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文档简介
酶联免疫吸附测定(ELISA),作者:雷雨田2016年8月,将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法,ELISA基本规则,抗原或抗体的固相化、特异性结合以及抗原或抗体的酶标记体系中的抗原和抗体保持免疫学活性体系中的酶保持活性所有未被固定的部分会被洗去酶标物与受检样本的含量能呈现出特定的比例根据酶对底物的催化会产生某种可以检测的信号变化,常见的检测方法有以下几种:,直接法/间接法双抗体(抗原)夹心法竞争法,直接法,在微孔板的孔中加入含有待测抗原的缓冲溶液,放置一段时间使抗原通过静电作用吸附到载体上加入与反应无关的蛋白溶液(如牛血清蛋白),将载体上未被抗原覆盖的部分摭住加入酶标抗体,与待测抗原结合洗去未结合的抗体加入酶催化变色的底物抗原浓度与酶的浓度成正比,间接法,双抗体(抗原)夹心法,在载体表面预包被已知数量的捕获抗体(1)加入无关蛋白封闭不需要的结合位点加入待测抗原,令其被抗体捕获(2)将未被固定的抗原洗去加入特异性抗体,使其连接到该抗原另外的结合位点(3)加入酶标二抗连结到检测抗体的FC段(4)再次清洗,去除未固定的酶标二抗最后加入可在酶作用下产生颜色/荧光/电化学信号变化的底物(5)通过信号的变化检测抗原含量,竞争法,直接竞争法:标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体间接竞争法:标记抗体,固相抗原与液相抗原(样本)竞争标记抗体,直接竞争法,待测抗原,载体,载体,待测抗原,底物,载体,直接竞争法:标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体,竞争抗原,竞争抗原,竞争抗原,间接竞争法,载体,载体,待测抗原,待测抗原,底物,载体,待测抗原,间
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