普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性试验报告

XX 制药有限公司 第 1 页 共 11 页 微生物限度方法适用性试验报告微生物限度方法适用性试验报告 文件编号 XXX XXXXXXXX 制药有限公司制药有限公司 微生物限度方法适用性试验报告第 2 页 共 11 页 微生物限度方法适用性试验报告微生物限度方法适用性试验报告 起草人 部门 日期 审核人 部门 日期 批准人 日期 微生物限度方法适用性试验报告第 3 页 共 11 页 1 1 概述 概述 本公司主要产品之一 本产品已进行批量生产并已进行工艺验 证 微生物检验相对稳定 由于 中华人民共和国药典 2015 年版对微生物限度检查方 法改变 其产品的微生物检验方法和培养基发生改变 可能影响检验结果的准确性 为确保检测方法的准确性及适应性 测定方法的可靠性进行验证 根据样品特性制定 检验方法和检验条件 按制定的方法进行试验 根据验证结果判断是否符合验证标准 2 2 验证依据 验证依据 中华人民共和国药典 2015 版 四部通则 1105 非无菌产品微生物限度 检查 微生物计数法 1106 非无菌产品微生物限度检查 控制菌检查法 1107 非无菌 药品微生物限度标准 3 3 验证目的 验证目的 建立该产品的微生物限度检查方法 并对其有效性进行评价 确保试验方法的完 整性 保证检验结果的可靠性 4 4 验证小组成员及职责 验证小组成员及职责 5 5 主要验证用仪器仪表的校验 主要验证用仪器仪表的校验 仪器名称规格型号检定情况检定部门 立式压力蒸汽灭菌器 生化培养箱 超净工作台 结果 确认人 日期 人 员姓 名职 位职责 组 长 质量部 经理 质量负责人负责验证报告的审核 批准 副组长 质量部 QC 主任 1 负责对确认记录 数据进行复核 确认报告的总结 2 负责对验证及检验记录 数据 结果进行分析和汇 总 成 员检验人员 1 负责验证报告的起草 2 负责检验数据的收集 记录的填写 微生物限度方法适用性试验报告第 4 页 共 11 页 6 6 验证用菌种及培养基 验证用菌种及培养基 菌种名称 编号 批号 来 源购进日期传代日期 传代 次数 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 培养基 缓冲液名称批号配制批号有效期至 胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 麦康凯液体培养基 麦康凯琼脂培养基 pH7 0 无菌氯化钠 蛋白 胨缓冲液 复核人日 期 微生物限度方法适用性试验报告第 5 页 共 11 页 微生物限度方法适用性试验报告第 6 页 共 11 页 7 7 试验菌悬液制备 试验菌悬液制备 7 1 需氧菌总数计数方法适用性试验 霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验菌株培 养 接种金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基上 于 30 35 培养 3 天 接种白色念珠菌 黑曲霉于胰酪大豆胨琼脂培养基上 于 30 35 培养 5 天 用于需氧菌总数计数方法适用性试验 接种白色念珠菌 黑曲霉于沙氏葡萄糖琼脂培养基上 于 20 25 培养 5 天 用于 霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验 取金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌的新鲜培养物 用 pH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液 取黑曲霉的新鲜培养物加 人 3 5ml 含 0 05 m l m l 聚山梨酯 8 0 的 pH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液将孢子 洗脱 然后 采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内 用含 0 05 ml ml 聚山梨 酯 80 的 pH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液 菌液制备后若在室温下放置 应在 2 小时内使用 若保存在 2 8 可在 24 小时 内使用 黑曲霉孢子悬液可保存在 2 8 在验证过的贮存期内使用 7 2 大肠埃希菌检查方法适用性实验菌株培养 将大肠埃细菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基上 30 35 培养 18 24 小时 取培养 物适量 用 pH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液 菌液制备后若在室温下放置 应在 2 小时内使用 若保存在 2 8 可在 24 小时 内使用 8 8 供试液的制备 供试液的制备 取供试品 10g 加 pH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液至 100ml 混匀 制成 1 10 的供试液 8 1 需氧菌总数 霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验 8 1 1 试验组 取上述 1 10 供试液 1ml 和不大于 100cfu 试验菌 金黄色葡萄球菌 铜 绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 分别注入无菌平皿中 立即倾注 胰酪大豆胨琼脂培养基 每株试验菌平行制备 2 个平皿 按平皿法测定其菌数 取上述 1 10 供试液 1ml 和不大于 100cfu 试验菌 白色念珠菌 黑曲霉 分别注 入无菌平皿中 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 每株试验菌平行制备 2 个平皿 按平 皿法测定其菌数 微生物限度方法适用性试验报告第 7 页 共 11 页 胰酪大豆胨琼脂培养基用于需氧菌总数计数 沙氏葡萄糖琼脂培养基用于霉菌和酵 母菌总数计数 8 1 2 供试品对照组 取规定量供试液 按平皿法测定供试品本底菌数 8 1 3 菌液对照组 测定所加的菌液数 8 1 4 阴性对照组 取试验用的稀释液 1ml 置无菌平皿中 注入培养基 凝固 倒置 培养 每种计数用的培养基各制备 2 个平板 均不得有菌生长 8 1 5 培养 需氧菌总数计数平板倒置于 30 35 培养箱中培养 3 天 霉菌 酵母菌 总数计数平板倒置于 20 25 培养箱中培养 5 天 8 1 6 回收率计算 100 数菌液对照组的平均菌落 数供试品对照组平均菌落试验组平均菌落数 试验组的回收率 8 1 7 结果判断 试验组的菌回收率 试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌 落数的值占菌液对照组的平均落数的百分率 应在 0 5 2 范围内 8 2 控制菌检验方法验证 8 2 1 大肠埃希菌 8 2 1 1 试验组 取 1 10 的供试液 10ml 和不大于 100cfu 的大肠埃希菌菌液 1ml 接 种至 100ml 胰酪大豆胨液体培养基中 混匀 30 35 培养 18 小时 8 2 1 2 供试品对照组 取 1 10 的供试液 10ml 接种至 100ml 胰酪大豆胨液体培养基 中 混匀 30 35 培养 18 小时 8 2 1 3 阳性对照组 取不大于 100cfu 的大肠埃希菌菌液 1ml 接种至 100ml 胰酪大 豆胨液体培养基中 混匀 30 35 培养 18 小时 8 2 1 4 阴性对照组 取试验用的稀释液 10ml 接种至 100ml 胰酪大豆胨液体培养基 中 混匀 30 35 培养 18 小时 取上述培养物 1ml 接种 100ml 麦康凯液体培养基中 42 44 培养 24 小时 取麦 康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上 30 35 培养 18 小时 若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长 应进行分离 纯化适宜的鉴定试验 确 证是否为大肠埃希菌 若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长 或虽有菌落生长但 鉴定结果为阴性 判供试品未检出大肠埃希菌 8 2 1 6 结果判断 在麦康凯琼脂培养基平板上 阴性对照组与供试品对照组应无菌生 长 其他各试验组应有菌落生长 并且经鉴定 显 MUG 与靛基质阳性 微生物限度方法适用性试验报告第 8 页 共 11 页 XX 制药有限公司 第 9 页 共 11 页 9 9 需氧菌总数计数方法适用性试验记录 需氧菌总数计数方法适用性试验记录 试验组 cfu 供试品对照组 cfu 菌液组 cfu 菌种产品批号 皿 1皿 2平均皿 1皿 2平均皿 1皿 2平均 阴性对照 组 cfu 回收率 铜绿假 单胞菌 金黄色 葡萄球 菌 枯草芽 孢杆菌 白色念 珠菌 黑曲霉 结论 检验人日期 微生物限度方法适用性试验报告第 10 页 共 11 页 复核人日期 1010 霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验记录 霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验记录 试验组 cfu 供试品对照组 cfu 菌液组 cfu 菌种产品批号 皿 1皿 2平均皿 1皿 2平均皿 1皿 2平均 阴性对照 组 cfu 回收率 白色念 珠菌 黑曲霉 结论 检验人日期 复核人日期 XX 制药有限公司 第 11 页 共 11 页 1111 大肠埃希菌检查方法适用性试验记录 大肠埃希菌检查方法适用性试验记录 备注 为有菌生长或呈阳性 为无菌落生长或呈阴性 1212 结论 结论 本品按 中国药典 2015 年版四部通则 1105 非无菌产品微生物 限度检查 微生物计数法 进行需氧气菌 霉菌和酵母菌总数计数验证 结果表明 用平皿法检查本品的需氧气菌 霉菌和酵母菌 按 1106 非