环境微生物学实验报告

实验报告实验报告 课程名称 课程名称 环境微生物学环境微生物学 学学 院 院 资环学院资环学院 专专 业 业 姓姓 名 名 邓丁邓丁 学学 号 号 年年 级 级 任课教师 任课教师 钱晓莉钱晓莉 20142014 年年 0505 月月 2222 日日 实验一实验一 光学显微镜的使用及原核微生物 真核微生物的观察光学显微镜的使用及原核微生物 真核微生物的观察 一 实验目的一 实验目的 1 了解普通光学显微镜的构造及原理 掌握显微镜的操作及保养方法 2 观察 识别几种原核微生物 真核微生物的个体形态 学会生物图的绘 制 二 实验器皿与材料二 实验器皿与材料 1 器皿 显微镜 擦镜纸 二甲苯 2 材料 示范片 细菌三形 球状 杆状 螺旋状 弧状 硫酸盐还原菌 丝状 浮游球衣菌等 细菌鞭毛及细菌荚膜 放线菌 颤蓝细菌 微囊蓝细菌 或念珠蓝细菌等 三 实验步骤三 实验步骤 1 将标本片放在载物台上 使观察的目的物置于圆孔正中央 2 将镜头换成低倍镜 将粗调节器向下旋转 或载物台向上旋转 眼睛注 视物镜 当物镜的尖端距离载玻片约 0 5cm 处时停止旋转 3 左眼对着目镜观察 将粗调节器向上旋转 如果见到目的物 但不十分清 楚 可用细调节器调节 直至目的物清晰 此时找到目的物并移至中央 4 换成高倍镜 观察目的物 旋转细调节钮 直至视野清晰 5 观察示范片 绘出其形态图 四 思考题四 思考题 1 使用油镜时 为什么要先用低倍镜观察 答 为了找到目的物并移动到中央 2 要使视野明亮 除采用光源外 还可采取哪些措施 答 调大孔径光阑 调整光源 如果是用反光镜的显微镜 用凹面镜可使视 野明亮 五 生物图五 生物图 实验二 微生物培养基的配制与灭菌实验二 微生物培养基的配制与灭菌 一 实验目的一 实验目的 1 熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作 2 了解配置微生物培养基的基本原理 掌握配置 分装培养基的方法 3 学会各类物品的包装 配置 稀释水等 和灭菌技术 二 实验器皿与材料二 实验器皿与材料 1 实验器皿 高压蒸汽灭菌器 干燥箱 煤气灯 培养皿 试管 刻度移液 管 锥形瓶 烧杯 两桶 药物天平 玻璃棒 玻璃珠 石棉网 药匙 铁架 表面皿 pH 试纸和棉花等 2 材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl NaOH 和琼脂等 三 实验原理三 实验原理 培养基是微生物生长的基质 是按照微生物营养 生长繁殖的需要 由碳 氢 氧 氮 磷 硫 钾 钠 钙 镁 铁及微量元素和水 按一定的体积分 数配置而成 调整合适的 pH 经高温灭菌后以备培养微生物之用 由于微生物种类及代谢类型的多样性 因而培养基种类也多 它们的配方及 配制方法也各有差异 但一般的配制过程大致相同 四 实验步骤四 实验步骤 1 取 100mL 蒸馏水倒入锥形瓶 2 称取牛肉膏 0 5g 蛋白胨 1g NaCl 0 5g 琼脂 20g 3 用 100g L NaOH 调节 pH 至 7 2 7 4 4 盖上棉塞 121 下灭菌 15 20min 五 思考题五 思考题 1 固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题 答 1 加热器功率不能太高 也不能太低 太高 容易沸腾和把培养基 烧焦 太低 培养基容易凝固 2 受热要均匀 可以垫上石棉网 要用玻璃棒不停缓慢搅拌 3 加热完毕后 要在合适的温度 60 左右 倒平板 防止凝固 2 培养基中加琼脂的作用是什么 答 琼脂的作用就是让培养基凝固 3 如何检查培养基灭菌是否彻底 答 将灭菌后的培养基按灭菌锅内不同位置 每处抽取数管标号 置 25 至 30 摄氏度培养一周左右进行检查 若培养基无什么变化说明灭菌效果较好 实验三 细菌的革兰氏染色实验三 细菌的革兰氏染色 一 实验目的一 实验目的 1 了解细菌的涂片及染色在微生物学实验中的重要性 2 学会细菌染色的基本操作技术 从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏 染色法 二 染色原理二 染色原理 微生物细胞由蛋白质 核酸等两性电解质及其他化合物组成 所以 微生物 表现出两性电解质的性质 两性电解质兼有碱性基和酸性基 在酸性溶液中解 离出碱性基 呈碱性带正电 在碱性溶液中解离出酸性基 呈酸性带负电 经 测定 细菌等电点 pI 在 2 5 之间时 大多以两性离子存在 当细菌在中性 碱性或偏酸性溶液中时 细菌带负电荷 所以容易与带正电荷的碱性染料结合 故用碱性染料染色的为多 微生物体内各结构与染料结合力不同 故可用各染料分别染微生物的各结构 以便观察 三 实验器皿 试剂 材料三 实验器皿 试剂 材料 1 器皿 显微镜 接种环 载玻片 酒精灯 2 试剂 草酸铵结晶紫染液 革兰氏碘液 体积分数为 95 的乙醇 质量 浓度为 5g L 的沙黄染色液等 3 材料 枯草杆菌 大肠杆菌 四 实验步骤四 实验步骤 1 涂片 载玻片 滴一滴蒸馏水 蘸菌染匀 自然干燥 2 初染 用草酸铵结晶紫染液染色 1 2min 后水洗 3 媒染 用革兰氏碘液染色 1 2min 后水洗 4 脱色 滴加体积分数为 95 的乙醇 约 45 s 后水洗 5 复染 滴加番红染色 2 3min 后水洗并干燥 6 镜检 用显微镜观察菌体形态 五 思考题五 思考题 1 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作 关键在哪几步 为什 么 答 应注意干燥时不要用火烧太久 关键在于涂片 涂片的时候要注意涂均 匀 并且两个菌的量也要差不多 否则太厚的地方脱色就不均匀了 实验四 总大肠菌群的检验实验四 总大肠菌群的检验 一 实验目的一 实验目的 1 了解总大肠菌群的数量指标在环境领悟的重要性 学会总大肠菌群的检验 方法 2 通过检验过程 了解大肠菌群的生化特征 二 基本原理和方法二 基本原理和方法 1 人的肠道中主要存在 3 大类细菌 大肠菌群 肠球菌 产气荚膜 杆菌 由于大肠菌群的数量大 在体外存货时间与肠道致病菌相似 且检验方 法比较简便 故被定为检验肠道致病菌的指示菌 2 总大肠菌群包括肠杆菌科中的埃希氏菌属 柠檬酸细菌属 克雷伯氏菌属 肠杆菌属 这四属菌都是兼性厌氧 无芽孢的革兰氏阴性杆菌 大肠杆菌的检测方法主要有多管发酵法和滤膜法 三 仪器和材料三 仪器和材料 一 器皿 显微镜 锥形瓶 500mL 1 个 试管 6 或 7 支 大试管 150mL 2 支 移液 管 1mL 2 支 10mL 1 支 培养皿 10 套 接种环 试管架 1 个 二 试剂 材料 1 革兰氏染色液一套 2 受污染的河水 400mL 3 化学药品 蛋白胨 乳糖 磷酸氢二钾 琼脂 无水亚硫酸钠 牛肉膏 氯化钠 质量浓度 16g L 的溴甲酚紫乙醇溶液 质量浓度 50g L 的碱性品红乙 醇溶液 质量浓度 20g L 伊水红溶液 质量浓度 5g L 亚甲蓝水溶液 4 其他 质量浓度 100g L NaOH 体积分数 10 HCl 精密 pH 试纸 6 4 8 4 等 四 步骤四 步骤 1 初发酵试验 在 2 个各装有已灭菌 50ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 4 2 的大试管或烧瓶中 内有倒管 内 以无菌操作各加入水样 100ml 在 10 支装有已灭菌 5ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中 内有倒管 以无 菌操作各加入水样 10ml 混匀后置于 37 恒温箱内培养 24h 2 平板分离 经培养 24h 后 将产酸产气及只产酸的发酵管 分别接种于 品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上 再置于 37 恒温箱内培养 18 24h 挑选符合下列特征的菌落 取菌落的一小部分进行涂片 革兰氏试验 镜检 3 复发酵试验 上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽胞杆菌 则挑取该 菌落的另一部分再接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中 内有倒管 每管可接 种分离自同一初发酵管的最典型的菌落 1 3 个 然后置于 37