驱虫斑鸠菊注射液细菌内毒素方法学研究

1 驱虫斑鸠菊注射液驱虫斑鸠菊注射液 细菌内毒素检查方法学研究细菌内毒素检查方法学研究 说明 为了保证产品的质量可靠性 安全性 企业将细菌内毒素检查项作 为驱虫斑鸠菊注射液质量控制的指标 因是增加新的检查项目 故进行以下研 究 以验证其可行性 1 试验目的 试验目的 对驱虫斑鸠菊注射液细菌内毒素检查的可行性进行验证 为该品种企业内 控标准中增加细菌内毒素检查项提供依据 2 试验依据 试验依据 中国药典 2010 版二部附录 XIE 细菌内毒素检查法 凝胶法 3 仪器 仪器 细菌内毒素凝胶法测定仪 型号 ET 96 厂家 天津市天大天发科技有限公司 微量移液器 规格 100 ul 1000ul 厂家 上海苏阳仪器有限公司 试验用所有玻璃仪器均在 250 30nim 条件下干热灭菌 4 供试品与所用试剂 供试品与所用试剂 4 1 驱虫斑鸠菊注射液 规格 2ml 支 批号 111109 111110 111111 来源 公司颍上仓库 4 2 鲎试剂 福州新北生化工业有限公司 规格 0 1ml 批号 11101312 灵敏度 0 25EU ml 湛江安度斯生物有限公司 规格 0 1ml 批号 1011091 灵敏度 0 25EU ml 4 3 细菌内毒素工作标准品 规格 10EU 支 批号 111104 福州新北生化工业有限公司 4 4 细菌内毒素检查用水 规格 2ml 支 批号 11112002 福州新北生化工业有限公司 5 试验方法与结果 试验方法与结果 5 1 鲎试剂灵敏度复核 按照 中国药典 2010 年版二部附录细菌内毒素检查法规定 进行鲎试剂 灵敏度复核 结果见表 1 所示 表 1 鲎试剂灵敏度复核 内毒素浓度 EU ml TAL 批 号 标示灵敏度 0 5 0 25 0 125 0 06 NC 灵敏度 c 111013120 25 EU ml 0 25EU ml 10110910 25 EU ml 0 25EU ml 2 两批鲎试剂用细菌内毒素工作标准品检查 c 为 的 0 5 2 0 倍 结果均 符合规定 5 2 限值的确定 驱虫斑鸠菊注射液临床主要用于治疗白癜风 最大使用剂量为成人一次肌肉 注射 2 4ml 参照 60kg 体重的剂量 设定 M 值为 4ml 60kg h 按注射剂的 内毒素阈值计算供试品细菌内毒素限值 公式如下 5EU kg h L K M 75EU ml 4ml 60kg h L 为供试品的细菌内毒素限值 K 为人每公斤体重每小时最大可接受的内 毒素剂量 注射剂的 K 值为 5EU kg h M 为人每公斤体重每小时最大剂量 供试品细菌内毒素的检查限度为 75EU ml 5 3 干扰试验预试验 5 3 1 最大有效稀释倍数的确定 根据公式 MVD CL L 为供试品的细菌内毒素限值 C 为供试品溶液的 浓度 当 L 以 EU ml 表示时 C 为 1 0 ml ml 为鲎试剂灵敏度 为 0 25EU ml 供试品 MVD 75EU ml 0 25 EU ml 300 倍 5 3 2 试验操作 根据试验的可操作性 本次试验只探讨 1 5 倍稀释溶液 1 25 倍稀释 溶液 1 75 倍稀释溶液 1 150 倍稀释溶液对试验有无干扰 将 2 批驱虫斑鸠菊注射也用细菌内毒素检查用水分别稀释为上述 4 个稀释 级的溶液 将此系列溶液记为 NPC 另再分别制备一份同样浓度的供试品溶液 在制备的同时加入细菌内毒素 标准溶液 使每一浓度的试验液中均含有 2 浓度的细菌内毒素 记此系列溶液 为 PPC 取灵敏度为 0 25EU ml 的两个不同厂家的鲎试剂 分别与上述 PPC 和 NPC 进行反应 每一浓度重复两管 并设有阳性和阴性对照 结果见表 2 1 2 2 表 2 1 驱虫斑鸠菊干扰预试验 福州新北生化工业有限公司 批号 11101312 0 25EU ml 供试品稀释浓度 mg ml 反应结果 供试品 1 51 251 751 150 NCPC NPC 111109 PPC 3 NPC 111110 PPC NPC 111111 PPC 表 2 2 驱虫斑鸠菊注射液干扰预试验 湛江安度斯生物有限公司 批号 1011091 0 25EU ml 供试品稀释浓度 mg ml 反应结果 供试品 1 51 251 751 150 NCPC NPC 111109 PPC NPC 111110 PPC NPC 111111 PPC 由以上干扰试验结果可以初步了解 两个厂家的鲎试剂对供试品细菌内毒 素的试验结果均在其稀释 75 倍及以下稀释浓度时无干扰 5 4 干扰试验 5 4 1 供试品溶液 将供试品稀释 75 倍的溶液 5 4 2 制备鲎试剂灵敏度的对照系列 取一支内毒素工作标准品 用细菌内毒素检查用水将其稀释成 4 个浓度的内 毒素标准溶液 即 2 0 5 0 25 备用 作为 Es 系列 5 4 3 制备干扰试验系列 再分别制备 4 份同样浓度的供试品溶液 在制备的同时加入细菌内毒素标准 溶液 使每份的试验液中各含有 2 0 5 0 25 浓度的细菌内毒素 按 中国药典 2010 年版二部附录中的 细菌内毒素检查供试品干扰试验项 用两个厂家的鲎试剂进行试验 结果见表 3 1 3 2 表 3 1 供试品溶液的干扰试验 4 福州新北生化工业有限公司 批号 11101312 0 25EU ml 内毒素浓度 EU ml 样品0 5 0 25 0 125 0 06 NC Es EU ml Et EU ml Es 系 列 111109 111110 111111 0 25 0 25 0 25 0 25 表 3 2 供试品溶液的干扰试验 湛江安度斯生物有限公司 批号 1011091 0 25EU ml 内毒素浓度 EU ml 样品0 5 0 25 0 125 0 06 NC Es EU ml Et EU ml Es 系列 111109 111110 111111 0 25 0 25 0 25 0 25 干扰试验结果表明 上述 3 批供试品的 Es Et 均在 0 5 2 0 范围之内 确认 供试品稀释 75 倍浓度下与鲎试剂试验无干扰 5 5 试验结果 1 由干扰试验结果可以初步发现驱虫斑鸠菊注射液在 75 倍稀释及其以下稀 释浓度时无干扰 2 干扰试验选用供试品稀释 75 倍溶液 且用两个厂家的鲎试剂 结果 Es Et 均在 0 5 2 0 范围之内 确无干扰影响 3 根据驱虫斑鸠菊注射液临床用药剂量将本品细菌内毒素的限值定为每 5 1ml 驱虫斑鸠菊注射液中含细菌内毒素的量小于 75EU 6 样品细菌内毒素检查 样品细菌内毒素检查 按 中国药典 2010 年版二部附录 XI E 细菌内毒素检查法 使用两批 不同厂家的鲎试剂分别对 3 批供试品稀释 75 倍后的溶液进行细菌内毒素检查 并同时设立样品的自身阳性对照管 结果见表 4 1 4 2 表 4 1 供试品细菌内毒素检查 福州新北生化工业有限公司 批号 11101312 0 25EU ml 表 4 2 供试品细菌内毒素检查 湛江安度斯生物有限公司 批号 1011091 0 25EU ml 上