硒缺乏对鸡胸腺GSH-Px、SOD和MDA的影响---张晓旭

医疗学院医疗学院 本本 科科 生生 毕毕 业业 论论 文文 题题 目目 硒缺乏对鸡胸腺硒缺乏对鸡胸腺 GSH PxGSH Px SODSOD 和和 MDAMDA 的影的影 响响 专专 业业 动物医学 班班 级级 11 级 92 班 姓姓 名名 张晓旭 学学 号号 号 指导教师指导教师 梁军生 职职 称称 讲师讲师 20152015 年年 6 6 月月 1 1 日日 辽宁医学院医疗学院教务处制辽宁医学院医疗学院教务处制 目 录 目 录 2 摘摘 要要 3 AbstractAbstract 4 前前 言言 5 1 1 硒在动物体内的吸收 分布 代谢 5 1 2 硒对机体免疫功能的影响 5 1 3 硒缺乏与氧化应激 5 1 4 硒缺乏与 NO 代谢 7 1 5 试验的目的和意义 7 2 材料与方法 9 2 1 实验动物与药品器械 9 2 3 主要试剂盒 9 2 4 实验的总体设计 9 2 5 样品的采集与处理 9 2 6 检测方法 9 2 7 数据分析及统计 9 3 试验结果 9 3 1 临床症状观察结果 9 3 2 病理学检查结果 10 3 3 胸腺脏器系数的检测结果 10 3 4 硒缺乏对鸡胸腺及全血中硒含量影响的检测结果 10 3 5 硒缺乏对鸡胸腺及血清 GSH Px 活性影响的检测结果 10 3 6 硒缺乏对鸡胸腺及血清 SOD 活性影响的检测结果 11 3 7 硒缺乏对鸡胸腺及血清 MDA 含量影响的检测结果 11 4 讨论 11 4 1 硒缺乏动物模型的建立 11 4 2 硒缺乏对鸡胸腺形态结构的影响 11 4 3 硒缺乏对鸡胸腺及血清抗氧化功能的影响 12 5 结论 13 参考文献 14 致 谢 15 硒缺乏对鸡胸腺硒缺乏对鸡胸腺 GSH PxGSH Px SODSOD 和和 MDAMDA 的影响的影响 摘摘 要要 硒作为鸡胸腺必需的微量元素 是胸腺自由基的清除剂 与其他抗氧化物质共同构 成机胸腺抗氧化防御系统 以维持胸腺自由基动态平衡 世界上许多国家都存在严重的 缺硒地区 而我国又是严重缺硒国家之一 硒缺乏症是一种危害多种鸡的世界性疾病 大量研究发现 鸡缺硒可以引起鸡渗出性素质 胸腺纤维变性和白肌病 猪桑椹心病 肝坏死以及牛 羊肌肉营养不良等各种疾病 给养殖业造成巨大的经济损失 本试验以 硒含量为 0 032mg kg 的日粮饲喂鸡复制硒缺乏鸡模型 分别于 30 45 60 及 75 日龄剖 杀采样 通过对鸡胸腺的病理学观察 脏器系数测定 血清及胸腺谷胱甘肽过氧化物酶 GSH Px 超过氧化物歧化酶 SOD 和丙二醛 MDA 的检测 研究硒缺乏致鸡胸腺 抗氧化能力的影响 为硒缺乏病的诊断和治疗提供科学的理论基础 关键词 硒缺乏 鸡 胸腺 抗氧化 The effect of selenium deficiency on the thymus MDA SOD and GSH Px in chicken Abstract Selenium as animal body essential trace elements is scavenger of free radicals and other antioxidant substances together constitute the body s antioxidant defense system in order to maintain the body s free radical homeostasis In many countries in the world there is a serious shortage of selenium while China is one of the serious shortage of selenium Selenium deficiency is a kind of harm in a variety of animal disease worldwide a large number of studies have found that animals lack of selenium can cause the exudation of chicken quality pancreatic fibrosis and white myopathy pig mulberry heart disease liver necrosis and cattle sheep muscle malnutrition diseases and to the aquaculture industry caused huge economic losses In this experiment the content of selenium was 0 032 mg kg of diets were fed to chickens copying selenium deficient animal model respectively in 30 45 60 and 75 days of age section kill sampling by chicken thymus was observed initially revealed the selenium deficiency induced suppression of chicken immune mechanism selenium lack of diagnosis and treatment of disease to provide scientific theoretical basis to provide a reference for the comparative medicine Key words Chicken thymus selenium deficiency SOD MDA GSH Px 前前 言言 硒作为动物机体必需的微量元素 是机体自由基的清除剂 徐辉碧等 1987 胡松 洲等1987 它与其它抗氧化物质共同构成机体内抗氧化防御系统 维持体内自由基动 态平衡 使组织细胞中的不饱和脂肪酸及其它脂类不被氧化 自然界中的硒通过食物链 由土壤到植物 再到动物 因此动物体内的硒含量密切地依赖于动物所采食饲料中的硒 含量 世界上许多国家都存在严重的缺硒地区 而我国又是严重的缺硒国家之一 因此 硒缺乏症作为一种危害多种动物的世界性疾病 给我国养殖业带来巨大的经济损失 硒 缺乏会引起机体含硒酶等抗氧化酶活性的降低 导致自由基清除受阻 内分泌紊乱 机 体免疫力下降等一系列机体功能障碍 进而导致疾病的发生 Dunbar et al 1993 近 年来硒缺乏对动物机体影响的研究已成为国内外研究的焦点和热点 1 1 硒在动物体内的吸收 分布 代谢硒在动物体内的吸收 分布 代谢 动物机体所有组织和细胞中都含有硒 含量视组织和摄食硒水平而异 进入机体内 的硒主要在十二指肠吸收 胃和大肠几乎不吸收 但是吸收因饲料中的硒含量 存在形 式及干扰元素的种类和水平而异 一般有机硒的生物利用率大于无机硒 植物性饲料硒 的生物利用率大于动物性饲料 张巧娥等 2001 硒被动物机体吸收后首先进入血液 大部分与血浆白蛋白结合 小部分与球蛋白形成不牢固结合 并有部分进入红细胞内 然后由血液转运到全身各个组织和器官 在日粮硒含量正常的情况下 机体组织中的硒 含量分布按肾 肝 胰 脾 心 骨 肌肉 脂肪顺序 依次递减 李辉等 2003 肝有贮蓄过量硒的功能 当体内缺硒时肝中的硒向全身输送 在正常情况下 动物体内 的硒主要通过尿和粪便等途径排泄 当采用注射或饲喂高硒物质时 将产生大量挥发性 甲基化硒代谢产物 二甲基硒化合物 后者主要是通过肺呼出 毛胜勇 2000 1 2 硒对机体免疫功能的影响硒对机体免疫功能的影响 机体发挥正常免疫功能需要有一定水平硒的参与 陶新等 2001 缺硒可影响免 疫系统的发育和功能 适量补充硒 可提高 T B 淋巴细胞 NK 细胞和吞噬细胞等免疫 细胞活性 增强机体非特异性免疫及细胞免疫 体液免疫功能 Margaet 2000 王栋钢 等 2003 张静 2006 但是补硒要适量 超过安全摄入量则会引起硒中毒 1 3 硒缺乏与氧化应激硒缺乏与氧化应激 动物机体在代谢过程中 将不断产生自由基 如超氧自由基 和过氧化物 如 H2O2 等各种对机体有害的物质 这些物质过量极易将机体生物膜过氧化为脂质过氧化 物 破坏膜结构 并造成组织细胞严重损伤 抗氧化防御系统是动物机体在进化过程中 形成的一套完整而复杂的防御系统 它包括抗氧化酶 如 SOD GSH Px CAT 等 脂 溶性的抗氧化剂 如维生素 E 辅酶 Q 等 水溶性小分子抗氧化剂 GSH 维生素 C 等 以及蛋白性抗氧化剂 铜蓝蛋白 金属硫蛋白等 等 这些抗氧化物质在机体清除 自由基 防止各种病理变化的发生发展中发挥重要作用 陈瑗 2004 郑荣梁 2007 硒在体内主要以有机硒化合物形式存在 分两类 一类是含硒氨基酸 一类是含硒 蛋白质 一般将以硒代半胱氨酸形式将硒共价结合到多肽链的蛋白质称硒蛋白 目前发 现的硒蛋白大多是重要的功能酶 如 GSH Px 硫氧还蛋白还原酶 TR 碘甲腺原氨酸 脱碘酶 ID 等 GSH Px 家族是体内最强的抗氧化酶 硒是以半胱氨酸的形式位于其活 性中心上 Arthur 2000 普遍认为硒主要通过硒蛋白 GSH Px 发挥其抗氧化作用 保 护机体免受氧化损伤 硒蛋白 GSH Px 的抗氧化作用包括分解脂质过氧化物 清除脂质过 氧化自由基中间产物 修复自由基引起的巯基化合物的分子损伤 在自由基破坏生命物 质之前将其清除或转化为稳定化合物和催化巯基化合物作为保护剂的反应 从而维持生 物膜系统的完整性 范华注等 1987 徐辉碧等 1991 GSH Px 与缺硒引起的病变呈 正相关 硒缺乏时 GSH Px 的活性快速降低 在硒的恢复过程中 GSH Px 活性的升高需 要更大剂量的硒和更长的时间 因此可以通过测定 GSH Px 的活性来判断缺硒和缺硒性疾 病 目前已发现了四种依赖于硒的 GSH Px 分别命名为 GSHPx 1 GSHPx 2 GSHPx 3 和 GSHPx 4 GSHPx 1 是细胞内的 GSH Px 是大鼠体内数量最多的一种硒蛋白 几乎 存在于所有的细胞中 它以还原型谷胱甘肽 GSH 为底物 催化还原不同种类的氢过 氧化物 从而清除组织中有害的氢过氧化物和自由基 对保护生物膜结构和功能的完整 发挥重要的作用 GSHPx 2 位于胃肠道内 是一种细胞内酶 它能很专一地保护食物免 受 H2O2 的损害 这种酶在阻止胃肠道癌症进行性变化中 显得特别重要 Wingler et al 1999 GSHPx 3 是细胞外或血浆 GSH Px 主要由肾脏分泌 但肝和乳腺也可产生 它可还原酯化的氢过氧化物和游离的氢过氧化物 细胞外 GSH Px 以控制细胞外氢过氧化 物来协助细胞内的 GSH Px 来发挥作用 GSHPx 4 也称为磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧 化物酶 PHGPx 是一种膜结合蛋白 具有界面性 能作用于膜和水之间的界面 对 磷脂氢过氧化物的活性较高 对保护生物膜的完整性具有重要意义 GSHPx 4 存在于许 多组织中 其中以睾丸中的含量最丰富 它位于膜而不在胞浆 Roveri 1994 此酶被 认为在预防脂质过氧化中起主要作用 因为它是能还原磷脂中脂肪酸氢过氧化物唯一的 细胞内 GSH Px Ursini 1999 研究发现在成熟精子尾部中段 线粒体被囊物质中至少 50 是 GSHPx 4 基于这些发现 推测硒蛋白 GSHPx 4 在精子成熟过程中具有双重作用 即在精子发育早期 GSHPx 4 以酶的活性形式存在发挥抗氧化功能 而在成熟精子中该 蛋白物理特性和生物学作用均有所改变 以无活性的 不可溶的蛋白质形式持续存在 倪银星 2002 高建忠 2004 大量研究表明 给动物补充适量的硒制剂可提高机 体内抗氧化酶的活性 进而提高机体抗氧化能力 许飞利 2007 研究发现饲料中添加 硒可以显著提高鸡血清中 GSH Px 和 SOD 的活性 且两种酶的活性都随着日粮中硒添加 量的上升而增加 胥保华等 2005 研究表明饲料中亚硒酸钠添加浓度在 0 20 0 4 mg kg 时 GSH Px 的活性最佳 甘璐等 2003 研究了不同剂量的硒对大鼠肝脏抗氧化功能的影 响 结果发现补硒 20 g kg 的大鼠 机体内反映脂质过氧化水平的 MDA 含量降低 同时 SOD CAT 和 GSH Px 活性增高 说明硒通过提高机体内抗氧化酶的活性有效抑制大鼠 肝脏的脂质过氧化 蒋英子等 2005 研究发现 有机硒能够通过提高 GSH Px 的活性而 降低由 CCl4 诱导的小鼠肝脏脂质过氧化损伤的发生 苏传福 2008 研究表明日粮中不 同的硒含量对草鱼肝胰脏和血清抗氧化酶活性及 MDA 含量和 T AOC 有显著影响 P 0 05 硒含量为 0 66 mg kg 时 可显著提高草鱼血清和肝胰脏 CAT GSH Px 活性 及 T AOC 降低血清和肝胰脏 MDA 浓度 草鱼肝胰脏和血清中的抗氧化酶系统总体达 到相对平衡 有效地抵抗氧化损伤 章子贵等 2005 研究表明低硒能引起机体抗氧化 酶系的紊乱及氧化损伤 从而影响免疫系统 张丹英等 2008 研究了低硒 低碘对大 鼠肝脏某些生化指标的影响 结果显示低硒组大鼠肝脏中 GSH Px 活性明显降低 MDA NO 含量明显升高 当机体硒含量或 GSH Px 活性降低时 都将会导致淋巴细胞代 谢过程中脂质过氧化物作用的相对增强 过多的过氧化物扩散到细胞的各个部位 扰乱 各种酶的正常生化功能 引起各种生物膜的损伤 最终导致机体的细胞免疫和体液免疫 等免疫防御体系的损伤及免疫功能的降低 Brown et al 2000 Tapiero 等 2003 和 Lewin 等 2001 也证实了硒缺乏可影响机体的抗氧化能力 导致氧化应激的发生 以上 研究表明 低硒能扰乱机体抗氧化防御系统的平衡 导致机体氧化应激 引起免疫抑制 和机体损伤 1 4 硒缺乏与硒缺乏与 NO 代谢代谢 自由基是体内正常的代谢产物 对维持机体正常的生理功能具有重要意义 其中 NO 是较为重要的自由基 它作为一种生物信使分子和细胞毒效应因子近年来引起极大的 关注 NO 是在辅酶 NADPH 钙调蛋白 血红素等辅助因子的作用下 由一氧化氮合 酶 NOS 以 L 精氨酸 L Arg 和氧分子为底物 催化 L Arg 产生的 武瑞 2001 生理条件下 动物体内的 NO 维持动态平衡 参与机体的新陈代谢和贮能 参与细胞的解 毒功能等 但是高浓度的 NO 具有细胞毒性作用 可以与超氧阴离子结合生成过氧亚硝酸 根 ONOO ONOO 及其分解产物可引起膜的脂质过氧化 导致细胞膜结构和功能的破 坏 同时还通过抑制 DNA 合成及线粒体呼吸等途径引起组织损伤 张艳淑等 2000 研究表明硒可干扰细胞内 NO 的代谢 许龙兵等 2005 研究表明 富硒乳酸菌可以抑制 镉诱发小鼠血浆中 NO 含量的升高和 TNF 的释放 从而缓解镉对组织的损伤作用 赵 洪进等 2006 研究结果显示富硒酵母可显著降低肝癌大鼠血浆和肝组织的 NO 含量和 NOS 活性显著 全血和肝组织中 GSH Px 升高 表明富硒酵母能提高抗氧化酶的活性 抑 制 NO 的产生 清除体内大量过剩的氧自由基 从而减轻 NO 等自由基所致的脂质过氧化 损伤 低硒也可引起 NO 含量的变化 庄惠君等 2004 通过复制硒缺乏动物模型来检测 富硒蘑菇对小鼠睾丸脂质过氧化和精子活力的影响 测定了睾丸中硒 MDA 和 NO 含量 GSH Px 和 NOS 活性 结果表明 富硒蘑菇具有提高含硒酶 GSH Px 活性 降低 NOS 活性和 NO 含量 从而减轻自由基对睾丸损伤作用 金明昌 2007 在研究幼鲤硒缺乏症及其机 制和硒需要量时发现硒缺乏可导致幼鲤血清和肝脏中 NOS 活性增强 NO 含量升高 仝宗 喜 2004 研究显示硒缺乏可引起鸡胸腺和血清内 NO 代谢发生改变 1 5 试验的目的和意义试验的目的和意义 硒作为鸡必需的一种微量元素 对鸡生长 发育 繁殖等方面都起着极为重要的作 用 硒缺乏会引起机体抗氧化能力降低 导致自由基清除受阻 内分泌紊乱 机体免疫 能力下降等一系列机体功能障碍 进而导致疾病的发生 世界上许多国家都存在严重的 缺硒地区 而我国又是缺硒严重国家之一 缺硒病在个别区域仍时有发生 因此对硒的 研究显得至关重要 目前国内外学者对畜禽硒缺乏症在流行病学 致病原因 临床症状 剖检变化 发病机理等方面进行了大量的研究 但是硒缺乏致鸡免疫抑制的机制研究较 少 本试验通过给雏鸡饲喂自配的低硒饲料复制硒缺乏鸡模型 检测鸡胸腺在揭示硒缺 乏致鸡 GSH Px SOD 和 MDA 的影响 为硒缺乏病的诊断和治疗提供科学的理论基础 为 比较医学提供借鉴 实验部分 2 材料与方法 2 1 实验动物与药品器械实验动物与药品器械 1 日龄健康海蓝褐雏鸡 200 只 购自辽宁医学院鸡场 亚硒酸钠 刀片 镊子 显微 镜 2 5 戊二醛磷酸盐缓冲液 10 福尔马林磷酸盐缓冲液 组织切片机 Forma 70C 超 低温冰箱 H 7650 透射电子显微镜 70 乙醇 TGL 16G C 型高速离心机 2 3 主要试剂盒主要试剂盒 GSH Px活性测定试剂盒 SOD活性测定试剂盒 MDA含量测定试剂盒购自南京建成生物 研究所 2 42 4 实验的总体设计实验的总体设计 选择 1 日龄健康海蓝褐雏鸡 200 只 随机分为对照组和缺硒组 各 100 只 缺硒组 鸡饲喂自配的低硒饲料 经测定饲料中的硒含量为 0 032 mg kg 对照组鸡饲料根据生产 标准在低硒饲料基础上添加亚硒酸钠使饲料中的硒含量为 0 282mg kg 整个试验期间 各组鸡均自由采食和饮水 常规免疫 分别于 30 45 60 及 75 日龄每组随机选取 20 只 剖杀取样 2 52 5 样品的采集与处理样品的采集与处理 鸡剖杀后 用预冷的刀片 镊子等迅速采取大小为 1 0mm 1 0mm 0 5mm 的脾脏组 织块 固定于 pH 值为 7 2 的 2 5 戊二醛磷酸盐缓冲液中 4 下保存 用于超微结构观 察 采取 5mm 5mm 3mm 胸腺组织块固定于 10 福尔马林磷酸盐缓冲液中 用于病理组 织学检查 取 0 5g 各组织 快速冰浴匀浆用于 GSH Px SOD 和 MDA 的检测 2 62 6 检测方法检测方法 2 6 1 临床症状的检查 常规饲养 自由采食和饮水 定期称重 认真观察并做好记录 收集硒缺乏症鸡的 临床症状 2 6 2 病理学的检查 2 6 2 1 眼观变化 常规剖检观察各脏器病理变化 称量各免疫器官并记录 按照下列公式计算脏器系 数 脏器系数 组织重 g 体重 kg 2 6 2 2 病理组织学观察 将固定在福尔马林中用于光镜检查的组织块按常规方法制作病理石蜡切片 HE 染色 在显微镜下观察 照相并记录试验结果 2 72 7 数据分析及统计数据分析及统计 数据采用 Excel 2007 统计记录试验数据 应用 SAS for Windouws 6 12 软件进行方 差分析 比较个两试验组差异显著性 试验结果以均数 标准差表示 3 试验结果 3 13 1 临床症状观察结果临床症状观察结果 整个试验期内 对照组鸡临床症状和生长发育表现正常 缺硒组鸡开始精神沉郁 食欲减退 饮欲增加 羽毛蓬乱无光泽 45d 时冠 喙及肉髯颜色变淡 在躯体较低垂部 位的胸腹 腿侧 颈 翼皮下出现淡绿色或青色水肿 皮下穿刺可看到淡黄或淡黄绿色 胶冻样液体 70d 时精神高度沉郁 缩颈 闭眼 食欲废绝 站立困难 排出绿 褐或是 乳白色粪便 脱水并且严重消瘦 3 23 2 病理学检查结果病理学检查结果 3 2 1 病理剖检结果 对照组鸡表现正常 缺硒组鸡有的在胸部皮下呈淡青色或绿色外观水肿 切开皮肤 皮下有淡绿色或淡黄绿色胶冻样液体 皮下及胸部肌肉 大腿肌肉有不同程度的出血点 肌肉颜色变淡 并呈水肿样外观 胰腺体积缩小有坚实感 心包液增多 心肌色淡 心 包腔扩张并充满浆液 胸腺 脾脏 法氏囊体积缩小 胸腺有出血点 3 2 2 病理组织学观察结果 对照组鸡胸腺淋巴细胞形状 细胞核 细胞质 线粒体 内质网等细胞器结构完整 缺硒组鸡胸腺淋巴细胞的超微结构发生改变 具体表现为胸腺淋巴细胞核膜破裂 染色 质边聚 浓缩 形成环状核或碎裂成团块状或呈新月形贴附于核膜下 核仁消失 核中 央电子密度降低 线粒体肿胀 嵴断裂 部分嵴溶解甚至消失 内质网肿胀 排列紊乱 网池增宽 融合成空泡状 呈凋亡性变化 缺硒组胸腺细胞解离 细胞膜皱褶 破裂或 消失 核溶解 核周边形成环状周隙 胞质内细胞器明显减少 电子密度降低 3 33 3 胸腺脏器系数的检测结果胸腺脏器系数的检测结果 由表 1 和图 1 可知 缺硒组胸腺的脏器系数与对照组比较均有不同程度的降低 差 异均显著 P 0 05 或极显著 P 0 01 表 1 胸腺脏器系数测定结果 组别 30d45d60d75d 对照组0 329 0 038Cc0 312 0 018CDc0 268 0 028DEd0 522 0 011Aa 缺硒组0 272 0 026DEd0 251 0 028EFd0 213 0 032Fe0 403 0 030Bb 3 43 4 硒缺乏对鸡胸腺及全血中硒含量影响的检测结果硒缺乏对鸡胸腺及全血中硒含量影响的检测结果 由表 2 和图 2 可知 缺硒组胸腺和全血中的硒含量随试验期的延长呈下降趋势 与 同一时间点对照组比较差异均显著 P 0 05 或极显著 P 0 01 表 2 硒缺乏对鸡胸腺及血清中硒含量影响的检测结果 组别 30d45d60d75d 对照组0 267 0 019Aa0 248 0 018Aa0 255 0 054Aa0 287 0 036Aa 全血 缺硒组0 199 0 031 Ab0 153 0 020ABc0 093 0 022Dd0 049 0 012De 对照组0 261 0 020Ab0 284 0 017Aa0 279 0 019Aab0 267 0 015Aab 胸腺 缺硒组0 148 0 013 Bc0 123 0 012Bd0 088 0 006Ce0 057 0 005Df 3 53 5 硒缺乏对鸡胸腺及血清硒缺乏对鸡胸腺及血清 GSH PxGSH Px 活性影响的检测结果活性影响的检测结果 由表 3 和图 3 可知 缺硒组胸腺及血清中 GSH Px 活性随试验期的延长呈下降趋势 与同一时间点对照组比较 差异均显著 P 0 05 或极显著 P 0 01 表 3 硒缺乏对鸡胸腺及血清 GSH Px 活性影响的检测结果 组别 30d45d60d75d 对照组381 04 5 58 CBb403 20 16 37ABa412 93 13 36Aa01 65 14 21 ABa 全血 缺硒组361 27 16 19Cc333 00 15 43 Dd310 79 13 93 De270 87 9 65Ef 对照组40 08 1 93Bb43 442 2 88ABa45 45 2 71Aa40 41 2 51 Bb 胸腺 缺硒组33 82 1 55Cc30 67 1 16 Cd45 45 2 71Aa17 74 2 11 Ef 3 63 6 硒缺乏对鸡胸腺及血清硒缺乏对鸡胸腺及血清 SODSOD 活性影响的检测结果活性影响的检测结果 由表 4 和图 4 可知 缺硒组免疫器官及血清中 SOD 活性随试验期的延长呈下降趋势 与同一时间点对照组比较 差异均显著 P 0 05 或极显著 P 0 01 表 4 硒缺乏对鸡胸腺及血清 SOD 活性影响的检测结果 组别 30d45d60d75d 对照组130 39 0 75Bd136 83 7 34Ac146 86 4 59Ab153 57 1 60Aa 全血 缺硒组113 56 1 37Ce103 41 3 72Df90 81 3 38Eg77 94 1 63 Fh 对照组129 70 9 44Aa134 54 10 66Aa133 96 2 61Aa135 57 6 97Aa 胸腺 缺硒组112 95 9 77Bb108 63 6 67Bb88 92 4 20 Cc80 77 6 12 Cc 3 73 7 硒缺乏对鸡胸腺及血清硒缺乏对鸡胸腺及血清 MDAMDA 含量影响的检测结果含量影响的检测结果 由表 5 和图 5 可知 缺硒组免疫器官及血清中 MDA 含量随试验期的延长呈上升趋 势 与同一时间点对照组比较 差异均显著 P 0 05 或极显著 P 0 01 表 5 硒缺乏对鸡免疫器官及血清 MDA 含量影响的检测结果 组别 30d45d60d75d 对照组2 160 0 304Ee3 195 0 506Aa3 273 0 296Aa3 098 0 291Aa 全血 缺硒组5 310 0 553 Bb5 732 0 386Bb7 169 0 598Cc8 510 0 224Dd 对照组0 806 0 163 Dd0 868 0 088Dd0 823 0 065Dd0 772 0 066Dd 胸腺 缺硒组0 886 0 101 Dd1 137 0 159Cc1 683 0 132Bb2 010 0 116Aa 4 讨论 4 14 1 硒缺乏动物模型的建立硒缺乏动物模型的建立 整个试验期内 对照组鸡表现正常 缺硒组鸡 15 d 时羽毛蓬乱无光泽 食欲减退 生长缓慢 45 d 时冠 喙及肉髯颜色逐渐变淡 在躯体较低垂部位的胸腹 腿侧 颈 翼皮下出现淡绿色或青色水肿 皮下穿刺可看到淡黄或淡黄绿色胶冻样液体 70 d 时精 神高度沉郁 缩颈 闭眼 食欲废绝 病鸡曲爪 行走困难 排出绿 褐或是乳白色粪 便 脱水并且严重消瘦闭眼 缺硒组鸡剖检可见肌营养不良和胰腺萎缩 以上症状与以 往报道的硒缺乏动物的临床症状基本相同 仝宗喜 2004 徐娟美 2005 徐海梅 2006 表明硒缺乏动物模型复制成功 鸡免疫器官和全血硒含量测定结果表明 缺硒 组鸡免疫器官及血清中的硒含量随试验期延长呈下降趋势 明显低于对照组 且随组织 及血清中硒含量的降低 硒缺乏症状逐渐明显 进一步证实硒缺乏动物模型复制成功 4 24 2 硒缺乏对鸡胸腺形态结构的影响硒缺乏对鸡胸腺形态结构的影响 脏器系数又称脏体比 是动物某脏器的重量与其体重之比值 正常时各脏器与体重 的比值比较恒定 脏器系数增大 表示脏器充血 水肿或增生肥大等 脏器系数减小 表示脏器萎缩及其它退行性改变 因此免疫器官脏器系数可作为评价禽类免疫状况的良 好指标 本实验结果显示 胸腺的脏器系数随试验期的延长和组织中硒含量减少 脏器 系数明显减小 表明硒缺乏对鸡胸腺的损伤程度逐渐加重 与石军 2002 和郑素玲 2004 的报道基本一致 表明硒缺乏可以引起免疫器官形态结构发生改变 进而影响 免疫器官发育 4 34 3 硒缺乏对鸡胸腺及血清抗氧化功能的影响硒缺乏对鸡胸腺及血清抗氧化功能的影响 GSH Px 主要存在于真核细胞胞浆里 在线粒体里也发现有此种酶 它通过特异性的 催化 GSH 为氧化型谷胱甘肽 GSSH 而实现对氢过氧化脂 LOOH 和 H2O2的分解 并可 以清除由 ROS 和 OH 诱发的脂质过氧化物 保护细胞膜结构和功能的完整性 硒是 GSH Px 的活性成分 因此通常将 GSH Px 的活性作为衡量机体内硒水平的一项重要指标 SOD 可以清除 O2 而保护机体细胞免受损伤 其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能 力 赵先英等 2004 认为 硒与 SOD 活性有密切的关系 但不是单纯的递增和递减关 系 只有当硒在适当的浓度范围内 SOD 活性才可达到最高 低浓度硒对 SOD 活性起激活效应 高浓度硒对 SOD 活性起抑制作用 MDA 是自由基攻 击生物膜中的多不饱和脂肪酸 引发脂质过氧化作用形成的脂质过氧化物 因而其含量 的高低常可反映机体脂质过氧化的程度 间接反映细胞受损程度 赵克然等 2000 大量研究表明 给动物补充适量的硒制剂可提高机体内抗氧化酶的活性 提高机体 抗氧化能力 李宣海等 1999 报道 给大鼠补充适量硒 0 2 mg kg 能提高红细胞中 GSH Px 活性和肝及血清中 SOD 的活性 同时降低血清中 MDA 含量 何宏超等 2009 研 究了不同硒源对生长肥育猪生产性能的影响 结果显示饲料中添加硒酵母 在一定程度 上提高了血清和肌肉 GSH Px 的活力 降低了 MDA 的含量 硒缺乏时 由于体内抗氧化酶 系的紊乱而导致脂质过氧化产物蓄积 对机体产生氧化损伤 从而影响免疫功能 Saito et al 2003 贾奎寿 2002 张舸 2005 研究显示长期低硒 低硒联合低碘会极大 降低发育期仔鼠肝脏和全血中 GSH Px 活性 其损害在母体内就已经发生 子代较亲代损 伤更严重 还可降低发育期仔鼠脑内 GSH Px 和 SOD 活性 从而破坏脑内抗氧化酶系统 金明昌 2007 研究显示 日粮中硒缺乏可引起幼鲤血清 GSH Px 和 SOD 活力降低 MDA 含量升高 且日粮中硒添加水平越低 血清 GSH Px 和 SOD 活力降低越明显 MDA 含量则 越高 仝宗喜 2004 研究表明硒缺乏可导致雏鸡组织器官中 T AOC 下降 GSH Px 活性 降低 MDA 含量升高 使机体处于氧化应激状态 导致免疫细胞的膜系统受到损伤 免疫 细胞结构和功能受到损害 造成机体免疫功能下降 低硒还可以导致红细胞膜上 GSH Px SOD 和 CAT 活力的降低 孙超 2002 本试验结果显示硒缺乏可影响胸腺内 GSH Px SOD 活性和 MDA 含量 随着试验期的 延长 GSH Px 和 SOD 活性下降 MDA 含量增加 并呈现明显的时间 效应关系 表明硒缺 乏引起动物机体抗氧化能力的降低 机体发生了脂质过氧化 从而导致组织器官受损 证实了硒缺乏可导致鸡免疫器官的氧化应激 5 结论 本课题以海兰褐鸡为试验对象 饲喂自配的低硒日粮 复制硒缺乏动物模型 通过 对胸腺及血清的抗