微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)

微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌 微生物实验报告 2 细菌形态观察 一 实验目的 1 掌握光学显微镜 油镜 的使用及日常维护 2 掌握细菌的三种形态 3 掌握临床常见细菌的形态及染色 4 掌握细菌的特殊结构 5 了解支原体 衣原体 立克次氏体 螺旋体及真菌的结构特点 二 实验原理 1 普通光学显微镜 油镜 的使用 1 在标本欲检部位滴一滴香柏油 然后转换油镜头 2 从侧面观察并慢慢转动粗调节器 使油镜头浸没在油滴内 当油镜头几乎接触玻片 时停止转动 以免碰撞玻片 用双眼观察目镜 同时调节细调节器 直至细菌清晰 3 根据需要调节显微镜亮度 2 普通光学显微镜的维护 1 移动显微镜时 用右手持镜壁 左手托镜座 平端于胸前 2 油镜用毕后 要立即用擦镜纸擦去香柏油 再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头 最后 用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去 以免损伤油镜头 3 镜头擦净后 降低接物镜并将其转成八字形 罩好镜罩放入柜内 4 做好使用记录 3 微生物知识 1 细菌按形态分类 球菌 球形 包括双球菌 四联球菌 八叠球菌 葡萄球菌 链球菌等 杆菌 杆状 包括单杆菌 双杆菌 链杆菌 分枝杆菌 双歧杆菌等 螺旋菌 螺旋状 包括螺旋菌 弧菌等 2 细菌的基本结构 细胞壁 细胞膜 细胞质 核质 核蛋白体 3 细菌的特殊结构 荚膜 如肺炎双球菌 鞭毛 又分单毛菌 双毛菌 丛毛菌 周毛菌 如 变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞 如破伤风梭菌 炭疽芽胞杆菌 肉毒梭菌 4 微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称 包括原核类 真核类和非 细胞类 原核类 细菌 放线菌 蓝藻 衣原体 支原体 立克次氏体 真核类 真菌 原生动物 显微藻类 非细胞类 病毒 亚病毒 5 真菌 单细胞 圆形 芽生孢子 如 酵母菌 微生物实验报告 3 多细胞 菌丝及孢子 孢子出芽 如 霉菌 6 白假私酵母菌 白念 生物学性状 G 单细胞真菌 芽生孢子 类酵母型菌落 厚膜孢子 假菌丝有助于鉴定 致病性 皮肤粘膜 鹅口疮 内脏感染 CNS 感染 微生物学检查 直接涂片 染色后镜检 菌体 芽生孢子 假菌丝 7 新型隐球菌 生物学性状 圆形酵母型菌 外周有厚荚膜 比菌体大 1 3 倍 致病性 吸入后侵犯皮肤 粘膜等 慢性炎症和脓肿 侵袭 CNS 亚急性或 慢性脑膜炎 微生物学检查 脑脊液离心后取沉淀 痰和脓标本直接检查 墨汁负染见出芽菌 体外围有宽厚荚膜为阳性 三 实验材料 记号笔 1 支 大镊子 1 支 火柴 1 盒 蜡笔 1 支 试管架 1 个 酒精灯 1 个 接种环 1 支 Olympus 显微镜 1 台 显微镜使用记录本 1 个 四 实验内容 1 观察细菌三种形态 1 球菌 链球菌 葡萄球菌 肺炎双球菌 子弹形 脑膜炎双球菌 蚕豆形 四联菌 2 杆菌 破伤风杆菌 白喉杆菌 异染颗粒 绿脓杆菌 伤寒杆菌 变形杆菌 3 螺形菌 弧菌 霍乱弧菌 螺菌 螺杆菌 幽门螺杆菌 弯曲菌 2 观察细菌的特殊结构 芽胞 鞭毛 荚膜 异染颗粒 钩端螺旋体 幽门螺杆菌 3 绘图 葡萄球菌 staphyloccocus 肺炎双球菌 pneumo coccus 脑膜炎球菌 meningococcus 破伤风杆菌 Clostridium Tantenus 霍乱弧菌 vibrio cholera 芽胞 spore 鞭毛 flagellum 荚膜 capsule 钩端螺旋体 leptospira 五 实验结果 绘 8 幅细菌镜下图 已交 六 思考与讨论 1 显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因 1 未滴加镜油 2 镜头不干净 3 标本放置反了 所以达不到对焦平面 4 制片问题 标本太厚 染色误差等 微生物实验报告 4 细菌分布 一 实验目的 1 掌握固体培养基的制备 2 掌握机体常见部位及环境中的细菌采样 培养 及初步鉴定 3 掌握革兰氏染色方法及结果判定 二 实验原理 1 培养基 1 细菌生长所需营养物质 水 碳源 氮源 无机物和生长因子 2 培养基分类 1 根据营养物质 营养培养基 选择培养基 鉴别培养基 2 根据物理性质 液体培养基 固体培养基和半固体培养基 3 细菌在培养基中的生长状况 表面生长 均匀浑浊生长 沉淀生长 2 革兰氏染色 革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖 peptidoglycan 层较厚 经乙醇处理后使之发生脱水作用而使 孔径缩小 通道弯曲 结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色 而革兰阴性细菌的 肽聚糖层很薄 脂肪含量高 经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过 因而将 染料洗去而被脱色 三 实验材料 咽拭子 羊血培养皿 1 套 人 大号普通培养皿 1 块 2 人 载玻片 1 片 人 A B 菌 6 套 桌 NS 1 份 人 滤纸 1 张 人 消毒液 4 套 桌 三角瓶 电天平 营养琼脂 称药纸 称药勺 量筒 1 套 桌 四 实验内容 1 培养基制备 1 按产品要求称取营养琼脂 2 每实验桌制备 200ml 3 高压蒸汽灭菌后 在洁净工作台内倒平皿 4 所制备的普通平皿用于空气培养 2 机体不同部位的细菌采样 培养 1 咽部正常菌群的采样 培养 咽拭子擦拭咽部 平行划线法接种于羊血平皿 2 手指消毒前后细菌的采样培养 未消毒手指平行划线法接种于普通平皿 同一手指碘酒 酒精消毒后平行划线法接种 于普通平皿 3 环境中细菌采样培养 1 空气培养 将培养皿打开暴露于空气中 20 分钟后盖好平皿盖儿 2 流通纸币 或硬币 的细菌采样培养 微生物实验报告 5 将硬币正反面分别在培养基上充分接触 3 采样结束后 将培养皿底部朝上放入铁丝筐 统一置培养箱 37 18 24 小时 4 A B C 菌鉴定 革兰氏染色法 1 细菌涂片制备程序 1 取一干净玻片 火焰上方缓缓通过三次去油 2 蜡笔画线将玻片分割为 A B C 三区域 3 接种环取生理盐水分别滴入 A B 两区域各一滴 4 分别取少许 A B C 菌 与生理盐水充分混匀成菌液 风干后形成菌膜 5 固定 火焰上方缓缓通过三次 6 革兰氏染色 7 滤纸吸干水分 油镜观察 2 革兰氏染色 1 细菌涂片 火焰固定 2 结晶紫初染 1min 3 卢戈氏碘液媒染 1min 4 95 乙醇脱色 30 40s 5 沙黄复染 1min 五 实验结果 A G 球菌 推测为金黄色葡萄球菌 B G 短杆菌 推测为大肠杆菌 六 思考与讨论 1 影响革兰氏染色的因素 1 细菌本身因素 菌龄 如果菌龄太大 可能出现假阴性 2 操作因素 涂片 取菌应适量 涂片要均匀 如果某个部分菌层太厚 可能在脱色时达不到 会 导致局部假阳性 固定 固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性 但是固定不够 细菌会在水洗时被冲掉 初染 初染时间虽然说是 1 分钟 但是可以适当延长 时间太短会出现假阴性 染色 滴加不均匀可能出现半阴半阳 媒染 和初染一样 脱色 脱色时间不能过长 基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了 否则容易出现 假阴性 复染 复染时间需足够长 否则可能会染不上 微生物实验报告 6 消毒灭菌 一 实验目的 1 了解实验室常用消毒灭菌方法及其原理 2 掌握实验中所用仪器的使用方法 3 掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定 4 强化革兰氏染色技能 二 实验原理 1 口咽部及皮肤正常菌群 鼻咽部及扁桃体 葡萄球菌 类白喉杆菌 肺链 溶血及非溶血性链球菌 奈瑟菌等 口腔 链球菌多见 放线菌 螺旋体 G 杆菌等 皮肤 表皮葡萄球菌 丙酸杆菌 类白喉杆菌 铜绿假单胞菌 2 溶血类型 溶血 现象 草绿色溶血环 常见菌种 机会致病菌 甲链 肺链 原理 细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白 溶血 现象 透明溶血环 常见菌种 致病菌 乙链 原理 细菌释放溶血素使红细胞破裂 血红蛋白释放 三 实验材料 咽拭子培养物 1 套 人 空气 纸币 手指消毒前后培养物 1 套 2 载玻片 1 片 人 NS 1 支 人 滤纸 1 张 人 四 实验内容 1 常用消毒灭菌方法 示教讲解 1 热力灭菌 1 干热灭菌法 焚化 烧灼 干烤 160 2 小时 2 湿热灭菌法 煮沸 2 Na2CO3 105 高压蒸汽灭菌 103 4kPa 20 分钟 121 临床运用最广的灭菌方法 2 紫外线 Ultraviolet radiation 波长 265nm 266nm DNA 吸收光谱 杀菌能力最强 紫外光穿透力差 一般只用于不 耐热物品表面的消毒 3 过滤 filtration 用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌 用于不耐热物质的灭菌 血清 毒素 抗生素等 滤菌器 薄膜滤菌器 玻璃滤菌器 石棉滤菌器 素陶瓷滤菌器 4 低温 保存菌种 冷冻真空干燥法 微生物实验报告 7 5 常用的化学消毒剂 类别作用机制常用种类 酚类蛋白变性 细胞膜损伤洗必泰 醇类去除脂类 蛋白变性乙醇 卤素蛋白变性氯气 碘酊 碘伏 重金属盐蛋白变性红汞 硫柳汞 硝酸银 醛类蛋白变性福尔马林 戊二醛 表面活性剂蛋白变性 细胞膜损伤新洁而灭 酸碱类破坏细胞膜 细胞壁 蛋白变性十一烯酸 染料干扰氧化 抑制繁殖龙胆紫 6 实验室常用化学消毒剂 70 75 乙醇 洁净台消毒 来苏水擦拭 防腐剂 三氯甲烷 硫柳汞 叠氮钠 2 细菌分布结果鉴定 1 观察菌落 2 取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观察 五 实验结果 1 咽部正常菌群的采样 培养结果 在羊血培养皿上出现四种菌落 1 数目多 划线沿线都有 针尖大小 无色 光滑 湿润 透明 圆形 周围出 现草绿色溶血环 发生了不完全溶血即 溶血 2 数目较多 划线沿线都有 较小 乳白色 光滑 湿润 半透明 圆形 3 少 只出现在四个点 中型 乳黄色 光滑 半湿润 不透明 形状不规则 在此种菌落下方的培养基出现了透明溶血环 发生了完全溶血即 溶血 4 1 个菌落 较大 乳白色 光滑 湿润 半透明 圆形 粘稠 取 1 2 3 进行革兰氏染色 结果如下 1 G 链球菌 根据不完全溶血推断 为甲型链球菌 2 G 球菌 细胞个体小 形状像金黄色葡萄球菌 但是染色为阴性 3 G 球菌 2 手指消毒前后细菌的采样培养结果 1 消毒前 仅出现 2 个菌落 较小 乳白色 光滑 湿润 有光泽 圆形 革兰氏染色结果 G 杆菌 2 消毒后 无菌落出现 3 硬币正反面的细菌采样培养结果 1 正面 三种菌落 1 13 个菌落 较小 乳白色 光滑 湿润 有光泽 圆形 和手指消毒前的菌落一样 2 1 个菌落 较大 白色 光滑 湿润 近似圆形 3 5 个菌落 较大 中央乳黄色边缘颜色变浅 光滑 湿润 中间凸 不规则 边缘光 滑 微生物实验报告 8 取其中 2 3 进行革兰氏染色 结果如下 2 G 杆菌 和手指消毒前的细菌一样 3 G 链杆菌 形态较大 形状像炭疽芽胞杆菌 但是没有芽孢且染色为阴性 2 反面 两种菌落 1 2 个 较大 乳白色 光滑 湿润 有光泽 圆形 2 多个 沿硬币边缘线连成一片 针尖大小 无色 光滑 湿润 透明 4 空气培养结果 平皿敞开在实验室的窗台上放置了约 20 分钟 当时阳光照在上面 平皿出现了五种菌落 1 11 个 中等大小 白色 光滑 湿润 半透明 圆形 2 2 个 较大 周围白色 中间有一个透明圈 光滑 湿润 中间凹的圆饼状 3 1 个 较大 周围黄色 中间有一个透明的圆形区域 半湿润 没有光泽 4 1 个 较大 边缘橘黄色 中央偏白 明显凸起 干燥 形状不规则 5 1 个 较大 边缘透明 中央乳黄色 光滑 湿润 半透明 圆形 取其中 3 4 进行革兰氏染色 结果如下 3 G 杆菌 和手指消毒前 硬币正面菌落 2 的细菌一样 4 出现三种细菌 G 双球菌 G 双球菌 G 梭菌 5 八个取样染色结果 取样细菌来源染色结果细菌形态 1咽部G 链球菌 2咽部G 球菌 3咽部G 球菌 4手指 消毒前 G 杆菌 5硬币正面G 杆菌 6硬币正面G 链杆菌 7空气 实验室窗台 G 杆菌 G 双球菌 G 双球菌 8空气 实验室窗台 G 梭菌 六 思考与讨论 1 巴氏消毒法的利用 巴氏消毒法是 一种低温消毒法 包括 低温维持法 62 8 摄氏度维持 30 分钟 高温瞬时法 71 3 摄氏度作用 15 30 秒 该法适用于食品的消毒 现主要应用于乳制品 2 为什么湿热消毒法的温度比干热消毒法低 课堂上讲到的干热消毒法温度都比湿热消毒法要高 说明湿热灭菌法可在较低的温度 下达到的灭菌效果可以 与干热法相同 分析原因如下 1 湿热中蛋白吸收水份 更易凝固变性 2 水分子的穿透力比空气大 更易均匀传递热能 在干热状态下 由于热穿 微生物实验报告 9 透力较差 微生物的耐热性较强 必须长时间受高温的作用才能达到灭菌 的目的 3 蒸汽潜热大 每 1 克水由气态变成液态可释放出529 卡热能 可迅速提高 物体的温度 3 细菌分布试验结果讨论 咽部正常菌群主要为 溶血和非溶血性链球菌 球菌等 不同人由于个体差异和取样 部位差异 所得菌种也有所不同 手的消毒是有效的 消毒后细菌明显减少了 同时手上的菌是很多的 所以需要常洗 手 手上较常见的是四联球菌 硬币上的菌也相对较多 因为它经历的环境很多 在咽部