药残检测实验中常见问题与解答

问题问题与解答与解答 1 药药残离心管最理想的洗残离心管最理想的洗涤涤方法 我方法 我们发现们发现每次作完回收每次作完回收实验时实验时 离心管就会 离心管就会 出出现现不同程度的不同程度的污污染染现现象 象 建建议实验议实验完成后完成后 先用流先用流动动自来水冲洗干自来水冲洗干净净 再超声再超声 2h 然后立即清洗干然后立即清洗干净净 2 实验实验中中对对水水质质的要求 三蒸水 蒸的要求 三蒸水 蒸馏馏水 水 纯净纯净水水还还是去离子水 是去离子水 最好用去离子水最好用去离子水 理理论论来来说这说这几种水都可以几种水都可以满满足分析要求足分析要求 但但对对于某些于某些项项目来目来 说还说还是有一定的区是有一定的区别别 蒸蒸馏馏水略水略逊逊 其余效果差异不大其余效果差异不大 3 器具器具污污染所造成的途径有几种 染所造成的途径有几种 一一 检样过检样过程中出程中出现现含量含量较较高的阳性高的阳性样样品品 二二 实验实验器具没有清洗干器具没有清洗干净净 容易被容易被污污染的染的实验实验器具器具 使用周期使用周期较长较长 建建议议方便更新的方便更新的实验实验器具器具 定期定期 3 5 个月个月 更新一次 更新一次 4 药药品的品的隐隐含含违违禁成份用禁成份用 ELISA 方法方法检测检测是否可行 是否可行 针对针对不同成分的不同成分的样样品品 通通过对应过对应的的样样品前品前处处理方法理方法 消除干消除干扰扰后后 可以用可以用 ELISA 方法方法进进行行检测检测 但 但应应防止与防止与药药残残实验实验交叉交叉污污染 染 5 同同样样一个一个样样品 称取两个品 称取两个样检测样检测两次 两次两次 两次值值差差别较别较大 是取大 是取样样原因原因还还是板是板间间 的差异 的差异 检测检测中常遇到的中常遇到的问题问题 正常情况下正常情况下 板孔板孔间间的的变变异不会异不会对样对样本的本的检测结检测结果造成果造成绝对绝对的影响的影响 样样品的取品的取样样 前前处处理理过过程和分析程和分析过过程中的操作程中的操作误误差是影响差是影响结结果差异果差异较较大的主大的主 要因素要因素 6 前前处处理理样样品所用的氮气是不是可品所用的氮气是不是可换换用用压缩压缩空气 空气中的氧气是否会空气 空气中的氧气是否会对样对样品品 产产生氧化作用 生氧化作用 进进而影响而影响试验结试验结果 果 可以用可以用压缩压缩空气替空气替换换氮气氮气 药药物的氧化在此不会物的氧化在此不会产产生生 7 将肉中将肉中药药物残留成份物残留成份转转移到提取液中 最佳的离心力 离心移到提取液中 最佳的离心力 离心时间时间是多少 不同是多少 不同 的的试剂试剂盒离心盒离心时间时间不一不一样样 组组份区份区别别 4500r min 离心离心 5min 离心力一般是离心力一般是 3000g 8 呋呋喃喃唑酮检测唑酮检测孵育孵育时间时间多多长为长为最佳 最佳 14 到到 16h 参考 参考仪仪器方法 器方法 有有实验证实验证明明过过最低可以最低可以缩缩短至短至 8 小小时时 但但对对于高阳于高阳 性性样样本来本来说说可能会出可能会出现现差异差异 建建议议使用使用 14 16h 9 回收率的回收率的测测定方法 每个盒子有一个推荐的回收率定方法 每个盒子有一个推荐的回收率测测定方法 定方法 不同的不同的试剂试剂盒的不同种盒的不同种类类的的样样本本 按照按照说说明明书书中中样样本的前本的前处处理方法理方法 回收率回收率 的的测测定方法也有不同 如硝基定方法也有不同 如硝基呋呋喃喃类类与与喹诺酮类喹诺酮类的添加方式等 添加回收的的添加方式等 添加回收的 体体积积公式公式 V C P 1000m 其中其中 V 为为添加的高添加的高标标准体准体积积 C 为为添加的添加的浓浓度度 P 为为 高高标标准的准的浓浓度度 ppb M 为样为样本的本的质质量量 g 10 脂肪存在脂肪存在为为什么会造成什么会造成试验试验的假阳性率比的假阳性率比较较高 高 在提取在提取过过程中程中 容易造成乳化容易造成乳化 对样对样本本进进行不正常的行不正常的浓缩浓缩 易与 易与杂质杂质混合混合难难 以分离 乳化后一般利用以分离 乳化后一般利用 60 水浴加水浴加热热半小半小时时 最好是先把上最好是先把上层层有机相去除后有机相去除后 再利用水浴加再利用水浴加热较热较好好 11 样样品品 OD 值值落在落在药药残残标标准曲准曲线线的那一区的那一区间值间值精确度最高 精确度最高 一般在第三和第四一般在第三和第四标标准之准之间间精确度精确度较较高高 但是不同的但是不同的试剂试剂盒曲盒曲线线的局部差异的局部差异 精确区精确区间间会稍有会稍有变变化 一般在 左右曲化 一般在 左右曲线线上的直上的直线线段段较为较为准确 准确 12 OD 值值偏低由什么因素引起的偏低由什么因素引起的 整板 整板 值值偏低 偏低 反反应应温度偏低温度偏低 反反应时间应时间偏少偏少 洗板洗板时间过长时间过长或或过过多多 点板点板时间过长时间过长 酶标仪酶标仪故障故障 波波长错误长错误 钨钨光灯寿命将近光灯寿命将近 导导致光致光强变强变弱 弱 试剂试剂盒有效期已盒有效期已过过或将或将过过 某些某些试剂试剂盒需要稀盒需要稀释释才使用的才使用的试剂试剂稀稀释释倍数倍数错误错误 试剂变质试剂变质或或污污染 染 不同批次的不同批次的试剂试剂盒混用 盒混用 试剂试剂盒的回温盒的回温时间时间太短 太短 试剂试剂盒保存盒保存环环境境过过于复于复杂杂 试剂试剂盒盒处处于极端条件下 比如放在于极端条件下 比如放在贴贴着冰箱壁 着冰箱壁 试剂冻伤试剂冻伤 样样本的 本的 值值偏低 偏低 样样本的阳性太高 本的阳性太高 某些某些试剂试剂盒的盒的样样本需要本需要调节调节 的没有 的没有调节调节到需要的 范到需要的 范围围 某些某些试剂试剂盒的复溶液需要稀盒的复溶液需要稀释释后才能使用的没有后才能使用的没有经过经过稀稀释释 样样本前本前处处理理时时没有去掉上没有去掉上层层有机相 加有机相 加样样吸取到上吸取到上层层有机相 有机相 样样本被本被污污染 染 样样本与本与标标准品的温度相差太多 准品的温度相差太多 样样本前本前处处理理时时使用的去离子水使用的去离子水质质量不合格 量不合格 13 样样本的吸光度本的吸光度值为值为什么会超出曲什么会超出曲线线上最大 上最大 值值 样样本在离心以后没有充分回温到室温或未与本在离心以后没有充分回温到室温或未与标标准品温度一致 准品温度一致 标标准品回温准品回温时间时间不不够够 样样本中含有非本中含有非样样本基本基质质的物的物质质 如有机溶 如有机溶剂剂 样样本复溶液稀本复溶液稀释错误释错误或直接利用去离子水作或直接利用去离子水作为为复溶液 复溶液 标标准 被准 被污污染 染 边缘边缘效效应应 反反应时间错误应时间错误 导导致致标标准品的 准品的 值值不上升而不上升而样样本的 本的 值继续值继续上升 上升 附 此种情况一般可以附 此种情况一般可以说说明明样样本本为为阴性阴性样样本 本 14 氮吹氮吹仪为仪为什么需要水浴 什么需要水浴 水浴加水浴加热热是是为为了使了使样样本本挥发挥发的速度更快一些 的速度更快一些 15 样样本本检测结检测结果在曲果在曲线线之外如何判定之外如何判定 把把样样本利用复溶液本利用复溶液进进行稀行稀释释后才后才进进行行检测检测 使之在曲使之在曲线线之中最佳之中最佳 16 氮吹氮吹仪仪步步骤为骤为什么要什么要 50 60 进进行水浴行水浴 一般有机溶一般有机溶剂剂的沸点在的沸点在 70 90 不等不等 而水浴的温度一般而水浴的温度一般较较溶溶剂剂的沸点略的沸点略 低低为为佳佳 故故对对于大众溶于大众溶剂剂 可以可以选选用用 50 6