微生物与免疫基础实训[1]

实训一 显微镜的使用与细菌形态的观察实验目的：1、了解普通光学显微镜的构造、原理、维护及保养方法。2、学会掌握普通光学显微镜观察生物标本片。3、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。4、掌握油镜的使用方法和无菌操作技术。5、了解细菌的个体形态和菌落培养特征。,基本原理：,复式光学显微镜子构造示意图,实验材料： 1、菌种 枯草芽孢杆菌1218h营养琼脂斜面培养物，藤黄微球菌（Micrococcus luteus）约24h营养琼脂斜面培养物。2、染色剂 吕氏碱性美蓝染液（或草酸铵结晶紫染液），齐氏石炭酸复红染液。3、仪器或其他用具 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，无菌水等。,方法与步骤： 细菌的简单染色法 : 1、涂片; 4、染色 ; 2、干燥 ; 5、水洗 ; 3、固定 ; 6、干燥 ; 7、镜检 ;,实训二 细菌的革兰氏染色法目的要求：1、学习并掌握革兰氏染色法的操作技术。2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性,基本原理： 革兰氏染色原理： 第一步：结晶紫使菌体着上紫色; 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内; 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。,G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 G菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。,实验材料：1、菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂余面培养物，金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂余面培养物，蜡样芽孢杆菌（B.cereus）1220h 营养琼脂斜面培养物。2、染色剂 草酸铵结晶紫染色液，路哥氏碘液，番红染色液，95%乙醇。3、仪器或其他用具 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，无菌水等。,革兰氏染色操作过程,方法与步骤： 1、制片 2、初染 3、媒染 4、脱色 5、复染 6、镜检,实训三 常用培养基的制备实验目的：1、了解天然培养基、半合成培养基和合成培养基的配制原理。2、掌握肉汤培养基、高氏号培养基和麦芽汁培养基的配制方法。,实验内容： （一）器皿的准备 1、玻璃器皿的清洗 （1）新玻璃器皿 （2）用过的玻璃器皿 2、器皿的包扎,试管、三角瓶棉塞制作方法,实训四 细菌的接种及人工培养法实验目的：（1）掌握无菌操作的概念和基本操作技术。（2）了解细菌常用培养基以及培养条件。（3）了解平板划线分离菌种的原理。（4）掌握平板划线分离菌种的操作要点。,基本原理：1、常用的微生物接种、分离工具及制备（1）接种针、接种环和接种钩 ；（2）涂布器 ；（3）其它接种工具,2、微生物的接种方法：斜面接种（点接、中央划线 、稀波状蜿蜒划线法 、密波状蜿蜒划线法 、分段划线 、纵向划线 、挖块接种法 ） ；液体接种法（由斜面培养基接入液体培养基 、由液体培养基接种到液体培养基 ） ；穿刺接种法（垂直法、水平法 ） ；平板接种法 （点接、划线接种、涂布接种） ；,斜面接种操作程序,1.烧环 2.拔塞 3.接种 4.加塞 5.灭菌,穿刺接种的两种操作法,倒平板的方法,A.皿架法 B.手持法,划线分离法,涂布分离法,实训五 放线菌形态观察 实验目的：（1）掌握放线菌的一般接种方法。（2