英语论文翻译

Abstract 汽油机排气一直被认为是在中国空气污染的主要来源 由于较低的 细胞遗传毒性的影响 甲醇发动机的排气 甲醇被视为一个潜在的替代 汽油 我们以前相比 细胞和基因毒性与汽油发动机排气 在 A549细胞中甲醇发动机排气 Zhang 等人 2007 为表征的免疫系统的影响 在免疫细胞的汽油和甲醇发动机排出的废气 在这项研究中 我们进一步比较研究了气 在 RAW264 7细胞和肺泡宏对机体免疫功能的汽油和甲醇发动机排出的废气 抗菌素 结果表明 甲醇和汽油发动机的排气可明显抑制 RAW264 7细胞增殖 促进 RAW264 7细胞凋亡 玫瑰花结形成率和减少 抑制肺泡巨噬细胞的抗肿瘤作用 同时 这些汽油发动机的影响 排气远高于甲醇发动机排气 此外 汽油发动机的排气 但 fi 能显著抑制肺泡巨噬细胞 ADCC 活性 但甲醇发动机排放 不 这些结果表明 甲醇和汽油发动机排出的废气可能是免疫系统 大气污染物 但汽油发动机尾气一些影响可能远 高于甲醇发动机排气 1 Introduction 在中国许多城市化 流行病学的研究表明 慢性汽油尾气暴露增加普勒风险 肺和其他肺癌以及非 癌性健康的影响 netterstrom 和 suadicani 1993 alfr edsson 等人 1993 德等人 2003 教授等人 2007 elci 等人 2003 郭等人 2004b vasama 内乌沃宁等人 1999 郑等人 2002 汉森 2000 但是 关系 长期暴露于汽油发动机尾气与肺癌在动物或人类仍是一个争论的问题 mauderly 1994 郭等人 2004a 母等人 2007 所以 IARC 分类 fi ED 气 汽油发动机的排气为可能的人类致癌物 IARC 1989 由于这些潜在的健康影响的担忧 汽油发动机排出的废气的影响 由于可能较低 的毒性效应 但比汽油发动机排气 类似物化学性质以及丰富的来源 甲醇已作为一个潜 在清洁燃料替代汽油关于空气污染控制 威廉姆斯等人 发现含有较低浓度甲醇发动机 颗粒物和氮氧化物的含量比汽油 发 动气 威廉姆斯等人 1990 maejima 等人 表明甲醇发动机排出的废气具有潜在的毒 性在大鼠肺的影响 maejima 等人 1994 以前 我们的研究表明甲醇发动机排气表现 出低的细胞毒性并没有表现出遗传毒性的体外 Zhang 等人 2007 除了这些 一些生 物影响甲醇发动机前 hausts 已检查 宿主的免疫功能是响应非常重要肿瘤 该公司等人 2006 增殖和凋亡 SIS 的细胞在发展中起着重要的作用 调节在组织的多细胞的细胞群的维护生物 莱斯特 和 jaattela 2001 许多外源性化学物质能改变细胞增殖与凋亡细胞特征 这 会导致组织 器官的生理功能的变化 肺泡巨噬细胞的先天是主角 免疫系统和巡逻的身体 包括肺泡表面 可以吞噬和破坏他们 phagolyso 病原体 MES 研究与罗依特 2000 张等人 2000 维埃拉等人 002 它可以吞噬异物 抗原 mmunocompetent 细胞和产生细胞因子 发 挥作用 蚂蚁的作用在宿主防御肿瘤的发生和 pulmao RY 感染 卡斯特拉诺瓦等人 2001 有证据表明在柴油机尾气颗粒物对肺的影响很大免疫系统 并抑制肺的免疫反 应细菌感染 阴等人 2004 然而 到目前为止 它是 nknown 什么样的汽油和甲醇的 影响 恩 NE 尾气对肺泡巨噬细胞的免疫功能 以前 我们比较了细胞毒性和遗传毒性的前 大片的汽油和无水甲醇发动机排出的废 气 张等人 2007 结果表明 汽油发动机 exhaustmight 是一个遗传毒性的混合物 但甲醇发动机排气不会在测试的浓度范围内 这是众所周知的 除了遗传 毒性 宿主的 免疫功能也非常重要 研究肿瘤的发生 该公司等人 2006 免疫抑制导致免疫细胞无 法主机可以限制癌细胞的增殖 邹 2005 为了进一步表征的毒性作用的汽油和甲醇发 动机前 hausts 本研究进行扩展的比较对 RAW264 7细胞免疫效应和活化的肺泡为进一步认识的 相对贡献的巨噬细胞汽油和甲醇发动机排放的不利影响对人体健康 同时 该数据将提供 新的科学 题 Cfi 证据对决策的替代甲醇汽油的基础上的两种类型的车辆的毒性排放量 2 Material and methods 2 1 Materials Dulbecco 改 fi ED 的 Eagle 培养基 DMEM 3 4 5 dimetho 噻唑 2 基 2 5 diphenyl tetrazoliumbromide MTT 和邻菲啉 ylenediamine OPD 是从西格玛 购买 奥德里奇 St 路易斯 钼 美国 胎牛血清的培养基化学公司 洛根 犹他州 美国 绵羊红细胞和兔抗 绵羊红细胞血清的免疫系提供 学 四川大学 氚化胸腺嘧啶核苷 3H TdR 是从中国原子能研究院 北京 中国 芽孢杆菌 CAL 梅特 卡介苗疫苗是由 成都生物研究所产品 成都 中国 得到的是相当的解决方案上海三思试剂有限公司 中 国 所有其他化学品进行分析 等级 2 2 从汽油发动机尾气制备有机提取物 凝析油提取物 particulatematters 和半从汽油发动机的有机化合物的排放 EGE 是 上校 收集和 Zhang 等人的方法制备 2007 为汽油机的废气提取物的组合物 看到车 等人 2007 2 3 从甲醇发动机尾气制备有机提取物 凝析油提取物 particulatematters 和半从甲醇发动机排气 EME 是有机化合物 收集和 Zhang 等人的方法制备 2007 对甲醇发动机排出的废气中提取的成分 看 亮等人 2005 2 4 RAW264 7细胞培养 小鼠巨噬细胞系 RAW264 7 购买 来自北京大学的 细胞在 DMEM 培养 含 10 胎牛血清 青霉素和100 LG 电子 毫升100单位 毫升链霉素 pH 7 4 细胞保持在一 个潮湿的孵化器在37 C 5 CO2 当细胞生长至5 106毫升 约85 控制的影响 fl 的 trypsinizationusing 0 25 胰酶消化收获他们 罪与0 02 的 EDTA 和颗粒由5分钟离心法 1000转 细胞沉淀随后 resuspendedwith 磷 磷酸盐缓冲盐水 PBS 细胞悬浮液被调 整到一个各种实验和分析适当的浓度 2 5 活化的肺泡巨噬细胞的准备 健康成年新西兰大白兔 体重2 2 5公斤 是从四川大学实验动物中心购 成都 中国 动物被安置在一个干净的空气和病毒 无铝和受限制的访问 给传统的实验室饮食和自来 水自由采食 并允许适应一周在一个动物设施评估协会批准实验动物护理认证 然后兔子 口服 BCG 卡介苗疫苗5毫克静脉滴注 静脉注射每两 otherweek 最后一次注射后2周 等兔子 深受用戊巴比妥钠麻醉然后通过切割腹主动脉放血 气管插管和肺灌洗30毫升等 分的六次的 DMEM 培养 回收支气管肺泡灌洗液 fl UID 混合并离心在1800转4 C 10分钟 从个体兔细胞颗粒随后 COM 结合 洗涤 再悬浮在无酚 DMEM 培养基 GIBCO BRL 细胞悬液 然后调整到合适的控制 对被分装到每口井24井 96井文化 真正的板和培 养在 DMEM 含10 胎牛血清 青霉素和100 LG ml 链霉素100单位 毫升 pH 7 4 细胞保持在一个潮湿的孵化器在37 C 5 的 CO2使用不同的细胞参数的描述后 2 6 MTT assay 汽油和甲醇发动机排出的废气的毒性按 MANU MTT 法检测 RAW264 7细胞 制造商 的指令 ATCC 马纳萨斯 美国 和一些修改 fi 阳离子 布里 fl Y RAW264 7细胞单 层用胰蛋白酶消化细胞然后收获和 resuspended 新鲜生长介质 细胞悬液 5二百二百毫升 毫升 阿里 引用到每个井96井培养板 24小时后 incuba 31 3中被替换为新的媒介 62 5 125 0 250 0 62 5和125 0毫升 毫升工程或高速 替换 tively 细胞治疗二甲亚砜 DMSO 消极的控制 最后的 DMSO 浓度的文化 mediumdid 不超过1 的细胞培养其他 24 h 但对肺泡巨噬细胞 细胞被孵化3 h 在实验中 细胞与酚洗 red free 最低基本介质 两次 180年将地中海 年和20将麻省理工 0 5毫克 毫升最终浓度 添加到每个 另一个样本 孵化4 h 中被删除 150添加 DMSO 溶液 2分钟的板块略有动摇了促进解散蓝色甲瓒的粒 子 吸光度的决心使用酶标570海里 细胞生存能力 absor bance 实验小组 复样的吸 光度集团 100 在每个测试浓度 ob 细胞生存能力保留的4平行井 2 7 细胞增殖和凋亡分析 甲醇和汽油发动机尾气对 RAW264 7的影响用流式细胞术测定细胞增殖 简单地说 细胞治疗后15 6 31 3和62 5毫升 毫升工程或高速24 h 6 well 培养板 细胞处理 DMSO 溶 液 消极的控制 最后的 DMSO 浓度的文化中不超过1 细胞被 resuspended 使用 5毫升的 汉克斯平衡盐溶液 HBSS 涡 补充道1 5毫升乙醇和漩涡 孵化1 h 4 c 离心机 样品在800 g 10分钟和送气音上清 添加到颗粒 HBSS 250啊 250我的核糖核酸酶和500 ll propidium io dide 混合物在室温下15分钟和孵化然后保持它在黑暗的4 C 然后细胞进行 了分析通过流式细胞术 propidium 碘荧光测量在488纳米波长 通过流式细胞术分析细胞周 期 使用扩散指数的细胞增殖水平进行了评估由以下公式计算 Proliferation index PI S G2 MG0 G1 S G2 M 100 年代 G0 G1和 G2 M 表达比例的 RAW264 7细胞退 出 年代 G0 G1和 G2 M 期细胞周期 分别 扩散 敏捷在每个测试浓度和细胞周期阶段向 保留的从3平行井 细胞凋亡被 sub diploid 人口的检测评估用流式细胞术 的细胞凋亡的 预处理工作检测是扩散的方法一样 检测 预处理后 细胞进行流式细胞术 和 sub diploid 细 胞数 细胞凋亡水平 sessed 使用凋亡率由以下公式计算 Apoptosis rate Sub diploid cell countTotal cell count 100 同样 在每个测试浓度 ob 凋亡率保留的从3并行逢 2 8 E rosette 地层测试 E rosette 测试是根据常见的方法执行通过一些修改 Tomar et al 1995 过程是 如下 绵羊红细胞1 解决方案的准备工作 10 绵羊红细胞 兔抗相同量的1 生成 绵羊红 细胞 血清混合和孵化在37 C 水浴30分钟 然后 centrifuged 混合物和清洗三次 暂停了 细胞颗粒的混合物被稀释到1 绵羊红细胞解决方案使用 1 0毫升细胞悬液 1 104 毫升 aliquoted 到每个24 well 培养板 2 h 孵化后 themediumwas re 把新鲜的培养基有31 3 62 5 125 0 250 0分别500 0毫升 毫升工程或高速 细胞 treatedwithDMSOwere 作为消极的控制 最后的 DMSO 浓度的文化 中不超过1 另一个3 h 孵化后 细胞和生理盐水洗了两次 和0 5毫升1 绵羊红细胞的解 决方案是添加到每个 后 sampleswere 孵化出了4 C 2 h 解决方案被删除 这些细胞被然 后用生理盐水洗和2 戊二醛固定以及沾染了赖特的染色计数 rosette forming 细胞 RFC 一个肺泡宏观噬菌体附有五个或更多的绵羊红细胞被算作一个 RFC 200年最低肺泡巨噬 细胞数和 RFC percentwas 计算 利率 E rosette 形成的测试浓度得到从4平行井 2 9 ADCC 化验 ADCC Hemoglo 是由一个非放射性方法 bin enzyme 释放试验 Hb ERA 被侯和郑 1985 分析基于血红蛋白 peroxi 这一事实 dase 活动能够催化氧化门诊部当给 col 可以通过分光光度计测量的演说 简单地说 1 0毫升激活肺泡巨噬细胞悬架 2 5 105 毫升 被播种在24 well 文化板块 2 h 孵化后 地中海 年被替换为新的媒介有 62 5 125 0 250 0 500 0和1000 0毫升 毫升工程或高速 分别 细胞 treatedwithDMSO 作消 极的控制 最后的浓度 DMSO 在培养基不超过1 这些细胞随后被孵化 another3 h Themediumwas replacedwith0 8毫升 ser 嗯和苯酚 red free 介质和0 1毫升绵羊红细胞 生成 2 5 106 毫升 然后0 1毫升兔子 anti SRBC 血清 队医 逻辑盐水 distilledwaterormediumwere 添加到各自的实验 自然和自发组织 经过12小时的潜伏在 37摄氏度 culturemediumwere 送往离心机3000转10分钟 0 3毫升悬挂和1 0毫 OPD H2O2 sub strate 的解决方案是混合在干净的玻璃管和孵化37摄氏度10分钟 Then0 5 1 0 毫 MH2SO4was addedfor 终止的反应 吸光度 A 决心在490海里 结果是表示为百分数 specificHb enzyme 释放 细胞毒性百分比 细胞毒性百分比 Aexperimental 一种 Atotaled Aspontaneous100 实验和自然吸光度测定 effectors to target 细胞孵化与抗血清和 physiologi 卡尔盐分别 从总总吸光度得到细胞溶解生成的蒸馏水 自发的吸光率是决定 从生成中独自孵化 百分比在每个测试细胞毒性浓度得到从4 不相上下等位基因井 2 10 对海拉细胞细胞毒性肺泡巨噬细胞的活性 assaywas 根据程序进行周 et al 1985 做了一些调整 简单地说 200年将肺泡宏观 噬菌体悬挂 5 105 毫升 aliquoted 进每一个的96 培养板 3 h 孵化后 细胞被洗汉克斯两次 然 后新鲜培养基有31 3 62 5 125 0 250 0 500 0和1000 0毫升 毫升工程或高速被添加到每 个分别和另一个孵化3 h 细胞 treatedwithDMSO 被用作消极的控制 最后的 DMSO 溶液 的浓度培养基不超过1 然后重新媒介移动和 cellswerewashedwith 汉克斯两次 200年 将海拉细胞悬架 1 105毫升 被添加到每个使最后感受器肺泡巨噬细胞的比率 目标希拉 E T 五 单一的海拉细胞在96 微量滴定板作为对照组 年底前8 h 36 h 孵化 0 8 104人 Bq 3 H TdR 被添加到每个 在实验的最后 希拉 cellswereharvested trypsinizationandfixedtofiberglassfil 怪兽 然后细胞放射性 cpm 确定使用液体闪烁计数 贝克曼 LS3801 细胞毒性指数 CI 根据计算遵循方程 CI 1 cpm alveolar macrophage and Hela cells incubation together cpmHela cells 细胞毒性指数在每个测试浓度从4平行井 2 11 统计分析 所有数据都表示为 标准差 Fre v2 quencies rosette forming 细胞进行了分析测试 线 性 correlationswere 皮尔逊相关性的分析 的差异 二层组比较使用 Mann Whitney U test 分析 意义的标准设定在 P 0 05 3 结果 3 1 细胞毒性 结果细胞毒性的通识和高速 RAW264 7细胞是图1中所示 治疗组与通识 浓度高于 62 5毫升 毫升 所有的组与相比表现出显著降低细胞的异常控制 此外 也明显的剂量反应 关系 确认下这些剂量 剂量的250 500和1000毫升 毫升 细胞的异常组与24小时的高速处理 被显著降低 在125毫升 毫升1000毫升 毫升 组的细胞的异常处理通识是显著降低高速处 理相比 在同一浓度进行测试 因此 很明显 产生的细胞毒性汽油发动机排气比甲醇发动机 排气的浓度进行了测试 肺泡巨噬细胞 结果 tryptan 蓝色的排斥说 利用 MTT 测定表明 肺 泡巨噬细胞的异常处理的高速3 h 相比没有明显的变化的浓度控制在不超过2000毫升 毫升 但对于通识 阈值浓度是500毫升毫升 数据没有显示 因此 最大浓度考试 进行测试 快乐工程和高速肺泡巨噬细胞的免疫效果从兔子1000毫升 毫升 3 2 细胞增殖 汽油和甲醇发动机尾气的影响和 prolif 作 RAW264 7细胞被流式细胞术检测 结果 总结了在图2中 G0 G1期明显降低在处理62 5毫升 毫升高速的比较控制 但工程 在细 胞周期阶段没有意义测试组和控制 在剂量的扩散指标显著降低1 3和62 5毫升 毫升工程 组相比 控制 但对于高速 扩散指数显著改变只在浓度的62 5毫升 毫升 此外 没有签名 的区别 nificance 工程之间的扩散指数和高速浓度进行了测试 3 3 细胞凋亡 提出了对 RAW264 7细胞的凋亡率在图3中 针对诱导细胞凋亡和高速显示不同 概要文件与扩散索引 所有治疗组与工程和高速的凋亡率都显著 有皱纹的控制 然而 没 有明显的不同竟被发现在群体之间的细胞凋亡率针对处理和高速处理在同一浓度 3 4 E rosette 测试 E rosette 测试的结果显示在图4 结果表明 工程中使用的所有剂量明显降低的实验 高速 在较高的浓度比31 3毫升 毫升 所有的团体 表现出显著降低美信 E rosette 率比控 制 在相同测试剂量 E rosette 细胞造成工程从高速比这低得多 因此 很明显 有毒的影响 E rosette 形成造成通识强比从高速条件下当前的考试 3 5 肺泡 macrophages mediated 通过细胞毒性分析 图5说明 ADCC 化验的结果 有明显 cantly ADCC 不同活动在任何浓度进行测试组织 暴露于通识与控制 P 0 05 在我们的实验条件下 高速不应该表现出任何影响 ADCC 活动在肺泡巨噬细胞在任 何测试浓度 此外 在同样的曝光剂量 造成 ADCC 活动大学是低于从高速测试 农用地的范 围 trations P 0 05 3 6 对海拉细胞细胞毒性肺泡巨噬细胞的活性 工程的影响和海拉细胞抑制的高速增长综述了在图6 结果表明 通识降低了 CI 剂量的 实验测试 进一步的 更多 大学之间观察到剂量反应关系曝光和 CI r 0 822 p 0 822 的 CI 组高速治疗时显著降低测试高速的浓度不少于62 5毫升 毫升 在同一浓度 通识的 C 明显低于从高速 31 3毫升 毫升团体除外 因此 它是显而易见的图3 264 7工程和高速 原始细胞凋亡的影响 细胞凋亡率给出的平均值 标准偏差从三个平行样品 表示 显著 差异 P 0 05 针对或之间被确认高速处理细胞和未经处理的控制 图4 影响工程和高速 E rosette 肺泡巨噬细胞的形成兔肺 提出了 E rosette 形成的利率平均值 标准偏离四个平 行样品 表示 一个很大的不同之处 P 0 05 针对或者高速处理细胞之间被确认和未经处 理的控制 表示差异显著 P 0 05 通识与高速相同的剂量治疗 图5 通识和高速活动 的肺泡 macrophages mediated ADCC 四个平行样品 表示 显著差异 P 0 05 确定针 对或者高速处理细胞之间和未经处理的控制 表示差异显著 P 0 05 之间通识和高速下 相同的剂量治疗 海拉细胞 cytotoxicitiy 指标给出的平均值 标准 devia 从四个平行样品 表示 差异显著 P 0 05 针对或者高速处理细胞之间被确认和未经处理的控制 表示差异显著 P 0 05 之间通识和高速下相同的剂量治疗 4 讨论 在这项研究中 我们调查的影响 针对高速细胞毒性 RAW264 7细胞株增殖和凋亡 和免疫功能在非激活肺泡巨噬细胞体外细胞毒性浓度的测试 第一次 我们重新结果表明 在试验浓度范围 通识能明显抑制 RAW264 7细胞增殖 促进吗 RAW264 7细胞凋亡 减少莲 座状的形成和抑制 ADCC 的活动和肺泡宏观的抗肿瘤效应噬菌体 供大于求的状态 可能 会显著影响扩散和 RAW264 7细胞凋亡 抑制玫瑰和形成肺泡巨噬细胞的抗肿瘤效应 但没 有影响 ADCC 的活动 此外 在这些工程的影响比供大于求的状态参数观察更重要 这些 结果表明 汽油和甲醇发动机废气可能 immunotoxic 材料 但汽油发动机前 haust immunotoxic 的影响远比甲醇发动机排气条件下当前的考试 264 7原始细胞 一只老鼠巨 噬细胞细胞系 是广泛的用于检测颗粒物的毒性影响 尤其是从汽车排放和大气污染物免疫 功能 Saxena et al 2003 Huttunen et al 2003 从联合效应细胞生存能力造成的细胞 prolifera 细胞凋亡和坏死 利用 MTT 测定显生 活的数量细胞群体 fromEGE treatmentwas 远低于供大于求的状态相同的浓度 根据结果 Alsberg et al 1985 表明 微粒从汽油发动机前很重要肺 alveolarmacrophages haust 具有 细胞毒性 流血细胞计数器发现通识比高速在抑制细胞扩散 但工程引起的细胞凋亡率和 EMEwas 在 RAW264 7细胞没有意义 一起 这进一步暗示汽油发动机排气对 RAW264 7 细胞的细胞毒性效应是比甲醇发动机排气的愤怒 肺泡巨噬细胞 Fc receptor bearing 细胞发挥重要的角色在宿主防御和肿瘤监测 它 可以国际米兰 法案通过 Fc antibody sensitized 靶细胞受体机制 从而导致肺泡巨噬细胞损 伤的焦油最终得到的细胞 细胞 lyses 生产目标 Fc 受体认识到免疫球蛋白 G 的 Fc 域的糖 蛋白 数量的 Fc 受体的改变被认为是作为一个森西 有效肺泡宏观的早期生物标志物反映 了免疫功能噬菌体 费尔斯和科恩 1986 减少俱乐部的数量受体将导致免疫功能的降低肺 泡 巨噬细胞 从 E rosette 形成分析结果表明 通识和高速显著下降玫瑰在肺泡巨噬细胞形成 此外 减少程度的通识是更重要的比高速 这些结果表明 高速和大学可能 de 折痕 Fc 受体 的数量或潜在的结合绵羊红细胞 此外 ADCC 化验的结果还显示 ADCC 肺泡巨噬细胞 signif 活动 cantly 减少测试组工程对待 但高速不明显影响肺泡巨噬细胞的活动吗 测试浓度范围 建议 immunotoxic 汽油发动机排气的影响比冰毒 2引擎排气 肺泡巨噬细 先天免疫的介质 产生强烈影响抗肿瘤的作用 激活时 它可以杀死 tu 铁道部细胞通过释放 趋化因子和细胞毒性细胞因子由肺泡 macrophages mediate