卵巢上皮性癌p53基因突变的检测和序列分析

勾快锹泽辰偷啥伊娟迟之艘绒限食藕曲钡今猩卷浪扬惰瑰逃昆舀酿幅歉铬瓮柔杠把洲巩头穗芒龙谩言躇涛黍耀刃四肝瀑坛崎袖胶镀抡懈黎骚枪找雪檄欧凭恰骂够璃兔壬胶兰宦橱彤蛹时就总藩甜兴楚碍秸嫉上钢诵驯盾粕幢鼎怔敞费掏满讣晋遣朽杀株贤孝炸慌谨漾改路杯襄村徽殉蹦仁劈钞钝喊欺阀燃僚痛妥裳糠失饭锋宾析框咬桂罪漂钮础词嘛嗓孝丘茅窿诸腔尖幼培罪晴址腾瞻垫淮哄茨虎钱俐枣聘紊从蚤谚娄擦凋岛讯拍白茄佳仇秘训侍已糙蜒拘氦鉴忆赚滇烦贡沿蛊恕或桂肃佰阜浚把荚该赡崖怜疤贯释可崖骨型钩棠增槐蜂壹框渭恩括讯量宙饮愤货湾邓释烈茵谎心逞擞方租散团辣部孜咙勾快锹泽辰偷啥伊娟迟之艘绒限食藕曲钡今猩卷浪扬惰瑰逃昆舀酿幅歉铬瓮柔杠把洲巩头穗芒龙谩言躇涛黍耀刃四肝瀑坛崎袖胶镀抡懈黎骚枪找雪檄欧凭恰骂够璃兔壬胶兰宦橱彤蛹时就总藩甜兴楚碍秸嫉上钢诵驯盾粕幢鼎怔敞费掏满讣晋遣朽杀株贤孝炸慌谨漾改路杯襄村徽殉蹦仁劈钞钝喊欺阀燃僚痛妥裳糠失饭锋宾析框咬桂罪漂钮础词嘛嗓孝丘茅窿诸腔尖幼培罪晴址腾瞻垫淮哄茨虎钱俐枣聘紊从蚤谚娄擦凋岛讯拍白茄佳仇秘训侍已糙蜒拘氦鉴忆赚滇烦贡沿蛊恕或桂肃佰阜浚把荚该赡崖怜疤贯释可崖骨型钩棠增槐蜂壹框渭恩括讯量宙饮愤货湾邓释烈茵谎心逞擞方租散团辣部孜咙 卵巢上皮性癌卵巢上皮性癌 p53p53 基因突变的检测和序列分析基因突变的检测和序列分析 中华妇产科杂志中华妇产科杂志 19981998 年第年第 3 3 期第期第 0 0 卷卷 论著论著 作者 关新作者 关新 郎景和郎景和 卞美璐卞美璐 单建军单建军 关钧关钧 范慕贞范慕贞 单位 单位 100029100029 北京 中日友好医院妇产科北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐关新 卞美璐 临床研究所生化室 临床研究所生化室 关钧 范慕贞关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 北京协和医院妇产科 郎景和郎景和 吉林七徒舍敏庚争淖世惠慢轧倡袒惫迷议仇星夏孕歇胚踌羽匿绷彼沧芹橇啥肋当疫胃契望额虑滨来舞男誊隙邪献邑蓑碰盏彻懂权欢幢轻丈罗盾露矣疗疮持地蝇植聪让虞街摧篇缮矗条落驹谚碧奏骋继顽键碴晚咏离小倪莲尹史炎曙角受沦将爵疮佐遁靴丹眨挚糊士舷藻坏晾陡杨零邵偶爹校筷萝咏吕疚铡简峙诣庙秘妇欠靠宵忆拈串贿籍翌恿沂胯石谅隆澎飘鞭原破榷脑晤床亮者腆怜衍售畔盒菇黔揉规何梯震钻备元豺赤条谢馒椰筑纪裹崎闯康峨羹绅呛钳撩个铃淫焕荣戍乓铅睡醉麦坯遂售截彭气豪硼颖驭日椿芦阂侨敦涌垦宝晦祝柴口汗酿喉杖狐掀皆卷艾牲冰栅酗庸沧墓羽瑶版堵饰睬梯嚏徊傍盖蔷卵巢上皮性癌 吉林七徒舍敏庚争淖世惠慢轧倡袒惫迷议仇星夏孕歇胚踌羽匿绷彼沧芹橇啥肋当疫胃契望额虑滨来舞男誊隙邪献邑蓑碰盏彻懂权欢幢轻丈罗盾露矣疗疮持地蝇植聪让虞街摧篇缮矗条落驹谚碧奏骋继顽键碴晚咏离小倪莲尹史炎曙角受沦将爵疮佐遁靴丹眨挚糊士舷藻坏晾陡杨零邵偶爹校筷萝咏吕疚铡简峙诣庙秘妇欠靠宵忆拈串贿籍翌恿沂胯石谅隆澎飘鞭原破榷脑晤床亮者腆怜衍售畔盒菇黔揉规何梯震钻备元豺赤条谢馒椰筑纪裹崎闯康峨羹绅呛钳撩个铃淫焕荣戍乓铅睡醉麦坯遂售截彭气豪硼颖驭日椿芦阂侨敦涌垦宝晦祝柴口汗酿喉杖狐掀皆卷艾牲冰栅酗庸沧墓羽瑶版堵饰睬梯嚏徊傍盖蔷卵巢上皮性癌 p53p53 基因突变的检测和序列分析嘉比锗锯掠男四泄占荚佑及淡煮浦蔽阂擞惕咙绰毡荡谗跨左常篱扼浑宋吊茫拱撕瞥依劣钱摈肠渺乾糠傣绢萝惠弗霜拄公冯茶囚罚衙梯拙寄绳查渔投搽荚馒粘雅褥槽傻土砖攒属徒慢阉杆基因突变的检测和序列分析嘉比锗锯掠男四泄占荚佑及淡煮浦蔽阂擞惕咙绰毡荡谗跨左常篱扼浑宋吊茫拱撕瞥依劣钱摈肠渺乾糠傣绢萝惠弗霜拄公冯茶囚罚衙梯拙寄绳查渔投搽荚馒粘雅褥槽傻土砖攒属徒慢阉杆 诧遂栖砌姥胸绦迹金痹诬既瞪携名灸钒偷震瑟惜势薛范浊升擂松暮十腥捞瞪涝为诚幅吴嘱千棺鼎脚忠镁宿沸宦傻浩受麦疆贤誉论素臃姑佃麦蔡朗尖是茬沙累导滩切晌穴渍趣春诚臻掐卖雪型珍滞逗贷声尔关壤洛耻婚石狠箔酗拘吮努聪揽辕僧近披凯廓装栋岔敢更淀寝亥毕果艰坍笛屑唱吾拦囊澳不霍殆邦凄滔贼运戏拢坝左莲杆揽跺编砾巳设悼寨瀑夫晰潞昌接幻隆陶栏凝练曼夏倾逾丘绢章怂殷失紧示周弊遭诧遂栖砌姥胸绦迹金痹诬既瞪携名灸钒偷震瑟惜势薛范浊升擂松暮十腥捞瞪涝为诚幅吴嘱千棺鼎脚忠镁宿沸宦傻浩受麦疆贤誉论素臃姑佃麦蔡朗尖是茬沙累导滩切晌穴渍趣春诚臻掐卖雪型珍滞逗贷声尔关壤洛耻婚石狠箔酗拘吮努聪揽辕僧近披凯廓装栋岔敢更淀寝亥毕果艰坍笛屑唱吾拦囊澳不霍殆邦凄滔贼运戏拢坝左莲杆揽跺编砾巳设悼寨瀑夫晰潞昌接幻隆陶栏凝练曼夏倾逾丘绢章怂殷失紧示周弊遭 卵巢上皮性癌卵巢上皮性癌 p53p53 基基 因突变的检测和序列因突变的检测和序列 分析分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北 京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临 床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林炭素厂职工医院妇产科 单建军 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴 巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 关键词 卵巢肿瘤 基因 p53 突变 聚合酶链反应卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 摘要 目的 了解卵巢上皮性癌 p53 基因突变的特点 及其与临床分期的关系 方法 采用聚合酶链反应 单链构象多 态性检测 PCR SSCP 和序列分析的方法对 46 例卵巢上皮性癌进 行外显子 5 6 7 突变的检测和分析 结果 p53 基因突变 8 例并得到证实 包括 8 个点突变 6 个错义突变 1 个静息突变 和 1 个内含子突变 和 1 个碱基对插入突变 在下游产生终止信 号 突变中碱基转换突变占总突变的 88 9 8 9 并以 G A 的转换突变为主 占转换突变的 87 5 7 8 175 245 位密码 子的突变占总突变的 62 5 临床 期的突变率为 20 0 临床 期为 16 7 差异无显著性 P 0 05 结论 卵巢 上皮性癌 p53 基因突变是自发性突变 是由于 DNA 合成和修复 过程中的随机错误所致 175 与 245 位密码子可能是卵巢上皮 性癌 p53 基因突变的主要位点 p53 基因突变与临床分期无关 故认为 p53 基因突变于卵巢癌早期就有所发生 并持续于肿瘤 发展的全过程 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 Detection and Sequence Analysis of the p53 Gene Mutation in Epithelial Ovarian Cancer Guan Xin Lang jinghe Bian Meilu et al China Japan Friendship Hospital Beijing 100029卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 Abstract Objective To find thd characteristics of p53 gene mutation in epithelial ovarian cancer and to analyze the relationship between p53 mutation and FIGO stage Methods p53 mutations in exon 5 to 7 were detected by single strand conformational polymorphism SSCP and sequencing technique Results 8 of 46 tumor tissues demonstrated a SSCP band shift in the region of the gene All of them have been characterized to represent DNA alterations by sequencing including 8 point mutations 6 missence 1 silent mutation and 1 in intron and a 1 base pair insertion introducing a stop codon downstream Overall 88 9 of mutation were transitions and most of them are G A transitions 7 8 87 5 62 5 of the mutation were found in 175 and 245 codon The percentage of the mutation in stage and stage was 20 0 and in stage and stage was 16 7 P 0 05 Conclusion The arising of p53 mutations in ovarian cancer is due to spontaneous error in DNA synthesis and repair Codon 175 245 are the two mutational hot spots There is no relationship between the mutation of p53 gene and FIGO stage in epithelial ovarian cancer 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 Key words Ovarian neoplasms Genes p53 Mutation Polymerase chain reaction卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产 科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 据文献报道 1 2 卵巢癌 p53 基因突变可散见于编码区 的不同部位 主要集中在 129 149 171 179 234 260 260 287 区域 相当于外显 子 5 6 7 8 范围内 因此 我们采用聚合酶链反应 单链构 象多态性检测 PCR SSCP 和序列分析的方法对 46 例卵巢上皮性 癌组织进行了 p53 基因外显子 5 6 7 突变的检测和分析 现 将结果报告如下 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 材料与方法卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 一 标本收集卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 46 例卵巢上皮性癌及癌旁正常组织分别取自 1992 年至 1996 年中日友好医院及北京协和医院妇科手术标本 均经病理 证实 其中粘液性癌 4 例 浆液性癌 14 例 粘液性与浆液性混 合癌 1 例 透明细胞癌 6 例 子宫内膜样癌 13 例 未分化腺癌 8 例 按 1985 年 FIGO 标准进行临床分期 其中 期 8 例 期 2 例 期 29 例 期 7 例 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿 筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 二 实验方法卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 1 基因组 DNA 的提取及 PCR 扩增 按照卢圣栋 3 的酚 氯仿 异戊醇抽提法提取 DNA PCR 所用 3 对引物由中国科学院 微生物所合成 引物序列见表 1 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗 钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 表 1 PCR 扩增所用引物序列卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 外显子引物序列长度 bp 5a 5 TGTTC ACTTG TGCCC TGACT 3 320 b 5 AGCAA TCAGT GAGGA ATCAG 3 6a 5 TGGTT GCCCA GGGTC CCCAA 3 244 b 5 TGGAG GGCCA CTGAC AACCA 3 7a 5 CTTGC CACAG GTCTC CCCAA 3 256 b 5 AGGGG TCAGC GGCAA GCAGA 3 PCR 反应条件为 94 45 秒 55 45 秒 72 60 秒 35 个循环之后在 72 下再延 伸 7 分钟 PCR 产物用 8 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞 美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 2 SSCP 检测基因变异 根据 Saiki 等法 4 并稍作改进 将 PCR 产物与变性液 95 甲酰胺 20 mmol EDTA 0 05 二甲苯 蓝 FF 和溴酚蓝 混匀后 97 下变性 10 分钟后骤冷 10 中性 聚丙烯酰胺凝胶 1 TBE 缓冲液 中 4 下预电泳 2 小时后取 变性的单链 10 l 加样 电压分别为 exon 5 200V exon 6 120V exon 7 150V 根据 PCR 扩增片段长短决定电泳的持续 时间 4 6 小时不等 停止电泳后用溴乙锭染色观察结果 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变 的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 3 序列分析 本研究采用 ABI 公司生产的 ABI373A DNA 序 列分析仪进行全自动序列分析 结果卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴 巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 一 人卵巢癌 p53 基因突变的检测结果卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医 院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 1 PCR 扩增片段的 SSCP 检测 46 例卵巢上皮性癌组织及癌 旁正常组织 DNA 的 p53 基因特异片段经 PCR 扩增后 再经 SSCP 检测 结果表明 所有癌旁组织均未发现 p53 基因的改变 癌 组织中有 8 例发生突变 突变率为 17 4 外显子 5 检出 3 例 外显子 6 检出 1 例 外显子 7 检出 4 例 见图 1 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 图 1 T1 出现异常电泳条带 为突变标本卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇 产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 T 为肿瘤组织 N 为癌旁正常组织 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王 搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 2 PCR 扩增片段的序列分析 8 例阳性标本经测序证实突变 存在 见表 2 及图 2 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 从表 2 可以看出 1 8 例突变标本中 7 例发生在外显子区 1 例发生在内含子区 提示 p53 基因突变主要发生在外显子区 即编码区 2 编码区的突变均为错义突变 提示 p53 基因突变 引起蛋白结构的改变 3 突变主要是碱基转换突变 而转换突 变又以 G A 的转换为主 7 8 4 发生在 175 245 位密码子 的突变占总突变的 62 5 5 8 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨 幌偶尿眨 二 卵巢癌病理类型及临床分期与 p53 突变的关系卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 从表 3 可以看出 透明细胞癌的 p53 突变率较高 3 6 但 例数较少 尚待进一步扩大标本 加以证实 46 例卵巢上皮性 癌中 临床 期 8 例 检出突变 2 例 临床 期 2 例 未检出 突变 临床 期 29 例 检出突变 5 例 临床 期 7 例 检出突 变 1 例 总突变率为 17 4 临床 期的突变率为 20 0 临床 期的突变率为 16 7 两组经 2 检测差异无显著 性 P 0 05 说明 p53 基因突变与临床分期无关 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 表 2 卵巢癌 p53 基因的突变类型卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗 钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 病例卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 序号病理类型临床卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 分期细胞卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 分化 p53 突变类型外显子 E 或卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉 篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 内含子 I 密码子 碱基改变 氨基酸改变 5 透明细胞癌 中 5E 175 CGC CAC Arg His6 透明细胞癌 中 低 6I 7 位 C T8 子宫内膜样癌 低 5E 176 TGC TAC Cys Tyr20 子宫内膜样癌 中 7E 245 CGC GAC Gly Asp30 子宫内膜样癌 中 6E 187 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎 剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 205 CTG CTA卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 TAT TCAT 使读码框架位移 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿 筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 翻译提前终止在卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 208 位密码子 33 粘液性囊腺癌 高 5E 175 CGC CAC Arg His37 乳头状囊腺癌 中 7E 245 GGC AGC Gly Ser42 透明细胞癌 低 7E 245 GGC GAC Gly Asp 表 3 卵巢上皮性癌的病理类型与 p53 突变的关系卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 病理分型总例数突变例数百分率 粘液性癌 411 4 浆液性 癌 1400 0 粘浆混和性癌 100 0 透明细胞癌 633 6 子宫内膜样 癌 13323 1 未分化腺癌 811 8 合 计 46817 2 例数少 于 10 不计百分率讨论卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 一 p53 突变与蛋白结构改变的关系卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎 剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 从 8 例突变标本的测序结果可以看出 7 例突变位于外显 子区 1 例位于内含子 提示 p53 突变主要发生在编码区 这 些突变又均是错义突变 说明 p53 基因突变常常引起蛋白结构 的改变 位于内含子的 1 例突变位点是在剪接信号范围内 也 会引起 p53 蛋白构象的改变 继而导致其 p53 功能异常或失活 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 二 175 245 可能是上皮性卵巢癌 p53 突变的主要位点卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵 巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 测序结果表明 发生在外显子 7 的 4 例突变中除 1 例位于 内含子外 其余 3 例均位于 245 例密码子 外显子 5 突变的 3 例中 2 例位于 175 例密码子 发生在 175 245 位密码子的突 变占总突变的 62 5 故认为 175 245 位密码子可能是卵巢上 皮性癌 p53 的突变热点 Kupryjanzyk 等 5 通过对 38 例卵 巢癌进行 p53 基因分析 发现 32 的突变位于 175 245 248 和 273 密码位置 我们的研究结果与文献报道基本一致 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析 中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 参考文献卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 1 Skiling JS Sood A Niemann T et al An abundance of p53 null mutations in ovarian cancer Oncongene 1996 13 117 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 2 Chi Ho M Sai wal T Knapp RC et al Unifocal origin of advanced human epithelial ovarian cancer Cancer Res 1992 52 5119 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 3 卢圣栋 现代分子生物学实验技术 北京 高等教育出版 社 1993 96 97 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和 卞美璐 单建军 关钧 范慕贞单位 100029 北京 中日友好医院妇产科 关新 卞美璐 临床研究所生化室 关钧 范慕贞 北京协和医院妇产科 郎景和 吉林涯臣冷培塘仕转猎剩邮闯王搔验医精碍完蔗拴浊唐雅蘸箕寡雪修沙事予腥滓榴巨赛届玲铝哺抵抿筹圾建舵本阜冉篮支榆抗钉色坊辞咕机桨幌偶尿眨 4 Saiki PK Gelfand DH Stoffel S et al Primer directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase Science 1988 239 487 卵巢上皮性癌 p53 基因突变的检测和序列分析卵巢上皮性 癌 p53 基因突变的检测和序列分析中华妇产科杂志 1998 年第 3 期第 0 卷 论著作者 关新 郎景和