核酸蛋白测定仪使用说明及问题解决

仪器名称 核酸蛋白测定仪 使用方向 快速 可靠地检测双链 单链 DNA RNA 寡核苷酸 蛋白质和细菌细胞密度 混浊度 型号 Biophotometer 生产厂家 Eppendorf 添置时间 2006 主要性能 氙灯光源 寿命长达 10 年 无需预热 可检测吸光度范围 0 000 3 000A 波长范围 230nm 260nm 280nm 320nm 562nm 595nm 1 光度计准确度 1A 的误差 0 5 光度计精确度 1A 约为 可测量核酸 蛋白质的紫外测定 lowry bradford BAC 比色法测定以及 OD600 储存和查看最新 100 个检测结果 自我检测功能 数据可导入到 PC 机 自动计算浓度和稀释度 可转换浓度单位 使用说明 操作说明 准备 开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定 无需预热 一 核酸浓度测定 包括 dsDNA ssDNA RNA Oligo 1 例如待测定样品为 dsDNA eg PCR 产物 按下键 7 dsDNA 若待测样品为 ssDNA eg 反转录合成的第一链 cDNA 产物 则相应按下键 8 ssDNA 若待测样品为 RNA 则按下键 9 RNA 若待测样品为 Oligo 寡聚核苷酸 eg PCR 引物 则相应按下键 6 Oligo 2 将空白对照置入样品孔 注意 空白对照是空白液 并非所有情况都是水 例如用 Tris 溶液溶解 DNA 制品 则要用 Tris 液做空白对照 3 按下键 Blank 4 仪器记录空白对照 设置为 0 000A 5 将第一个样品置入样品孔 6 按下 Sample 7 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值 以及其他相关参考比值 8 直接放入第二个样品 9 按下 Sample 10 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值 以及其他相关参考比值 11 依次测定 每个样品的测定值将自动存储在机器中 查看测定结果的方法如下 1 按下键 Function 2 选择 DISPLAY RESULT 按 Enter 键 查看每个样品的测定值记录 本机可存储 100 个样品的测定值 设定样品的稀释度 1 按下键 Dilution 2 输入样品体积和稀释液体积 按 Enter 键确认 二 蛋白质浓度的直接测定 280nm 测定 1 按下键 4 Protein 2 将空白对照置入样品孔 3 按下键 Blank 4 仪器记录空白对照 设置为 0 000A 5 将第一个样品置入样品孔 6 按下 Sample 7 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值 以及其他相关参考比值 8 依次测定 每个样品的测定值将自动存储在机器中 可查看测定结果 三 蛋白质浓度显色法的间接测定 Bradford Lowry BCA 1 按下键 1 Bradbord or 2 Lowry or BCA 选择蛋白质显色反应的方法 注 Bradford 键按两次 每次显示不同的测定范围 2 设置标准曲线的标准样品数量 测定次数和浓度范围 按下键 Parameter 用上下键 进行选择和参数调整 3 将空白对照置入样品孔 4 按下键 Blank 5 仪器记录空白对照 设置为 0 000A 6 将第一个标准品或样品 如需沿用已存储的标准曲线 可直接测样品 置入样品孔 7 按下 Sample 或 Standard 8 依次测定标准品或样品 每个样品的测定值将自动存储在机器中 查看测定结果 四 OD600 细菌生长密度测定 1 按下键 5 OD 600 2 将空白对照置入样品孔 3 按下键 Blank 4 仪器记录空白对照 设置为 0 000A 5 将第一个样品置入样品孔 6 按下 Sample 7 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值 8 依次测定 每个样品的测定值将自动存储在机器中 查看测定结果 注意事项 1 为了尽量减少颗粒对测试结果的影响 要求核酸吸光值至少大于 0 1A 吸光值最好在 0 1 1 5A 在此范围内颗粒的干扰相对较小 结果稳定 样品的浓度不能过低或者过高 2 混合要充分 否则吸光值太低 甚至出现负值 3 混合液中不能有气泡 空白液无悬浮物 否则读数漂移剧烈 4 必须使用相同的比色杯测试空白液和样品 否则测定浓度结果差异太大 5 换算系数和样品浓度单位选择要一致 6 不能采用窗口磨损的比色杯 7 样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积 50ul 8 通常浓度的样品可以用 10 mm 光程长度进行检测 对于高浓度的样品 只需将比色皿旋 转 90 使用稍短的 2 mm 光径进行检测 重要的比值表示样品的纯度 1 A 260 A 280 用于评估样品的纯度 纯净的样品 比值大于 1 8 DNA 或者 2 0 RNA 如果比值低于 1 8 或者 2 0 表示存在蛋白质或者酚类物质的影响 2 A230 表示样品中存在一些污染物 如碳水化合物 多肽 苯酚等 较纯净的核酸 A260 A230 的比值大于 2 0 3 A320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子 纯样品 A320 一般是 0 FAQ 1 问 仪器读数漂移 答 所有的分光光度计测定的都是吸光值或者透光值 Biophotometer 以吸光值表示 然后通 过系列计算因子换算成浓度 所以反映数据是否准确和仪器性能的关键指标是吸光值 当 同一样品的所有吸光值在均数的正负 0 5 左右浮动 属于正常 如果读数位于一个标准 品的 1 的误差范围内 说明测试准确 2 问 读数出现负值 或者几次读数相差非常大 答 在测试之前 需要做空白测试 空白液必须与溶解和稀释样品的液体性质一致 测试之前必须充分混匀 并确保无气泡产生 测试种注意比色杯方向一致 光径准确 3 问 上述所有问题我都是正确处理 依旧出现读数不稳的现象 答 样品浓度太低 A260nm 的吸光值必须 0 1 读数才有意义 考虑样品是否刚从冰箱取出 样品在室温条件下有升温现象 会导致读数不稳定现象 另外 大多数客户采用水作空白 应在测试前保证水新鲜和纯净 如果水中有漂浮物 会导致读数严重漂移 4 问 A280 A230 A260 A320 各个指标的意义是什么 以及 A260 230 A260 A280 比值范围 在多少范围内正常 答 260nm 波长一般是核酸的吸收峰 A260 一般表示核酸的吸光度 280nm 波长一般是蛋白质的吸收峰 A280 一般表示蛋白质的吸光度 当样品中出现悬浮物 微生物等大颗粒物质 A320 的读数相对增大 纯净的样品中 320nm 的吸光值是 0 一般如果 A320 大于 0 01 应该设定 A320correct 功能为 ON 230nm 的吸光值表示样品中苯酚 芳香族化合物 肽 碳水化合物等杂质的含量 A260 A280 的比值表示 DNA 或者 RNA 样品纯度 前者一般 1 8 2 0 后者一般在 2 0 2 2 的范围内 表示核酸样品比较纯 如果蛋白质污染会降低这些笔直 A260 A230 的比值一般大于 2 0 名称 正常值范围 A320 2 0 5 核酸可测定的最小值是多少 蛋白质可测定的最小值是多少 答 仪器的吸光值范围 0 000 3 000 之间 DNA 样品测试中 检测的最低吸光值 0 05 相当于 125ngDsDNA 50ul 样品 浓度 2 5 ug mlRNA 样品测试中 检测的最低吸光值 0 05 对应的浓度 2ug ml 100ngRNA 50ul 样品 但实际操作中 要求 A260nm 的吸光值 0 1 的吸光值才是值得信赖的 蛋