贝类种质基因组DNA保存.ppt

贝类种质基因组DNA保存 基因组DNA含有物种个体的遗传信息 可用于构建基因组文库 分离所需的基因和检测相关的分子标记等 由于基因组DNA所含的遗传信息量大 易获得和保存 是目前种质资源收集和保存的主要内容之一 程序图 基因组DNA收集 测定 保存 一 基因组DNA的收集 利用各种方法 包括传统的基因组DNA提取方法 各种商品化的基因组DNA提取试剂盒 提取贝类基因组DNA 二 测定 对收集的基因组DNA进行纯度 浓度 完整性的测定 紫外分光光度法检测DNA纯度取一定量的样品DNA 稀释50倍 用分光光度计分别测定A250 A280的值 根据A250 A280之比值判断DNA纯度 基因组DNA完整性的测定琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA完整性采用0 4 琼脂糖凝胶电泳 以标准DNA分子标记对比 检测基因组DNA的完整性 以碱基数 kb 表示 基因组DNA的定量对于浓度大于0 25 g mL的DNA溶液 采用紫外分光光度法测定 在波长260nm紫外线下 1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50 g mL 对于浓度小于0 25 g mL的DNA溶液 也可采用荧光光度法 DNA样品与溴化乙锭 EB 结合后 在紫外线照射下激发荧光 其荧光强度与核酸含量成正比 使用一系列已知的不同浓度DNA溶液作标准对照 可比较出被测DNA溶液的浓度 灵敏度可达1ng 5ng 三 贝类基因组DNA保存标准 完整性要求要求基因组DNA大于50kb 纯度要求要求1 6 A260 A280 1 8 同时凝胶电泳检测不到RNA污染 浓度要求要求基因组DNA浓度大于0 25 g mL 含量要求每个保存样本的DNA含量应大于50 g 保存方法及保存期限DNA溶于pH8 0的TE中 20 可保存2年 60 可保存5年 每个个体分3个保存样本分开保存 生物技术在贝类种质资源保护中的应用 对某一种质资源进行保护之前 需要了解有关该物种的遗传背景和群体遗传结构 从而建立种质资源的遗传背景档案 同工酶和蛋白质电泳技术 以及近年迅速发展的各种DNA标技术 使人们能够从不同角度和不同层次 更加全面地揭示物种的遗传信息 也为贝类种质资源保护提供了重要的基础资料 1 同工酶技术的应用同工酶技术是通过检测DNA表达产物电泳谱带的不同 在蛋白质水平研究遗传多样性的一种方法 喻子牛等 1998 利用同工酶技术研究了秦皇岛 大连 青岛和韩国釜山4个魁蚶群体的等位基因酶遗传变异 通过比较4个群体之间的遗传相似度和遗传距离表明 秦皇岛和大连两个群体之问的遗传同一性最大 这与两个群体的地理距离较近 基因交流不存在明显障碍有关 其次为秦皇岛与青岛及大连与青岛群体之间 而韩国釜山和其他3个群体之间存在一定的遗传分歧 2 随机扩增多态性DNA randomamplifiedpolymorphismDNA RAPD 技术的迅速发展和应用 促进了贝类遗传多样性的研究 3 线粒体DNA具有进化速度快 母系遗传 有效群体的大小较小 因而用较小的样本即可反映群体结构等特点 已成为研究近缘种间和种内群体间遗传分化的有力工具 4 微卫星DNA是基因组中普遍存在的2 6个核苷酸的简单串联重复序列 微卫星标记具有密度大 多态性丰富 高度杂合且稳定性好 遵循盂德尔分离定律共显性遗传 易于PCR扩增等特点 是近年发展起来的一种新的DNA标记技术 种质资源的评价与保护群体的杂合度高低是衡量一个种群种质资源质量的重要标准 为种质资源调查和保护以及遗传育种提供了丰富的数据 贝类人工繁育的一个重要内容是要明确繁育群体遗传变异的大小 从而制定出科学的管理措施 防止人工繁殖过程中进行遗传背景相似品系交配所造成遗传多样性的丢失 非科学的人工增殖常常造成子代杂和度降低和等位基因频率发生变化 特别是稀有等位基因的丢失 5 低温冷冻保存贝类种质细胞