第七章细菌感染的检测方法与防治原则

第七章 细菌感染的检测方法与防治原则 免疫病原教研室 靖吉芳,教学大纲,掌握内容标本采集原则人工免疫的分类及常用生物制剂 熟悉内容抗细菌感染免疫的特点了解内容细菌感染诊断的常用方法第一、二、三代疫苗的优缺点,第一节 细菌感染的实验室诊断,细菌学诊断检测病原菌及其抗原、代谢产物或其核酸以达到诊断目的。血清学诊断通过检测患者血清中的特异性抗体达到诊断目的。,一、临床标本的采集及运送原则,标本的采集与运送：早期、无菌、因病而异、双份血清、快、标记,二、细菌的检测 直接涂片镜检(痰/粪便/拭子等)标本 分离培养可疑菌落 增菌(血液/脑脊液等),涂片镜检 生化反应 血清学鉴定 药敏试验 动物试验,分离培养,根据营养/生长条件/菌落特征初步鉴别细菌,涂片镜检(动力/形态/大小/排列方式/ 染色特性/特殊结构),生化试验(根据酶和代谢产物鉴别细菌),动物实验(检测细菌毒力),药敏试验(指导临床用药),病原菌抗原的检测酶免疫技术协同凝集试验免疫荧光技术对流免疫电泳免疫印记技术,协同凝集实验,免疫荧光技术,病原菌核酸的检测核酸杂交技术PCR技术基因芯片技术其他检测法气相色谱法呼气试验,三、血清学诊断,用已知的细菌或其特异性抗原去检测患者体液中有无相应抗体以及效价的动态变化,作为某些传染病的辅助诊断主要适用于抗原性较强的病原和病程较长的传染病的诊断因一般采取病人血清进行试验，故称血清学诊断.,要求：双份血清判断：后期比早期效价高4倍以上方法直接凝集实验补体结合实验中和试验乳胶凝集实验ELISA酶联免疫吸附试验,酶联免疫吸附试验,第二节 细菌感染的特异性预防,特异性防治是给机体注射或服用病原微生物抗原或特异性抗体，以达到预防和治疗疾病的目的,这种方法称为人工免疫,包括人工主动免疫和人工被动免疫.,一、人工主动免疫 概念：将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，从而对相应病原体感染产生特异性预防作用的措施。,（一）疫苗1 死疫苗：已死,多次接种,剂量 大,副反应明显 2 活疫苗（减毒活疫苗）：,（一）疫苗2 活疫苗（减毒活疫苗）：活,无毒或弱毒,接种一次,剂量小,副作用小,免疫力持久.严防回复毒力,活疫苗与死疫苗的比较 活疫苗 死疫苗 接种次数 1次 2-3次 接种量 小 较大 接种反应 轻 重 免疫效果 较好,维持1-5年 差,维持0.5-1年 毒力回升 有可能 不可能 安全性 有潜在危险性 安全性好 疫苗稳定性 相对不稳定 相对稳定 保存 不易保存 易保存,3 亚单位疫苗:利用保护性抗原,不含核 酸,无毒性、可避免回复突变。,（一）疫苗,4 基因工程疫苗:如把HBsAg基因插入酵母细胞中，成功制备乙型肝炎疫苗。 优点：安全、经济、可批量生产 缺点：技术要求高,（一）疫苗,5 重组载体疫苗:将编码某一抗原的基 因转入减毒的病毒或细菌而制成的疫 苗。痘苗病毒为常用载体。为活疫苗 的一种特殊形式。,（一）疫苗,6 核酸疫苗（DNA疫苗） 是将编码保护性抗原的基因重组到真核表达载体上，然后将重组的质粒DAN直接注射入宿主体内，外源基因在体内所表达的抗原能刺激机体产生免疫应答。 优点：免疫效果好、可同时诱导体液和细胞免疫、免疫应答持久、制备简单、成本低廉、可联合免疫。 缺点：安全？,（一）疫苗,（二）类毒素（toxoid） 类毒素是外毒素经0.3-0.4%甲醛处理后,失去毒性仍保持抗原性的生物制品.如白喉类毒素、破伤风类毒素等,还可与死疫苗一起制成联合疫苗,如DPT,二、人工被动免疫概念:输入含有特异性抗体免疫血清、纯化免疫球蛋白或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得免疫力的过程，称人工被动免疫.可用于紧急预防和治疗。,抗毒素-动物血清中提取的免疫球蛋白,丙种球蛋白-人类免疫球蛋白,其他免疫制剂 干扰素-主要为INF-,通过产生炎症反应和活化M增强机体对胞内寄生菌的抵抗能力 IL-2-能刺激T细胞增殖,增强细胞免疫功能 集落刺激因子、LAK细胞等 这些免疫制剂在抗菌免疫中应用不多，主要试用于一些病毒性疾病和肿瘤,人工自动免疫和人工被动免疫的比较 区别要点 主动免疫 被动免疫 免疫物质 抗原 抗体或CK接种次数 1-3次 1次免疫出现时间 慢,2-4周 快,立即免疫持续时间 长,数月-数年 短,2-3周主要用途 预防 治疗或 紧急预防,C7 课堂检测题(20s/题，同桌分奇偶数答题）,1属于人工自动免疫的生物制品（）A 白喉抗毒素B 破伤风类毒素C 细胞因子D 胸腺素E 白细胞介素,2下列哪种生物制品用于人工被动免疫( )A 卡介苗B 麻疹减毒活疫苗C 乙肝疫苗 D 胎盘丙种球蛋白E 类毒素,33,3一个从未进行过破伤风免疫接种的人目前有可能感染这种细菌,医生决定对他进行被动免疫,应该注射（）A 破伤风类毒素B 破伤风抗毒素C 破伤风外毒素D 混合的人丙种球蛋白E 血液,4下列哪种生物制品对人既是抗原又是抗体（）A 类毒素B 卡介苗(BCG)C 动物免疫血清D 转移因子E 活疫苗,34,5下列哪项属于人工主动免疫 ( )A注射丙种球蛋白预防麻疹B接种卡介苗预防结核C注射免疫核糖核酸治疗恶性肿瘤D注射CK治疗肿瘤E骨髓移植治疗白血病,6、细菌感染的血清学诊断中，通常采取双份血清检测，要确认现症感染，需要恢复期或一周后血清抗体效价比早期A 升高4倍以上（含4倍）B 升高2倍以上C 升高4倍以上D 降低4倍以上（含4倍） E 降低2倍以上,35,7.类毒素刺激机体后产生的特异性免疫应答物质是（）A 干扰素B 抗毒素C 补体D 乙型溶素E 细胞因子,15细菌标本的采集与送检错误做法是（2）A 根据病原菌不同而采集不同标本 B 标本最好在使用抗生素之前采集C 尽量采取病变明显部位的材料D 用于分离的标本均需冷藏快送E 采局部标本时应先用消毒剂，避免杂菌污染,36,A 通过胎盘或初乳 B 接种抗毒素C 接种疫苗D 患传染病后E 注射丙种球蛋白,37,12.自然自动免疫获得方式（ ）14人工自动免疫获得方式（ ）,11.人工被动免疫获得方式（多）13.自然被动免疫获得方式（ ）,第三节 细菌感染的治疗原则何时用？怎样用？,WHO的统计结果表明，中国有1/2的儿 童一旦出现咳嗽、流鼻涕的症状，就 使用抗生素进行治疗。对全国83万名013岁儿童支气管 哮喘患病情况调查显示，94%以上的 哮喘儿童应用抗菌药物治疗，多数为 盲用或滥用。,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种资料,我国有50%的人生病时使用抗生素，但事实上只有25%的患病者需要使用抗生素。我国门诊感冒患者约有75应用抗生素；外科手术应用抗生素的情况则高达95；我国住院患者的抗生素应用率为79，这一数字远高于英国的22和各国平均水平30。,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种资料,不送检验标本，没有药敏试验，长期“经 验用药”，你有足够的经验吗？病毒感染者常规使用：预防？“保险”？ 无知？其他？忽视毒副反应的滥用：肝肾毒性、药物热首选三代、四代头孢，是对还是错？首选碳青霉烯类所谓“一次搞定”， 是对还是错？,滥用抗菌药物表现种种表现,无菌手术的滥用: 术前、术中、术后各个环节的滥用：剂 量、时间、预防？无依据地滥用：如不明原因发热、病毒 感染（谈SARS治疗）、局部疼痛无指征地联合用药：保险？经验？抗感染治疗中忽视支持治疗抗结核药物单用，或疗程不足,滥用抗菌药物表现种种表现,不恰当联用:如头孢菌素与大环内酯类药 物联用（有争议？）错误联用:氧哌嗪青霉素派拉西林合用 16天（同一药物，只是名字、厂家不同）无知用药：庆大霉素与奈替米星合用，同 属氨基糖苷类药合用，加重了耳肾毒性胡乱用药：颈部无菌手术预防性使用头孢 他定8g/d，10天，出院后带红霉素,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种举例,该患者药物使用剂量小于正常健康人耐受临床试验最大剂量（2.4g），排除中毒；患者过去曾经使用过林可霉素2.4g，静脉滴注,未见异常，排除单纯过敏反应所致。 通过标准化输液泵给药试验发现，该药的可能致死输注速度为20.04mgmin，而该患者的给药速度是致死速度的3倍！提示患者死因与滴速过快有密切关系。,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种举例,1女性患者，静脉滴注林可霉素 1.8g/250ml，0.5 小时内滴注完毕，滴注结束时猝死，其滴速是每分钟59.76mg。,林可霉素具有神经肌肉接头阻滞作用,与麻醉药、肌松药联合应用时应该减量,否则可因协同作用而易引起呼吸抑制 , 甚至致死。而本例一次使用林可霉素1.2g，剂量偏大,应该0.6g间隔 812小时重复使用。提示,患者的死亡可能与林可霉素剂量过大和林可霉素与麻醉药、肌松药不良相互作用有关。,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种举例,患者因急性阑尾炎术后静脉滴注林可霉素1.2g/500m1预防感染，滴注完毕后，呼吸衰竭、休克死亡。,庆大霉素的肾毒性明显，屡有报道一般用该药不可超过14天！用药中要进行肾功能监测必要时应作血药浓度监测,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种举例,1男性患者，44岁，因急性胰腺炎入院，给予庆大霉素24万单位，每日一次，静脉滴注，共29天，最终因急性肾功能衰竭治疗无效死亡。,罗氏芬可以肌肉注射，也可以静脉推注，常规推注剂 量每次2g，本例计量过大，推注速度？多数麻醉药能够导致组织胺释放，故诱导麻醉后使用 抗生素经常出现皮疹本例是否与过敏反应有关上海某医院一患者因对头孢类抗生素过敏死亡的病例我院还出现术中胸腔用罗氏芬灌洗出现休克的案例,w w w . m e d i n f e c t . c o m,滥用抗菌药物表现种种举例,1男性患者，55岁，因脑胶质瘤拟行手术，诱导麻醉后给予罗氏芬4g静脉推注，数分钟血压下降、心律减慢，至心跳骤停。经胸外按压心跳恢复。手术被迫中止。该