除草剂阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和总核异常的影响.doc

此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除除草剂阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和总核异常的影响孟顺龙，胡庚东，瞿建宏，吴伟，陈家长*中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/中国水产科学研究院内陆渔业生态环境和资源重点开放实验室，江苏 无锡 214081摘要：采用静态水质接触染毒法将鲫鱼（Carassius auratus）分别暴露于质量浓度为0、0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 mgL-1的阿特拉津溶液中，分别在染毒后的第3、6、10、14、19和24 d对所有染毒组鲫鱼进行尾静脉采血；研究在不同作用时间和不同质量浓度下，阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和总核异常的影响。结果表明：阿特拉津能使鲫鱼外周血红细胞微核率和总核异常率显著升高，并在一定条件下存在剂量-效应和时间-效应关系。短时间（6 d）暴露时，阿特拉津与外周血红细胞微核率之间在010.0 mgL-1范围内存在剂量-效应关系；长时间（10 d）暴露时，仅在0.15.0 mgL-1范围内存在剂量-效应关系。而阿特拉津与外周血红细胞总核异常率之间则在所有测定时间下均存在剂量-效应关系。同时，时间-效应的研究结果表明，在所有质量浓度下，鲫鱼外周血红细胞微核率和总核异常率均随着污染胁迫时间的延长而先升高后降低，且外周血红细胞微核率和总核异常率达到峰值所需时间表现为低质量浓度的滞后于高质量浓度的。试验显示，除草剂阿特拉津对鲫鱼具有潜在的致突变作用，其能对鲫鱼产生较强的遗传损伤，且遗传损伤程度随阿特拉津质量浓度的增加或污染胁迫时间的延长而增强。关键词：阿特拉津；鲫鱼（Carassius auratus）；亚急性；微核；核异常中图分类号：X171.5 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2008）01-0178-06此文档仅供学习与交流微核试验由Heddle1和Schmid2于20世纪70年代分别独立创建，是检测污染物对机体细胞遗传损伤程度的一个重要指标和检测化学物质毒性的一种常规方法3。微核试验与染色体畸变实验有良好的相关性4。由于微核检测具有方法简便、观察容易、结果可靠等优点，目前一些国家和地区已将其规定为新药、化妆品、食品添加剂等物质的毒理安全性评价的必做实验5-7。阿特拉津又名莠去津，化学名为2-氯-4-乙胺基-6-异丙胺基-1，3，5-三嗪,分子式为C8H14ClN5，是我国目前广泛使用的一种旱地除草剂，其能通过地表径流、淋溶、干/湿沉降等方式进入水体，从而对水生生态环境和人类饮用水源造成潜在的污染。近年来，因其使用量大、残留期长、环境水体中检出率高8和具有内分泌干扰作用等而受到广泛的关注9。但目前有关阿特拉津对生物毒理效应的研究主要集中在哺乳动物的鼠类10和两栖动物的蛙类11，且结论不一。有关阿特拉津对水生生物的毒理效应，特别是对水生生物遗传毒性的研究则鲜见报道。为此，本试验以鲫鱼（Carassius auratus）为供试生物，研究了阿特拉津对其外周血红细胞微核和总核异常的影响。旨在为有关部门制订该除草剂的合理使用规章提供一定参考；为分析评价阿特拉津对鱼类的生态安全性提供相应的毒理学资料；同时也为我国淡水渔业资源和水生态系统的保护提供一些科学依据。1 材料与方法1.1 试验鱼类 试验鱼类为鲫鱼（Carassius auratus），取自中国水产科学研究院淡水渔业研究中心实验场，体长为14.280.78 cm，体质量为65.994.75 g (n=24)。试验前将鲫鱼在实验室条件下驯养两周，每天定时投饵一次，并用电磁式空气压缩机进行充氧。光暗比为14 h10 h。驯养期间没有出现自然死鱼现象。选择活动性强的健康鲫鱼进行试验。1.2 试验用水 试验用水为曝气一周的去氯自来水，水温201 ，溶解氧6.57.0 mg/L，pH 7.07.5，水质指标符合渔业水质标准（GB11607-89）。1.3 仪器和试剂 注射器；针头；载玻片；染缸等。120 UmL-1肝素钠生理盐水液；pH为7.4的磷酸盐缓冲液；M-G染液；1:1 M-G磷酸盐缓冲液（即1体积M-G染液与1体积磷酸盐缓冲液混合而成）；体积分数为10%的Giemsa液（将Giemsa原液用pH=7.4的磷酸盐缓冲液稀释而成）；甲醇（分析纯）；w=48%阿特拉津可湿性粉剂（由常州农林药业有限公司生产）。1.4 染毒 采用静态水质接触染毒法对鲫鱼染毒。先根据文献12进行阿特拉津对鲫鱼的96 h急性毒性试验，得到96 h LC50值为105.94 mgL-1。为保证试验期间药物对鱼类的安全性，阿特拉津的试验质量浓度范围设在1/10的96 h LC50之内，具体质量浓度为：0、0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 mgL-1。每个质量浓度设一个平行组。在体积为250 L的水族箱中分别配制上述各质量浓度的试验液150 L，每个水族箱中随机放入鲫鱼50尾。试验期间每天换水50%，并补足受试物至原有质量浓度，每2天定时投饵一次。其余条件与驯养期间相同。分别在染毒后的第3、6、10、14、19和24 天对所有质量浓度组鲫鱼进行尾静脉采血，观察不同作用时间和不同质量浓度下阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和总核异常的影响。1.5 采血制片及镜检计数 取样时从每组2个平行样中各随机抽取试验鱼3条，共6条。先用纱布擦干鱼体表面后，再用注射器（为防止血液凝固，吸取少量质量浓度为120 UmL-1的肝素钠液润湿针头及注射器内壁）从尾静脉抽取少量血液，滴入干净的载玻片上，按常规方法制成血涂片并晾干。之后，用甲醇固定15 min；晾干后转移到盛有体积分数为10%的Giemsa染液的染缸中，染色15 min；取出后立即用pH=7.4的磷酸缓冲液冲洗，晾干后即可用于镜检计数。每尾鱼制片3张，分别选择其中最好的一片用于镜检。将6次镜检结果的平均值作为最终结果。图2 不同质量浓度、不同作用时间下阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞总核异常率的影响Fig. 2 Effects of atrazine on total frequency of nucleus anomalies of erythrocyte in crucian with different exposure concentrations and effect time注：图2中的“*”和“*”分别表示与对照组相比差异显著(p0.05)和极显著(P0.01).将血涂片置于油镜（10100）下观察、计数，每张片子计数5 000个红细胞。分别记录微核和核异常细胞数，结果以千分率（）表示。其中微核为圆形或椭圆形，直径为主核的1/51/4左右；核异常包括小核、双核、无核、核质外凸、核质内凹、核质断裂、核位置明显异常等13。计算公式如下：；Rt=Rm+Ra其中，Nc为每张片子观察的细胞数；Nm为所观察细胞中具有微核的细胞数；Na为所观察细胞中具有核异常的细胞数（不含微核细胞数）；Rm为微核细胞率；Ra为核异常细胞率；Rt为总核异常细胞率。1.6 数据处理 应用单因素方差分析和LSD法对数据进行多重比较（只作染毒组与对照组之间的比较）。采用回归方法分析阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和核异常的影响的剂量-效应和时间-效应关系，以相关系数（R）表示相关程度，并用 t检验法进行相关显著性检验。P0.05为差异（或相关）显著，P0.01为差异（或相关）极显著。2 结果与分析在不同作用时间和不同质量浓度下，阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和总核异常影响的试验结果分别如图1和图2所示。图1 不同质量浓度、不同作用时间下阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核率的影响Fig. 1 Effects of atrazine on micronucleus frequency of erythrocyte in crucian with different exposure concentrations and effect time注：图1中的“*”和“*”分别表示与对照组相比差异显著(p0.05)和极显著(P0.05）。但经阿特拉津作用后，红细胞微核率和总核异常率均开始升高，并在一定条件下达到显著或极显著水平。这充分说明用微核试验来检测阿特拉津对鲫鱼的遗传损伤是可行的。2.1 阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核的影响如图1所示，从鲫鱼外周血红细胞微核率的变化来看，当作用时间较短（6 d）时，在本试验所设质量浓度范围内，随着染毒质量浓度的增加鲫鱼外周血红细胞微核率逐渐上升，说明阿特拉津质量浓度和红细胞微核率之间存在着剂量-效应关系。以阿特拉津质量浓度为横坐标，红细胞微核率的上升率为纵坐标，分别对第3和第6天的剂量-效应关系做线性回归分析，分别得回归方程：y=55.173x+38.825（R=0.989）和y=86.493x+161.12（R=0.966），经t检验，两回归方程式的相关系数均达到极显著水平（P0.01）。当作用时间较长（10 d）时，红细胞微核率仅在0.15.0 mgL-1范围内随着阿特拉津质量浓度的升高而增加；当阿特拉津质量浓度大于5.0 mgL-1时，红细胞微核率反而下降。以阿特拉津质量浓度为横坐标，红细胞微核率的上升率为纵坐标，在0.15.0 mgL-1阿特拉津质量浓度范围内分别对第10、14、19和24天的剂量-效应关系做回归分析，分别得回归方程：y=216.240Lnx+564.23（R=0.960）、y=111.790Lnx+499.85（R=0.996）、y=77.945Lnx+308.83（R=0.996）和y=93.235Lnx+293.60（R=0.978）；经t检验，第10天和第24天的剂量-效应关系均达到显著水平（P0.05），第14天和第19天的均达到极显著水平（P0.01）。从阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核率影响的时间-效应来看，各染毒质量浓度下的红细胞微核率均随着阿特拉津胁迫时间的延长而表现出先升高后降低的变化趋势。但染毒质量浓度不同时，红细胞微核率达到峰值的时间有所差异；具体表现为：低质量浓度（0.10.5 mgL-1）条件下达到峰值所需时间长，为14 d；中间质量浓度（1.05.0 mgL-1）时达到峰值所需时间较短，为10 d；高质量浓度（10.0 mgL-1）时达到峰值所需时间最短，仅为6 d。以阿特拉津作用时间为横坐标，红细胞微核率的上升率为纵坐标，分别对0.1 mgL-1和0.5 mgL-1质量浓度组在314 d范围内的时间-效应关系做线性回归分析，分别得回归方程：y=22.696x-72.174 （R=0.994）和y=30.692x+32.428 （R=0.997），经t检验，两回归方程式的相关系数均达到极显著水平（P0.01）；以阿特拉津作用时间为横坐标，红细胞微核率的上升率为纵坐标，分别对1.0 mgL-1和5.0 mgL-1质量浓度组在310 d范围内的时间-效应关系做线性回归分析，分别得回归方程：y=62.871x-27.576（R=0.997）和y=90.802x+73.695（R=0.988），经t检验，1.0 mgL-1质量浓度组回归方程的相关系数达到显著水平（P0.05）。2.2 阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞总核异常的影响如图2所示，阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞总核异常率的影响与对外周血红细胞微核率的影响在变化趋势上很相似，仅存在些微不同。从剂量效应方面来看，在所有作用时间下，鲫鱼外周血红细胞总核异常率都随着阿特拉津质量浓度的增加而升高；以阿特拉津质量浓度为横坐标，红细胞总核异常率的上升率为纵坐标，分别对第3、6、10、14、19和24天的剂量-效应关系做回归分析，分别得：y=58.892x+73.669（R=0.992）、y=84.755x+160.66（R=0.969）y=231.83Lnx+586.01（R=0.976）y=121.00Lnx+459.96（R=0.975）y=72.944Lnx+318.04（R=0.996）和y=89.261Lnx+295.19（R=0.978），经t检验，相关系数均达到极显著水平（P0.01）。从时间效应方面来看，阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞总核异常率的影响与对外周血红细胞微核率的影响是基本一致的，仅在高质量浓度组（10.0 mgL-1）的第10d有所不同，此时的外周血红细胞微核率已开始回落，而总核异常率仍然处于上升状态。以阿特拉津作用时间为横坐标，红细胞总核异常率的上升率为纵坐标，对0.1 mgL-1和0.5 mgL-1质量浓度组在314 d范围内的时间-效应关系分别做线性回归分析，分别得回归方程：y=17.8x-30.182（R=0.988）和y=21.864x+41.377（R=0.998），经t检验，两回归方程式的相关系数分别达到显著（P0.05）和极显著水平（P0.01）；以阿特拉津作用时间为横坐标，红细胞总核异常率的上升率为纵坐标，对1 mgL-1、5 mgL-1和5 mgL-1质量浓度组在3-10 d范围内的时间-效应关系分别做线性回归分析，分别得回归方程：y=58.494x+14.295（R=0.997）、y=86.243x+105.08（R=0.9996）和y=70.435x+487.79（R=0.969），经t检验，1 mgL-1和5 mgL-1质量浓度组的相关系数均达到显著水平（P0.05）。3 讨论微核是生物在环境中受到辐射或其他诱变因子作用时，细胞间期细胞核受到损伤而产生的小核。微核来源于染色体断裂的片段或整条染色体（组）。其形成机理一般认为是具有遗传毒性的物质作用于染色体，导致染色体断裂，或作用于纺锤体，导致纺锤体功能不全；在细胞分裂时，断片或整条染色体（组）移动滞后，从而形成大小不同的微核。普遍认为，小微核是由染色体断裂剂打断染色体产生的无着丝粒片段形成的；大微核是由纺锤体毒剂打断纺锤丝，造成一条或一组染色体滞后而形成的14-16。在本次试验中既观察到了小微核，又观察到了大微核，可见阿特拉津具有染色体断裂剂和纺锤体毒剂的双重作用。关于微核形成的其他学说，我国学者薛开先等17,18采用放射自显影、间期细胞及各周期微核定量分析等手段，第一次提出了间期细胞可以以核芽突方式形成微核的学说。楼允东等19认为主核外突形成微核是可能的，后来，钱晓薇20也验证了这一现象。从阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核和总核异常影响的时间效应来看，各质量浓度条件下的红细胞微核率和总核异常率均随着阿特拉津作用时间的延长而表现出先升高后降低的变化趋势。出现这种现象的原因可能与阿特拉津在鱼体中富集量的变化有关。本试验在观察微核及核异常的同时还对阿特拉津在鲫鱼不同组织器官中的富集情况进行了同步研究（另文发表），发现阿特拉津在鱼体肝脏、肾脏和肌肉中的富集量是随着暴露时间的延长而先升高后降低的；且微核率及总核异常率与阿特拉津在鱼体中的富集量有很好的正相关性；微核率及核异常率达到峰值的时间恰好是富集量在肾脏或肝脏中达到峰值的时间。肾脏是鱼类的主要造血器官，在阿特拉津的污染胁迫下，导致其正常的细胞生理行为紊乱，器官功能受阻，从而影响血细胞的正常产生、贮存等一系列过程，使之产生畸变而形成微核和异常核，随血液循环流向外周，最终使外周血红细胞微核率及总核异常率上升。且肾脏中阿特拉津积累量越大，则遗传损伤越强，从而在不显著影响血细胞正常分裂速度的情况下，外周血红细胞微核率和总核异常率也就越高。随着污染胁迫时间的继续延长，阿特拉津在肾脏中的残留量开始下降，细胞所受遗传损伤也开始减弱，从而外周血红细胞微核率和总核异常率也随之降低。张曙光研究认为，重金属进入鱼体后当其作用的靶组织和其在鱼体内的积累组织是同一组织时，微核率就与残留量存在相关关系。动物肝脏和肾脏是阿特拉津作用的靶组织21，同时本研究发现鲫鱼外周血红细胞微核率与阿特拉津在肝脏和肾脏中的残留量具有显著的相关性，说明阿特拉津对微核率的影响与重金属一样，也具有上述性质。从阿特拉津对鲫鱼外周血红细胞微核影响的质量浓度效应来看，在短期（6 d）内，外周血红细胞微核率随着染毒质量浓度的增加而上升，这说明污染物质量浓度越高遗传损伤越强，从而外周血红细胞微核率也就越高。但当污染胁迫时间较长（10 d）时，高质量浓度组（10.0 mgL-1）的鲫鱼外周血红细胞微核率反而出现了下降趋势。这可能是因为高质量浓度污染物的长时间胁迫会抑制、减缓、甚至终止细胞的正常分裂活动，损坏红细胞染色体和阻断DNA复制22。由于微核的形成是以细胞分裂为条件的，没有细胞的分裂活动，诱变剂就没有作用于DNA等遗传物质的机会，即使很强的诱变剂也无法通过微核等指标来检测23。因而长时间作用时，高质量浓度组的鲫鱼外周血红细胞微核率反而出现了下降现象。本研究显示，经阿特拉津作用后，鲫鱼外周血红细胞微核率和总核异常率均显著升高，并在一定条件下存在剂量-效应和时间-效应关系，说明阿特拉津对鱼类能够产生较强的遗传损伤，且损伤程度随染毒质量浓度的增加或污染胁迫时间的延长而增强。试验显示除草剂阿特拉津对水生生物具有潜在的致突变作用。但有报道认为染色体突变能够被DNA修复酶修复24。因此，有关阿特拉津对鱼类遗传毒性的研究尚需深入。同时，比较本试验评判污染物对鱼类遗传物质损伤所采用的两种指标，可以看出，外周血红细胞微核率和总核异常率的检测结果是基本一致的；但当高质量浓度（10.0 mgL-1）阿特拉津长期（10 d）胁迫时，两者之间有所差异，在此条件下，外周血红细胞总核异常率与阿特拉津质量浓度之间仍具有剂量-效应关系，说明其在反映高质量浓度污染物长时间胁迫方面比微核率更具有优越性；同时，这也说明异常核和微核的产生机制是不完全相同的。4 结论（1）对照组鲫鱼的外周血红细胞微核率和总核异常率都比较低，且在不同作用时间下的差异都不显著；表明用该方法评价污染物对机体细胞的遗传损伤情况是可行的。（2）经阿特拉津作用后，鲫鱼外周血红细胞微核率和总核异常率显著升高，并在一定条件下存在剂量-效应和时间-效应关系，表明除草剂阿特拉津对鲫鱼具有潜在的致突变作用，能对鲫鱼产生较强的遗传损伤，且损伤程度随阿特拉津染毒质量浓度的增加或污染胁迫时间的延长而增强。参考文献：1 HEDDLE J A. A rapid in vivo test for chromosomal damage J. Mutation Research, 1973, 18(2):187-190.2 SCHMID W. The micronucleus testJ. Mutation Research, 1975, 31(1): 9-15.3 南旭阳.除草剂“草甘膦”对鲫鱼外周血红细胞微核及核异常的影响J.安徽师范大学学报：自然科学版, 2001, 24(4): 329-331.Nan Xuyang. Effects of herbicide (Glyphosate) on micronuclei and nuclear anomalies in erythrocyte in Carassius auratusJ. Journal of Anhui Normal University：Natural Science Edition, 2001, 24(4): 329-331.4 王爽,诸葛坚,余应年. 微核与微核试验在遗传毒理学中的应用J.癌变畸变突变, 2000,12(4):253-256.Wang Shuang, Zhu Gejian, Yu Yingnian. Application of micronucleus and micronucleus test in geno-toxicologyJ. Carcinogenesis, Teratogenesis and Mutagenesis, 2000, 12(4):253-256.5 SOFUNI T. Japanese guidelines for mutagenicity testing J. Environmental and Molecular Mutagenesis, 1993, 21(1):2-7.6 AULETTA A E, DEARFIELD K L, CIMINO M C. Mutagenicity test schemes and guidelines: U.S.EPA office of pollution prevention and toxics and office of pesticide programsJ. Environmental and Molecular Mutagenesis, 1993, 21(1):38-45.7 曹佳. 微核试验M. 北京:军事医学科学出版社,2000, 264-272.Cao Jia. Micronuclues Test M. Beijing:Science Publishing Company of Military Affairs Medicine,2000,264-272.8 GRAYMORE M, STAGNITTI F, ALLINSON G. Impacts of Atrazine in Aquatic Ecosystems J. Environment International, 2001, 26(7-8): 483-495.9 HOPENHAYN R C, STUMP M L, BROWNING S R. Regional assessment of atrazine exposure and incidence of breast and ovarian cancers in Kentucky J. Archives of Environmental Contamination and Toxicology, 2002, 42(1):127-136.10 张越,金焕荣,段志文,等. 阿特拉津对小鼠微核及精子畸形率的影响J. 沈阳医学院学报,2000,2(2):72-74.Zhang Yue, Jin Huanrong, Duan Zhiwen, et al. Effect of atrazine on micronuclei and sperm deformity in rat J. Journal of Shenyang Medical College, 2000, 2(2):72-74.11 苑宇哲,徐士霞,姚春生,等. 阿特拉津对弹琴蛙(Rana adenopleura)蝌蚪微核和核异常的影响J.应用与环境生物学报, 2005, 11(3): 333-336.Yuan Yuzhe, XuShixia, Yao Chunsheng, et al. Effect of atrazine on micronucleus and nucleus anomalies in erythrocytes of Rana adenpoleura tadpolesJ. Chinese Journal of Applied and Environmental Biology, 2005, 11(3):333-336.12 国家环保局水和废水监测分析方法编委会.水和废水监测分析方法M. 北京: 中国环境科学出版社, 2002：725-729.State Environmental Protection Agency of China, Standard Method for the Examination of Water and Wastewater Editorial Board. Standard Method for the Examination of Water and Wastewater M. Beijing: Environmental Science Press of China, 2002：725-729.13 耿德贵,屈艾,剂晓峰,等. 5种物质对除草剂精克草星诱发黄鳝外周血红细胞微核及核异常的抑制作用J.癌变畸变突变, 1999, 11(3): 134-139.Geng Degui, Qu Ai, Ji Xiaofeng, et al. Inhibition of five substances on micronuclei and nuclear anomalies induced by the herbicide Jing Ke Cao Xing in the peripheral blood erythrocytes of Monopterus albus J. Carcinogenesis,Teratogenesis and Mutagenesis, 1999,11(3):134-139.14 朱毅,胡小玲. 重金属对鱼类毒性效应研究进展J.水产养殖, 1998, 2: 22-23.Zhu Yi, Hu Xiaoling. Progress in toxicity effect of heavy metals on fish J. Journal of Aquaculture, 1998,2:22-23.15 王蕊芳,贺维顺,吴世芳,等. 昆明水源水和自来水水质致突变性及化学背景值: 蝌蚪红细胞微核和CHO细胞染色体畸变及SCE实验J.动物学研究, 1996,17(4):469-475.Wang Ruifang, He Weishun, Wu Shifang, et al. Mutagencity and background content chemicals of water quality of source water and tap water in Kunming . The micronucleus test of tadpole erythrocyte and chromosomal aberration and SCEs test of CHO cell J. Zoological Research, 1996, 17(4):469-475.16 贺维顺,王蕊芳. 污水和污水土地处理系统中各种水质对华西蟾蜍蝌蚪红细胞微核率的影响J. 动物学研究.1992,13(3):275-279.He Weishun, Wang Ruifang. The effect of wastewater and water treated with the sewage land disposal system on frequency of micronuclei of tadpole erythrocytes of toad, Bufo andrewsi J. Zoological Research, 1992, 13(3):275-279.17 薛开先,季国芳,孙玉洁,等. 微核形成与细胞周期关系的初步研究.人体全血辐射处理后不同放置和培养时间对微核率的影响J .遗传学报, 1986,13 (5):397-402. Xue Kaixian, Ji Guofang, Sun Yujie, et al. Preliminary studies on the relationship between micronucleus formation and cell cycle I. Effects of various store and culture intervals of irradiated human whole blood on micronucleus frequency in lymphocyte J. Acta Genetica Sinica, 1986, 13 (5):397-402.18 薛开先,孙玉洁,周平,等. 微核形成与细胞周期关系的初步研究.微核形成的放射性自显影和显微形态学研究J. 遗传学报, 1986, 13(6): 460-463.Xue Kaixian, Sun Yujie, Zhou Ping, et al. Preliminary studies on the relationship between micronucleus fonmation and cell cycle II. Studies on micronucleus formation by autoradiography and microscopy J. Acta Genetica Sinica, 1986, 13(6):460-463.19 楼允东,吴萍. 亚硝基胍对泥鳅红细胞微核及核异常的诱发J. 中国环境科学, 1996,16(4): 275-278.Lou Yundong, Wu Ping. Induction of micronuclei and nuclear anomalies in erythrocytes of loach by N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine J. China Environmental Science, 1996, 16(4):275-278.20 钱晓薇.乙酸铜对黄鳝红细胞微核及核异常的影响J.江西科学, 2004,22(5):331-333.Qian Xiaowei.The efect of Cu(CH3COO)2 on the RBC micronucleus and nuclear abnormity of Monopterus albus J. Jiangxi Science, 2004, 22(5): 331-333.21 栾新红,丁鉴峰,孙长勉,等.除草剂阿特拉津影响大鼠脏器功能的毒理学研究J.沈阳农业大学学报,2003,34(6):441-445.Luan Xinhong, Ding Jianfeng, Sun Changmian, et al. Toxicological effects of herbicide atrazine on visceral function in rats J. Journal of Shenyang Agricultural University, 2003, 34(6):441-445.22 朱 毅,张永江. 镉、铬、铜及其协同作用对鲤鱼嗜多染红细胞微核的诱发效应J.南京师大学报:自然科学版,1999,22(3):60-63.Zhu Yi, Zhang Yongjiang. Polychromatocytes micronuclei of carps (Cyprinus carpio Linn.) induced by cadmium, chrome, copper and their synergistic effect J. Journal of NanJing Normal University : Natural Science Edition, 1999,22(3):60-63.23 段昌群,王缕校.重金属对蚕豆的细胞遗传学毒理作用和对蚕豆根尖微核技术的探讨J.植物学报,I995,37(1):14-24.Duan Changqun, Wang Luxiao. Cell genetics toxic effect of heavy metals on Vicia faba and the discuss on micronucleus test in Vicia faba root tip cell J. Acta Botanica Sinica, I995,37(1):14-24.24 金焕荣,段志文,张 越,等.阿特拉津的遗传毒性研究J.工业卫生与职业病, 1999,25(6): 341-343.Jin Huanrong, Duan Zhiwen, Zhang Yue, et al. Study on the genotoxicity of atrazineJ. Industial Health and Occupational Diseases, 1999, 25(6): 341-343.Effects of herbicide atrazine on micronucleus and total nucleus anomaly of erythrocyte in Carassius auratusMeng Shunlong , Hu Gendong , Qu Jianhong，Wu Wei , Chen JiazhangKey Open Laboratory of Ecological Environment and Resources of Inland Fisheries, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuxi 214081, ChinaAbstract：Atrazine is one of the most commonly used herbicides in China and the world. Due to its long persistence, it had been present in many surface and ground waters, contaminating nontarget organisms such as fish and threatening drinking water of human beings. Groups of fish were exposed to atrazine varying in concentration, i.e. 0, 0.1, 0.5, 1.0, 5.0 and 10.0 mgL-1, respectively. The blood of crucian exposing to all the concentrations were sampled via tail vein after day 3, 6, 10, 14, 19 and 24, respectively, to research effect of atrazine on micronucleus frequency and total frequency of nucleus anomalies of erythrocyte in crucian (Carassius auratus). Results indicated that atrazine could make micronucleus frequency and total frequency of nucleus anomalies of erythrocyte in cr