葛根粉中总黄酮的提取和测定_第1页
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1 葛根粉中总黄酮的提取和测定葛根粉中总黄酮的提取和测定 一 实验目的 一 实验目的 熟悉超声波提取葛根粉中总黄酮的操作 比较紫外吸收与可见分光光度法测定总黄酮方法的相关性 二 实验原理 二 实验原理 试样经超声波用无水甲醇提取其中的总黄酮 紫外吸收法 经扫描其紫外吸收光谱后 在紫外最大吸收波长下测定吸光 度 根据标准曲线法定量 可见分光光度法 利用黄酮分子中的酚羟基在弱碱性条件下与铝离子发生 铬合反应生成有色物质 在一定浓度范围内 其吸光度与总黄酮浓度成线性关系 标准曲线法定量 三 主要仪器和试剂 三 主要仪器和试剂 紫外 可见分光光度计 超声波发生器 电子天平 芦丁标准溶液 精确称取 10mg 于 120 烘干至恒重的芦丁标样 以无水 甲醇溶液超声溶解并定容至 50ml 摇匀即得浓度为 0 2mg ml 芦丁标准液 硝酸铝溶液 100g L 称取 10g 硝酸铝加水溶解并稀释到 100mL 乙酸钾溶液 98 1g L 称取 9 81g 乙酸钾 加水溶解并稀释至 100mL 四 实验步骤 四 实验步骤 样品中总黄酮提取 准确称取 2 0g 精确到 0 1mg 葛根粉于 150mL 锥形瓶中 加入无水甲醇 40mL 在 60 超声提取 1h 抽滤 收集滤液于 100mL 容量瓶中 滤渣重新置于 原锥形瓶内再加入甲醇 40mL 在 60 超声提取 1h 抽滤 合并滤液 无水甲醇 2 定容 摇匀 紫外吸收测定 准确吸取芦丁标准液 0 00 0 50 1 00 1 50 2 00 3 00mL 于 25mL 容量 瓶内 分别用无水甲醇定容 摇匀 选取第四管溶液 以无水甲醇为参比液 扫描紫外吸收光谱 找出最大吸 收波长 max 在 max处 分别测定标准系列和样品提取液的吸光度 计算样品测定液 中总黄酮含量 可见分光光度法测定 准确吸取芦丁标准液 0 00 0 50 1 00 1 50 2 00 3 00mL 于 25mL 容量 瓶内 加无水甲醇至 6mL 分别加入硝酸铝溶液 100g L 1 mL 乙酸钾溶液 98 1g L 1 mL 用无水甲醇定容 摇匀 静置 30min 吸取样品提取液 1 0mL 于 25mL 容量 瓶内 加无水甲醇至 6mL 分别加入硝 酸铝溶液 100g L 1 mL 乙酸钾溶液 98 1g L 1 mL 用无水甲醇定容 摇匀 静置 30min 在 420nm 处 分别测定吸光度 计算样品测定液中总黄酮含量 五 数据处理 五 数据处理 100 1000 dm c X X 试样中总
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