昆虫sf9细胞培养

Sf9 培养要点 培养要点 温度 温度 27 28 摄氏度 pH sf9 最适的 pH6 2 随培养时间的延长 Ph 值会增加 传代时间 传代时间 72h 三天左右 细胞来源 细胞来源 Sf9 货号 B825 01 和 Sf21 货号 B821 01 细胞系是传统的用于杆状病毒表 达的细胞系 源于美国农业部昆虫病理实验室 此细胞系适用于 InsectSelect 系统 这两株 细胞衍生于 IPLBSF 21 细胞系 来源于秋蝇蠕虫 草地夜蛾 蛹的卵巢组织 以上来自 invitrogen 细胞特点 规则的带有颗粒球形 贴壁紧 标准条件的定义 标准条件的定义 培养最低密度 0 6 ml 健康对数生长期细胞活率至少应不低于 90 活率低于 10 6 90 细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验 1 mL 将出现对数生长状态 106 传代培养 传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率 贴壁培养 贴壁细胞传代需在细胞长成单层 如下定义 然后 1 5 细胞体积 最后培 养基体积 稀释维持对数生长 形成单层细胞可以传代培养 悬浮培养 在细胞密度达到 2 0 2 5 细胞 mL 后将密度调整至 0 7 1 0 106106106 细胞 mL 进行悬浮传代 确保传代细胞密度不高于 4 个 mL 或保持密度高于 1 106106 个 mL 以达到对数生长状态 106 Sf9 悬浮培养所需要的细胞数 培养基 培养基 sf 900 SFM 添加 2 的血清减小感染过程中蛋白水解量 培养瓶与培养体积 冻存 冻存 一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存 细胞需达到 90 活率和 80 90 融合 的要求 如 低代次 推荐冻存几管 当融解细胞 它将会达到最佳使用状态 1 用细胞计数板计数细胞 需要足够的如上表所示密度的细胞冻存 2 4 管 细胞可是悬浮 或贴壁培养 2 将无菌冻存管立于冰上 做好标记 3 室温 400 600 g 离心 10min 移除上清 4 以给定的密度在冻存液中重悬细胞 5 移取 1mL 细胞悬液置于无菌冻存管中 6 置于 20 1h 然后移至 80 24 48h 7 储存于液氮中 转染的细胞 转染的细胞 需要的是对数期的细胞 95 发育能力 可以完成成功的转染 载氧 载氧 对于最优生长条件和蛋白的表达 昆虫细胞要求被动的通氧 积极的通氧系统要求 溶氧饱和在 10 50 Sf900II 和 sf900 的区别 一般推荐 Sf900II 来大量表达蛋白 Sf900II 含有表面活性剂 剪切力保护剂 保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害 当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时 注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂无血清培养基不能直接用于螯合树脂 因 为培养基的成分会除去树脂中的镍离子 细胞培养的一般顺序 细胞培养的一般顺序 复苏 传代 传代稳定 冻存 应当遵循的一般过程 应当遵循的一般过程 复苏 贴壁培养 悬浮 悬浮扩大培养 产生目标蛋白 也可不经过贴壁培养 直接悬浮培养 贴壁时间 贴壁时间 45min 悬浮的转速 悬浮的转速 80rpm 附 离心机 rcf 与 g 的换算 无血清培