DSS诱导的结肠炎是由NLRP3炎症小体介导的

DSS 诱导的结肠炎是由 NLRP3 炎症小体介导的 摘要 背景 前炎性细胞因子 IL 1 IL 18 在炎症性肠病的发病中起着重要作用 在应对多种微 生物和晶质的反应中 两种细胞因子都通过 caspase 1 激活的多种蛋白复合体的处理 这 种多蛋白复合体就是炎症小体 NLRP3 在此我们将会研究 NLRP3 在 DSS 诱导的结肠 炎小鼠中的作用 方法 应对 DSS 诱导产生的 IL 1 我们对野生型 Caspase 1 NLRP3 ASC Cathepsin 组蛋白酶 B Cathepsin L 小鼠的巨噬细胞进行研究 C57BL 6 和 NLRP3 小鼠通过口服 DSS 进行诱导 每天进行临床疾病活动指数评分 确定结肠的组 织损伤的严重程度和细胞因子的表达 结果 在体外用 DSS 刺激巨噬细胞以 Caspase 1 依赖的途径分泌较高水平的 IL 1 IL 1 的分泌可被敲除 NLRP3 ASC 或 Caspase 1 所阻断 表明 DSS 激活 Caspase 1 是通 过 NLRP3 炎症小体 另外 IL 1 的分泌还依赖于吞噬作用 溶酶体成熟 组蛋白酶 B 和 L 以及活性氧 在灌胃 DSS 之后 NLRP3 小鼠相比于野生型小鼠产生较弱的结肠炎 症并在结肠组织中产生的前炎性因子的水平比较低 用药物 Pralnacasan 抑制 Caspase 1 相比于 NLRP3 缺陷具有相似的黏膜保护作用 结论 NLRP3 在 DSS 诱导的小鼠肠道炎症中发挥着重要作用 NLRP3 炎症小体可作为 IBD 病人新的治疗作用的潜在靶点 这项研究的意义 关于这个领域有哪些是已知的 1 前炎性细胞因子 IL 1 和 IL 18 在 IBD 发病中所起到的重要作用 2 IL 1 细胞因子家族的激活和分泌是由 NLRP3 炎症小体来调节 3 单核苷酸多态性 NLRP3 基因区和其他的炎性相关基因的单核苷酸多态性与克罗恩 疾病的易感性相关 最新的发现有哪些 1 运用 DSS 诱导的急性结肠炎模型 我们发型 NLRP3 炎症小体缺乏的小鼠具有对结肠 炎明显的保护作用 2 我们发现 DSS 对巨噬细胞的 NLRP3 炎症小体在体内外都具有激活作用 3 IL 1 的分泌依赖于对 DSS 大分子的吞噬作用 溶酶体的成熟 组蛋白酶 B 和 L 以及 活性氧 对可预见的未来临床应用的影响 NLRP3 炎症小体可作为治疗 IBD 的潜在的新的靶点 简介 人类炎症性肠病 IBD 主要是溃疡性结肠炎和克罗恩病 是由慢性胃肠道黏膜免 疫系统失调所引起的慢性的 周期性复发和恢复的炎症状态 IBD 的确切的发病机制仍未 完全的了解 但是 被广泛接受的是基因和环境因素都参与其中 结肠炎实验动物模型被 建立应用于研究 IBD 发病的分子和细胞机制 并且这些模型被广泛应用于新型抗炎药物的 开发和活性评价 在 DSS 诱导的急性结肠炎小鼠模型中 饲喂小鼠含有 DSS 多聚物的饮 用水 可诱导腹泻 血便 体重下降 炎症和溃疡的组织学切片 人类 IBD 也会发生的状 态 为特征的肠炎 因为急性肠炎反应不依赖于 T B 细胞这个模型主要应用于固有免疫 对肠道炎症的作用 这可能与 DSS 对粘膜的毒性作用和上皮屏障功能失调相关 前炎性细胞因子包括 IL 1 IL 6 IL 18 和 TNF 在活动性 IBD 中都能检测到并且与炎 症的严重程度相关 IL 1 和 TNF 可改变上皮细胞的紧密连接和肠道的通透性 因为上 皮屏障的完整性对于阻断微生物的侵入以及对其下组织的毒性 IL 1 在级联式引起炎症 结肠的早期阶段具有重要作用 实际上 IL 1 在 DSS 诱导的小鼠结肠黏膜和腹腔巨噬细 胞都有水平的升高 可以进一步代表肠道炎症的起始 IL 1 和 IL 18 由 Caspase 1 激活 并且在 Caspase 1 小鼠强烈表明 Caspase 1 在 DSS 诱导的结肠炎中起到十分重要的作 用 NLR 核苷酸结合区域和亮氨酸富集区域 家族 包括大量的细胞内模式识别受体 NLRs 含有亮氨酸聚集区可识别多种病原体相关分子模式 NOD2 和 NLRP3 是两种具有特点的 NLR 并且这些受体的基因突变与克罗恩疾病相关 NOD2 识别细菌肽聚糖衍生分子胞壁 酰二肽 MDP 并激活 NF B 信号通路产生炎症反应 NOD2 基因突变在克罗恩疾病个 体中被发现 这种多态性与 NF B 的激活和 IL 1 的分泌相关 但是 具体地 NOD2 NF B 和前炎性细胞因子 Pro IL 1 IL 1 之间的关系仍存在争议 NLRP3 作为 一种 cryopyrin cryopyrin 是核苷酸结合区域 nucleotide binding domain leucine rich repeat containing family 组成了炎症小体通过衔接蛋白 ASC 和 Caspase 1 将 Pro IL 1 和 Pro IL 18 转变为它们的活性形式 NLRP3 的突变可能导致慢性自身免疫综 合征 NLRP3 基因的单核苷酸多态性与克罗恩疾病的易感性密切相关 另外 联合 NLRP3 和 CARD8 的多态性在瑞典男性群体中与克罗恩疾病有密切关系 最近研究发现自噬蛋白 autophagy Protein Atg16LI 是克罗恩疾病的进一步地易感因 子 明显地 Atg16LI 缺陷引起 Toll IL 1 受体包含区域适配器诱导 Interferon TRZF 依赖的 Caspase 1 的激活 造血细胞中 Atg16LI 缺陷小鼠 DSS 诱导的急性结肠炎的易感 性增加 这些小鼠的 IL 1 和 IL 18 的水平的增加和粘膜炎症的严重程度相关 表明解除 对 Caspase 1 活性的管制在 IBD 和 DSS 诱导的溃疡性结肠炎发病中具有重要作用 这项 研究中 我们探究在 NLRP3 炎症小体基因敲除鼠科巨噬细胞中 Caspase 1 活性对 DSS 的 反应 另外 NLRP3 炎症小体在肠道炎症中的作用通过 DSS 诱导的急性肠炎模型来研究 方法 细胞培养和试剂 WT Caspase 1 NLRP3 ASC Cathepsin B Cathepsin L 和 IPAF 小鼠巨噬细胞系有所述方法得到 细胞用 DMEM 培养基 高 葡萄糖 给予 1 L 型谷氨酸盐 10 胎牛血清和 10ug ml 的环丙沙星 人类单核细胞系 THP 1 培养在 RPMI 培养基中加入 10 胎牛血清 1 丙酮酸钠 10ug ml 环丙酰胺 在 DSS 刺激前先用佛波酯 PMA 分化 3h 初始人类巨噬细胞来源于正常人的附着的外 周血单个核细胞 PBMCs 用 RPMI 2 AB 血清 1 L 型谷氨酸盐 100U ml 青霉素 0 1mg ml 链霉素的培养基培养 同时加入 100U ml 重组人类粒细胞刺激因子 rhGM CSF Caspase 1 的抑制剂 Z YVAD fmk 尼日利亚菌素 nigerincin 细胞松弛素 D Cytochalasin D 博来霉素 bafilomycin A 购买于 多聚 dA dT 钠盐 N 乙酰半胱氨酸 N acetyl L cysteine NAC ADPC 和葡聚糖酶 dextranase 购买 于 Sigma Aldrich 所有的 DSS 试剂购买于 MP Biomedicals 超纯脂多糖 LPS K2 和四 甲丫啶 acridine orange 购买于 Invitrogen Caspase 1 抑制剂 Pralnacasan 由 Sanofi Aventis 提供 聚氧乙烯蓖麻油 Cremophor EL 购买于 BASF 斑点形成实验 Speck formation assay 运用稳定表达 ASC CFP 荧光蛋白的融合蛋白的巨噬细胞来研究含有 ASC 的 NLRP3 炎症 小体的聚集 细胞以 1 106 个 孔铺板子 用 10ng ml LPS 启动 2h 后用 DSS 共孵育 24h 洗完细胞后 ASC CFP 斑点的形成通过荧光显微镜分析 每个区域的斑点数目用 Image J 软件来分析 流式细胞术 Flow Cytometry 巨噬细胞在 24 孔板中用 DSS 刺激培养 24h 用于溶酶体 lysosomal 的研究 细胞洗过 之后用 1ug ml 吖啶孵育 15min 用于溶酶体染色 细胞系两遍后 用 FACSCanto 在 600 650nm 发射光波长处用于荧光强度分析 所得数据用 FlowJo 软件分析 小鼠 Mice NLRP3 小鼠饲养于 University of Munich 8 16 周龄小鼠用于实验 年龄相匹配的野 生型的对照小鼠购买于 Harlan Winkelmann 老鼠饲喂标准鼠粮 给予瓶装自来水 在 开始分入试验组前先适应 7 天 所有的实验都经动物研究伦理会的批准 与合理运用动物 与生物医学研究的指导原则相一致 结肠炎的诱导和治疗 Induction of colitis and treatment 结肠炎的诱导是通过将 DSS 分子量 40KD 浓度 2 溶于饮用水中让 C57BL 6 和 NLRP3 小鼠自由饮水 1 9 天获得 对照组小鼠给予自来水 Caspase 1 的抑制剂 Pralnacasan 溶于聚氧乙烯蓖麻油 浓度为 25 用 0 2um 的过滤器滤过 药物腹腔注 射 50mg Kg 每天两次 对照组小鼠腹腔注射蓖麻油每天两次 临床评分和组织学评分 Clinical Score and histological analysis 体重 粪便隐血 经直肠出血和粪便硬度有两个研究者双盲评价 一个评分体系用于评价 腹泻 隐血 明显出血 体重变化以基线水平下降的百分比来表示 尸检取出结肠 结肠 片段用于 ex vivo 分析 组织学 环切结肠组织横断面 4 的福尔马林溶液固定 石蜡包 埋 根据标准操作规程部分结肠用于 H E 染色 病理学家通过 blinding way 的方式进 行形态学评分 在肠道固有层有炎性细胞数量的增多记 1 分 炎性细胞汇集于粘膜下层记 2 分 透壁性浸润记 3 分 对于组织损伤 离散的粘膜上皮损伤记 1 分 粘膜侵蚀记 2 分 深度的粘膜损伤或深度的肠壁结构的受损记 3 分 这两种等权重的评分方式 细胞浸润和 组织损伤 加在一起 结肠组织学病理严重程度的评分从 0 分到 6 分 体外分析结肠组织中的细胞因子 Ex vivo analysis of colonic cytokines 结肠用机械方法进行压碎 200 l 组织蛋白提取试剂中涡旋 1 分钟 用液氮冷冻 4 条 件下 10000g 离心 15min 匀浆液 提取总蛋白用 BioRad 蛋白试剂进行定量 结肠匀浆 中的 IFN IL 1 和 TNF 用 ELISA 的方法进行定量 mRNA 的提取和逆转录 PCR mRNA extraction and reverse transcription PCR RT PCR 结肠组织用 PBS 冲洗干净 用液氮迅速冷冻 并存储在 70 条件下 匀浆组织中总的 RNA 用 Vltra Turrax 仪器和 Roche 总 RNA 组织提出试剂盒提取获得 RNA 的总量和纯 度用分光光度法来检测 并稀释成统一浓度 逆转录反应体系 M MLV 逆转录酶 公 司 RNA 水解酶抑制剂 公司 低聚脱氧胸苷 dT 用于 cDNA 合成 公司 光 循环仪和 DNA 掺杂荧光染料 Fast start DNA Master SYBR Green I kit 用于实时 PCR 依据试剂厂商的操作说明进行 鼠科磷酸甘油醛脱氧酶基因引物 GAPDH glyceraldehyde phosphate delydrogenase 和 IP 10 CXCL 10 的引物 作为光循环系列中的标准 DNA 每个样本的拷贝数都与 GAPDH 的拷贝数相关 分离腹腔巨噬细胞 Isolation of peritoneal macrophages 在异丙烷全身麻醉的条件下颈椎脱臼 cervical dislocation 处死小鼠 腹腔内注射 10mlPBS 溶液 摇晃后 进行腹腔灌洗 peritoneal lavage 收集腹腔灌洗液 红细胞 用红裂液裂解 剩余的细胞种在细胞培养板上过夜 粘附的细胞用于细胞因子的检测 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western Blot SDS PAGE and western blotting 106个细胞培养上清或 65 g 结肠匀浆的总蛋白溶于 Laemmli 缓冲液 BioRad 并用 15 的 acrylamide bisacrylamide 凝胶进行分离 蛋白印在 0 4 m 的聚乙二烯氟化物 PVDF 膜上 起始的抗 Caspase 1 和抗 IL 1 的抗体浓度为 1 500 稀释 辣根过氧 化物酶 horseradish peroxidase HRP 相连的 actin 上样标准 loading control 浓度为 1 3000 发光液 ECLTM通过化学发光提供可视化 数据分析 Statistical analysis 数据以 mean SEM 的形式呈现出来 实验与对照组的统计学意义以 t 检验的方式检测 P 0 05 视为具有统计学差异 结果 鼠科巨噬细胞中 DSS 促进 Caspase 1 依赖的 IL 1 的处理 DSS induces caspase 1 dependent IL 1 processing in murine macrophages 激活的 IL 1 的释放有两步完成 首先由 Pro IL 1 的转录起始 例如 Toll 样受体受到刺 激 接着是 caspase 1 介导的剪切 DSS 硫酸化的高分子量的右旋糖苷的多聚阴离子衍 生物 诱导 IL 1 从鼠的巨噬细胞中释放 为了研究 IL 1 的分化机制我们用鼠巨噬细胞 系和 DSS 共孵育 24h 先前给或不给 LPS 启动 在缺少 LPS 启动下 DSS 未能诱导产 生明显的 IL 1 的释放 但是 LPS 启动的巨噬细胞对加入的 DSS 以剂量依赖的方式产生 强烈的应答 Fig1A IL 1 的生成需要 LPS 的启动进一步由联合 MyD88 TRIF 同时 缺陷的巨噬细胞系中的数据得到支持 此细胞系用 DSS 和尼日利亚菌素 nigericin 一种 钾离子载体可激活 Caspase 1 但是对多聚 dA dT 有反应 以 TLR 依赖的方式诱导 IL 1 的产生 刺激都不再产生 IL 1 Fig1B 为了阐明 Caspase 1 在 DSS 介导的 IL 1 释放中的作用 我们给予细胞 Caspase 1 抑制剂 Z YVAD fmk 并且发现它完全废止了 IL 1 的释放 相同的结果在运用野生型小鼠的初始腹腔巨噬细胞 Fig1D 和初始人类巨噬 细胞和 THP 1 细胞系中得到了支持 Supplementary figure 1 为了证实 IL 1 是以它 的活性形式释放出来 我们对 IL 1 P17 和 Caspase 1 P10 进行 Western blot 同时对 DSS 和尼日利亚菌素刺激的巨噬细胞的上清进行了相同的处理 Fig 2E 为了确定是否摄 入 DSS 大分子为 Caspase 1 的激活所必需 我们在对巨噬细胞刺激前用葡聚糖酶降解 DSS 葡聚糖水解酶可以切断异麦芽糖的 1 6 糖苷键 葡聚糖酶几乎全部抑制了 IL 1 的 释放 Fig1 F 用 8 1400KDa 分子量的 DSS 与巨噬细胞共孵育 得出 IL 1 的分泌和 DSS 的分子量呈正相关性 Fig 1G 提示 IL 1 的分泌只是大分子量的 DSS 摄入所诱 导的 DSS induces NLRP3 inflammasome actication DSS 诱导 NLRP3 炎症小体的激活 NLR 核苷酸结合区域 亮氨酸富集区域 NLRP3 能够形成一个炎症小体 并有衔接分子 adaptor molecule ASC 和 Caspase 1 应对各种刺激 我们推测 DSS 激活的 Caspase 1 是由 NLRP3 炎症小体介导 NLRP3 炎症小体的激活依赖于钾离子流 为了评价 NLRP3 在 DSS 诱导的 Caspase 1 激活中的作用 我们在细胞外培养液中加入高浓度的 KCl 发现 可以完全抑制 IL 1 的释放 Fig 2A 另外 缺失 NLRP3 ASC 或 Caspase 1 的巨噬细 胞对 DSS 的刺激缺乏 IL 1 的分泌 Fig 2B 与先前的观察结果相一致 对转染的多聚 dA dT 呈现 NLRP3 的非依赖性和 ASC 的依赖性 相对比地 IPAF 的小鼠 IPAF 是 NLRP3 非依赖的 Caspase 1 募集炎症小体 在 IL 1 的分泌中无缺陷 Fig 2C IL 1 的分泌需要 NLRP3 这一论点进一步由研究 NLRP3 小鼠的腹腔巨噬细胞所支持 Fig 2D NLRP3 的激活引发了 ASC 的大量聚集 ASC 进一步激活了 Caspase 1 为了分析 ASC 的招募情况 我们运用了稳定表达 ASC 荧光蛋白 融合蛋白稳定表达的巨噬细胞 NLRP3 ASC 的聚集导致了荧光流 fluorescent speck 的形成 这可以在荧光显微镜下 观察到 DSS 以浓度依赖的方式诱导荧光流的形成 Fig 2E 我们可以通过缺乏 P2X7 的巨噬细胞应对 DSS 刺激 IL 1 的分泌未受影响而排除 rule out DSS 直接或间接通过 P2X7 受体诱导 NLRP3 炎症小体的激活 fig 2F 总之 这些发现表明 DSS 激活了 NLRP3 ASC 复合体 导致了 Caspase 1 的激活使 Pro IL 1 切割成成熟的分泌形态 NLRP3 inflammasome activation in response to DSS is dependent on lysosomal maturation and reactive oxygen species ROS DSS 刺激的 NLRP3 炎症小体的激活依赖于溶酶体成熟和活性氧生成 细胞自噬 phagocytosis 作为一种特殊的病原体相关分子模式通过溶酶体的产生而能够 激活炎症小体 NLRP3 为了进一步描述 NLRP3 炎症小体在 DSS 诱导下激活的机制 我们 通过药理学阻断溶酶体形成和发挥功能的通路 为了研究吞噬体的形成在 Caspase 1 激活 中的作用 我们在 DSS 孵育巨噬细胞之间加入了细胞松弛素 Cytochalasin D 可以通过 扰乱肌动蛋白纤丝抑制细胞自噬 细胞松弛素完全废除了 DSS 介导的 IL 1 的分泌 而 对钾离子载体尼日利亚菌素产生的作用没有任何影响 Fig 3A 另外 通过博来霉素 bafilomycin A1 一种液泡 H ATP 酶抑制剂 完全抑制了 DSS 介导的 IL 1 的释放 这些发现表明功能性溶酶体在 DSS 介导的 NLRP3 的激活中发挥着确切的作用 运用特异 性的 Cathepsin 的抑制剂的实验表明在应对结晶或者流行病毒时溶酶体半胱氨酸蛋白酶和 NLRPs 炎症小体的激活之间存在着一定的联系 为了评价这种机制是否适用于 DSS 诱导 的 NLRP3 炎症小体的激活 我们比较了 WT 的巨噬细胞以及 Cathesin B 和 Cathepsin L 缺失的巨噬细胞的 IL 1 的释放情况 IL 1 在 DSS 诱导的巨噬细胞中的分泌由于 Cathepsin B 的缺失而显著下降 cathepsin L 的缺失引起相对低一些的 IL 1 分泌的下降 fig 3B 因此 溶酶体 半胱氨酸 蛋白酶在 DSS 诱导的炎症小体的激活中发挥作用 我们进一步评价 DSS 是否引起了溶酶体的损伤 如被提到的晶体结构 我们运用吖啶的 染色特性 一种染料 单体形态下呈现绿色荧光 酸性条件下二聚体形状呈现红的荧光 红色荧光的密度与细胞之中溶酶体的数量呈正相关 实际上 DSS 诱导产生的吖啶染色 的巨噬细胞的红色荧光强度的下降与先前报道的结构学数据相一致 表明存在溶酶体损伤 Fig 3C 总之 DSS 介导的吞噬体的不稳定性 产生了吞噬体中内容物向细胞质中的 释放 并由 NLRP3 在细胞之中所感知 NLRP3 炎症小体的激活与在应对多种刺激时 ROS 活性氧 的产生有关 先前表明 DSS 可以刺激巨噬细胞 ROS 的产生 为了研究 ROS 在 DSS 诱导的 IL 1 释放中的作用 我们 给予巨噬细胞 ROS 抑制剂 N 乙酰半胱氨酸 NAc 和 ADPC 两种抑制剂均能明显降低 IL 1 的分泌 Fig 3D 这些数据表明 ROS 在 DSS 诱导的 NLRP3 炎症小体激活中具有 促进作用 Colitis Severity and Inflammatory response in DSS model depend on NLRP3 signaling 在依赖 NLRP3 信号通路的 DSS 模型中的结肠炎的严重程度和炎症反应 我们下一步在体条件下研究 NLRP3 炎症小体在 DSS 介导的炎症肠病中的作用 WT 和 NLRP3 下属接受 2 DSS 饮用水连续 9 天 每天检测临床指标包括 体重 粪便隐血 经结肠出血 NLRP3 的小鼠对 DSS 诱导的结肠炎有明显的保护作用 体重减轻和便血 均有改善 Fig 4 值得注意的是 15 只野生小鼠中有 4 只在第 9 天由于结肠炎死掉 而 15 只 NLRP3 小鼠存活 在第 6 天获得的结肠组织的组织学分析表明 在 NLRP3 小 鼠中粘膜炎症细胞的浸润和组织损伤程度都有减轻 表明对结肠组织炎症程度评分有明显 改善 Fig 4B 在第 9 天 组织学表明 WT 和 NLRP3 都相同严重程度的肠道炎症和上 皮损伤 尽管 NLRP3 小鼠的结肠炎的临床评分相对较低 这一发现说明 NLRP3 炎症小 体在结肠炎的诱导早期具有至关重要的作用 但是敲除 NLRP3 也无法阻止长期用 DSS 诱 导的结肠炎的发病进程 因为 Caspase 1 的活性由 NLRP3 的调节 抑制 Caspsase 1 的 活性可能成为新的治疗 IBD 的有效方式 与这一理念相符合 In line with this notion 我们之前报道过用 Pralnacasan 抑制 Caspase 1 在 DSS 诱导的实验性结肠炎中有治疗作 用 给小鼠 Pralnacasan 的最佳剂量在我们先前的实验中己经确定 可以改善的临床指标 例如 体重 粪便性状 粪便出血 Fig 4C 事实上 Pralnacasan 的治疗效果和 NLRP3 的效果量级相一致 说明通过 NLRP3 炎症小体对 Caspase 1 的激活是 DSS 诱 导的结肠盐的主要发病机制 在人和急性 DSS 诱导的结肠炎小鼠模型的结肠组织中前炎性细胞因子包括 IL 1 TNF 和 INF 均提高 为了评价 NLRP3 炎症小体对肠道炎症反应的影响 我们首先分析了接 受 DSS 诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的 IL 1 的产生 由于 DSS 诱导 WT 中腹腔巨噬细胞 IL 1 的释放量升高 相对比地 NLRP3 小鼠巨噬细胞在不加 DSS 诱导 IL 1 的水平检测 不到 对 DSS 也只有低水平的响应 Fig 5A 进一步地 在 DSS 诱导第六天的小鼠结 肠匀浆中 TNF IFN IP 10 的水平在 WT 小鼠中升高 而在 NLRP3 小鼠中无变化 Fig5B 有趣得是 在饮用自来水的 NLRP3 小鼠中这些细胞因子的水平也有所下降 提示 NLRP3 可能在肠道稳态生理中发挥重要作用 不过 WT 和 NLRP3 小鼠结肠匀 浆中 IL 1 的水平无明显差异 因为 ELISA 无法区分 Pro IL 1 和激活的 IL 1 我们使 用 western blot 分析剪切过的 IL 1 P17 并发现在 DSS 诱导的 WT 小鼠结肠中激活 的 IL 1 升高 而 NLRP3 小鼠无变化 Fig 5C Discussion 讨论 人类样本和鼠科动物结肠炎模型表明过多表达 IL 1 和 IL 18 在 IBD 发病中发挥重要作用 而且 Caspase 调节生物学活性形式的 IL 1 和 IL 18 的分泌 被认为是 DSS 诱导 的结肠炎的重要介质 在当前研究中 我们发现 DSS 诱导 Caspase 1 的激活是通过巨噬 细胞中的 NLRP3 炎症小体所介导 并且 NLRP3 小鼠对 DSS 诱导的结肠炎具有保护作 用 结肠的临床和组织学严重程度均有所下降 并且结肠组织中的前炎性细胞因子水平也 下降 这些保护作用主要发生在疾病的起始阶段 表明 NLRP3 炎症小体在炎症过程的起 始阶段发挥重要作用 有趣的是 NLRP3 小鼠和 Pralnacasan 给药的 WT 小鼠的临床严 重程