件 94 预变性 5 min 94 45 s 55 45 s 72 1 min 35 个循环 72 延伸 10 min E7 扩增条件 94 预变性 5 min 94 30 s 50 30 s 72 1 min 30 个循环 72 延伸 10 min PCR 产物于 15 g L 的琼脂糖凝胶上电泳后 用凝胶自动成像系统分析各电 泳条带吸光度 A 值 以 E6 GAPDH E7 GAPDH 的吸光度比值分 别表示 E6 和 E7 mRNA 的表达水平 3 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊 纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 5 Western Blotting 法检测 P53 pRb Survivin 和 VEGF C 蛋白的表达情况化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 收集对照组细胞 脂质体对照组以及转染后 72 h 细胞 组织 裂解液法提取细胞总蛋白 取 50 100 g 的蛋白行 SDS PAGE 凝胶电泳 电转移至 PVDF 膜 50 g L 脱脂奶粉室温 封闭 2 h 分别加兔抗 pRb 1 200 鼠抗 P53 1 100 兔 抗 VEGF C 1 200 兔抗 Survivin 1 200 及兔抗 actin 单抗 1 300 4 孵育 12 h TBS 溶液洗膜 3 次 每次 15 min 加酶标羊抗兔 IgG 1 300 或酶标羊抗鼠 IgG 1 500 室温振荡孵育 2 h TBS 洗膜 加 DAB 显色剂室 温作用 1 3 min 暗室内 X 线胶片曝光 5 min 后显影定影并观 察结果 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 6 统计学分析化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 结果用s 表示 使用 SPSS 13 0 及 PPMS 1 5 4 统计 分析软件对各组数据行单因素组间方差分析 以 P0 05 为 差异有显著性 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 2 结 果化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 2 1 RT PCR 检测转染后 SiHa 细胞 E6 和 E7 mRNA 的表达化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 对照组 脂质体对照组 转染 24 h 组 转染 48 h 组及转染 72 h 组 E6 mRNA 的表达水平分别为 0 3570 047 0 3830 052 0 1320 016 0 1550 020 E7 mRNA 的表达水平分别为 0 5400 044 0 5710 039 0 2060 026 0 1880 029 0 2380 030 转染 siRNA 后 24 48 和 72 h 组 E6 和 E7 mRNA 的表达水平明显低于对照组 F 80 71 182 18 P0 05 对照组和脂质体对照组间 SiHa 细胞 E6 和 E7 mRNA 的表达水平无明显差异 P0 05 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 2 2 Western Blotting 检测 PRb P53 Survivin 和 VEGF C 蛋白的表达化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 对照组 脂质体对照组 转染 72 h 组 pRb 的表达分别为 0 4050 029 0 4040 038 0 7130 064 P53 的表达分别为 0 6340 050 0 6220 077 1 2690 087 Survivin 的表达分别为 0 9650 081 1 0240 064 0 9260 047 VEGF C 的表达分别为 0 4160 061 0 4070 055 0 2900 032 与对照组相比 转染 72 h 组 SiHa 细胞内 pRb 和 P53 蛋白 的表达增加 F 59 78 29 00 P0 05 VEGF C 蛋白的表 达减少 F 7 58 P0 05 Survivin 蛋白的表达则未发生 明显变化 F 2 28 P0 05 对照组和脂质体对照组间 SiHa 细胞各蛋白的表达无明显差异 P0 05 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产 科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 3 讨 论化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 E6 蛋白与野生型 P53 蛋白的结合可使 P53 蛋白通过泛素蛋白 酶体通路降解 从而启动细胞周期并抑制细胞凋亡 细胞过度 增殖而导致肿瘤的发生 E7 蛋白通过结构上的 pRb 结合位点 优先与 pRb 结合并使其磷酸化 使 Rb E2F 复合物解离 E2F 游离 导致细胞周期调控失控 发生永生化 同时 由于 E6 和 E7 基因与人类自身基因序列之间无同源性 因此 E6 和 E7 基因是进行 HPV 阳性宫颈癌基因治疗研究的理想靶点 我们前 期的研究工作证实 脂质体法转染化学合成靶向 HPV16 E6 基因 的 siRNA 能特异性沉默 HPV16 阳性肿瘤细胞 SiHa 中 E6 基因 的转录表达 进而抑制细胞增殖 诱导细胞凋亡 且不同 siRNA 对靶基因的特定序列具有较强的选择偏向性和浓度依赖 性 2 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 E6 E7 基因转录后位于同一条 mRNA 上 二者共用同一个启动 子和一个早期多聚腺苷位点 因此被称为双顺反子 E6 E7 mRNA bicistronic E6 E7 mRNA 5 本研究所用的 siRNA 转 染 SiHa 细胞后 在抑制 E6 mRNA 表达的同时 也能够有效抑制 E7 mRNA 的表达 提示 E6 和 E7 基因之间存在着联合抑制的情 况 该结果和其他一些实验的结果不尽相符 JIANG 等 6 实验 表明 E6 siRNA 不影响 E7 基因的表达 E7 siRNA 不影响 E6 基 因的表达 BUTZ 等 7 构建表达 HPV18 E6 siRNA 的载体 能特 异性地抑制 E6 基因的表达 不影响 E7 基因的表达 这可能是 与干涉位点的选择 siRNA 的浓度差异以及不同靶细胞的选择 有关 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 Survivin 是凋亡抑制蛋白 IAP 家族中的一员 是迄今为止发 现的最强的细胞凋亡抑制因子 FROST 等 8 研究显示 在 Survivin 阳性的 CIN 级组织中 同时感染 HPV 的标本出现 Survivin 强阳性 而无 HPV 感染的只是 Survivin 中度阳性 在乳头瘤中 Survivin 和 HPV 表现出共同的细胞定位 推测 HPV 可能直接或间接地调节 Survivin 的表达和细胞分布 两者对宫 颈癌发生可能起着协同作用 目前两因子协同致癌的具体机制 尚不清楚 考虑与 P53 和 pRb 抑癌途径相关 野生型 P53 蛋白 能下调 Survivin 的表达 若 p53 突变则丧失此作用而导致 Survivin 高表达 9 还有研究显示 Survivin 与 CDK4 结合形 成复合物 使 pRb 磷酸化从而发挥抗凋亡作用 10 本研究结 果表明 E6 和 E7 基因特异性沉默可使 SiHa 细胞内抑癌蛋白 P53 和 pRb 表达上调 部分恢复了 P53 和 pRb 抑癌途径 但是 Survivin 蛋白的表达水平在转染前后并未发生明显变化 不能 证明二者之间存在着协同作用 可能的原因如下 化学合成 siRNA 存在易降解 作用持续时间短暂的不足 无法完全沉默 目的基因的表达 本实验对 E6 和 E7 基因转录后表达的抑制效 率在 60 左右 细胞内还有部分 E6 和 E7 蛋白的表达 仍可促 进 Survivin 的表达 可能存在其他不依赖 HPV 的激活 Survivin 基因表达的途径 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 VEGF C 是目前为止发现的最具特异性的淋巴管内皮细胞生长 刺激因子 可促进肿瘤淋巴管内皮细胞的迁移和增殖 SU 等 11 研究显示 COX 2 表达可显著上调 VEGF C 蛋白的表达 COX 2 表达受抑也可减弱 VEGF C 蛋白表达水平 而 E6 和 E7 蛋白通过抑制 P53 和 pRb 抑癌途径 可上调细胞内 COX 2 基因 表达 12 13 本研究结果显示 SiHa 细胞内抑癌蛋白 P53 和 pRb 表达上调可导致 VEGF C 蛋白表达减少 提示 HR HPV 和 VEGF C 在宫颈癌发生过程中可能起着协同作用 E6 和 E7 蛋白 在诱导宫颈上皮细胞生长增殖失控过程中可能通过导致 VEGF C 基因的异常高表达 进而影响肿瘤细胞的转移和扩散 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 总之 本研究结果表明 E6 和 E7 基因表达的沉默可导致细胞 内某些抑癌基因和癌基因等表达的改变 对肿瘤的细胞周期 凋亡 转移扩散等各个方面造成广泛的影响 并导致肿瘤细胞 内部调节分裂增殖细胞因子的异常表达趋向于正常 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 参考文献 化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究化学合成 siRNA 沉默宫颈癌 SiHa 细胞 E6 基因表达的进一步研究作者 史文天 王言奎 袁月秀 罗兵单位 1 青岛大学医学院附属医院妇产科 山东 青岛 2 青岛大学医学院微生物学教研室 摘要 目的 探讨靶向 HPV16 E6 基因特异性 siRNA 对 SiHa 细胞 E6 和 E7 基因表达的沉默效亨川县乒笺票磊纪吭扇刊嗓勒凛夸乐酪予奉狼钱轰瞧吊半震腰精报实跌易弧昔淘辉刀卸峪垄涝韶现蜕蛾瞳恫亨会乐筛匪呐特董釜容腺缓袖豪贴斜葵 1 WALBOOMERS J M JACOBS M V MANOS M M et al Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide J J Pathol 1999 189 12 19 2 袁月秀 王言奎 罗兵 等 化学合成 siRNA 对宫颈癌细胞 SiHa 中 E6 基因表达的抑制作用 J 中国 癌症杂志 2007 17 914 919 3 殷广洁 罗兵 王言奎 靶 向 HPV18 E6 基因不同锌指结构编码序列的 siRNA 对宫颈癌 HeLa 细胞作用的比较 J 青岛大学医学