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实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察 1 实验原理 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性 且细胞数量较多 2 秋水仙素 可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成 使处于增殖状态的细胞停止在中期 注射到动物活体内 可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞 3 4 实验目的与要求 1 熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法 2 了解小鼠染色体核型 3 认识秋水仙素对细胞增殖的作用 器材与试剂内容与方法 一 小鼠骨髓细胞染色体制备预处理 取材 收集细胞 低渗 固定 再固定 滴片 染色 5 取材前2 3h 向腹腔内注射秋水仙素 注射浓度随动物种类不同而异 秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期 增加中期分裂相的比例 腹腔内注射秋水仙素2 3小时后 颈椎脱臼处死小鼠 6 小白鼠骨骼标本 7 8 取出小鼠的后肢股骨 注意不要将股骨剪断 否则容易造成骨髓细胞的流失 9 用纱布擦股骨上的肌肉组织 清除干净 注射器抽取生理盐水冲洗骨髓 10 收集细胞 暴露骨髓腔 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞 收集到离心管中 定容至6ml 11 滴2 3滴于玻片上 吹气 在酒精灯火焰过火8次 做记号 凉干 染色 滴片 滴片后 将片子侵入Giemsa染液缸中 10 15分钟 弃去染液 水洗 晾干 镜检 12 13 14 作业与思考题 1 绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相 2 本实验中秋水仙素 低渗液 固定液各起什么作用 3 简述实验中应注意那些关键问题 15 二 染色体标本片观察1 标本片质量评价 1 细胞密度合适 均匀 2 背景干净 细胞核和染色体清晰 3 有较多的分裂相 4 染色体分散较好 16 细胞密度 17 染色体分散度 18 2 染色体形态特征观察 19 3 染色体计数 100 10 15 16 9 9 16 15 40 10 8 22 22 8 10 40 20 4 细胞增殖指数统计 细胞增殖指数 100 21 实验三细胞器的观察 一 中心体二 高尔基体 22 一 中心体 4 10 马蛔虫子宫横切片全貌 23 中心体 10 10 24 中心体 40 10 25 二 高尔基体 4 10 脊神经节切片 26 高尔基体 10 10 27 高尔基体 40 10 28
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