白细胞分类计数（手工法）SOP.doc

xxxx医院 临床检验实验室文件编号：XXXX白细胞分类计数（手工法）版序：xxxx页码：第1 页，共5 页测定原理把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料构成的染色液染色，血片中的细胞由于内容物不同，而被染成不同的颜色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得相对比值（百分率），以观察数量形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。试剂及仪器（一）染色液 1. 瑞氏姬姆萨复合染色液 I液 取瑞氏染粉 lg、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加 2 ML丙三醇和少量甲醇(分析纯)，研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上清液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3min，共5天，以后存放一周即能使用。 液 pH6.46.8磷酸盐缓冲液 磷酸二氢钾(无水)6.64g 磷酸氢二钠(无水)2.56g 加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整 pH，加水至1000ml。 2快速染色液 I液: 磷酸二氢钾 6.64g 磷酸氢二钠 2.56g 水溶性伊红 Y 4g(或伊红 B2.5g) 蒸馏水 1000ml 石炭酸 40ml 煮沸，待冷备用。 液 亚甲蓝 4g 蒸馏水 1000m1 蒸馏水 1000m1 高锰酸钾 2.4g 煮沸，待冷备用。 xxxx医院 临床检验实验室文件编号：XXXX白细胞分类计数（手工法）版序：xxxx页码：第2 页，共5 页 330s快速单一染色液 贮存液 瑞氏染粉 2.0g 姬姆萨染粉 0.6g 天青 E 0.6g 甘油 10.0ml 聚乙烯D比咯烷酮(PVP) 20.0g (或曲拉通X-100 3ml) 甲醇 1000ml 磷酸盐缓冲液(pH6.2-6.8) 磷酸二氢钾 6.64g 磷酸氢二钠 0.26g 石炭酸 4.0ml 蒸馏水加至 1000ml 应用液 l液、2液按3：1比例混合放置14天后备用。 （二）显微镜。（三）计数器。标本的采集 取手指血或静脉血1.0ml，置于抗凝管中（2%EDTAK2）摇匀待检。或直接未梢取血涂成血片。操作步骤 1采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头.体.尾清晰可分。 2推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于37 C温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。 3染色： （1）. 瑞氏姬姆萨复合染色液染色 置玻片于染色架上，滴加染液35滴，使其迅速盖满血膜，约1min后，滴加缓冲液5一10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混和，5一10min后用水冲去染液，待干。xxxx医院 临床检验实验室文件编号：XXXX白细胞分类计数（手工法）版序：xxxx页码：第3 页，共5 页 （2）快速染色液染色 把干燥血片浸入快速染色液的I液中30s，水洗，再浸入液30s，水洗待干。 注：本染色法除了能快速用于急症外，对玻片质量要求也不高。随着染液多次使用，可适当延长染色时间或更换新液。（3）30s快速单一染色液染色 将染液铺满血膜或将血片浸入染色缸内，30s后用自来水冲洗。 注：加表面活性剂 PVP可增加染料的溶解度并起稳定作用，加入天青 E可缩短染色时间。 4选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率）。参考范围 中性杆状核粒细胞（N）：1-5% 中性分叶核粒细胞（N）：50-70% 嗜酸性粒细胞（E）：05-5% 嗜碱性粒细胞（B）：0-1% 淋巴细胞（L）：20-40% 单核细胞（M）：3-8%临床意义 （1）中性粒细胞（N） 中性粒细胞具有游走性和吞噬作用。 增高见于： a急性感染和化脓性感染：肺炎、败血症、脓肿等。 b组织损伤：大手术后、心肌梗塞、肺梗塞等。 c恶性肿瘤：急、慢性白血病、淋巴瘤等。 d各种中毒：尿毒症、糖尿病酸中毒等。 减少见于： a某些传染病：流感、伤寒、付伤寒、麻疹。 b某些血液病：再障、粒细胞缺乏症、白细胞减少症。 c化疗或放疗后，抗癌药物，X线及镭照射。 d其它：脾功能亢进，自身免疫性疾病，高度恶病质。（2）嗜酸粒细胞（E）：嗜酸粒细胞与变态反应有关，并有吞噬抗原抗体复合物的作用。 增多见于： a变态反应性疾病：支气管哮喘、药物过敏、荨麻疹、血管神经性水肿、过敏紫癜。 b寄生虫病：蛔虫病、钩虫病、血吸虫病。xxxx医院 临床检验实验室文件编号：XXXX白细胞分类计数（手工法）版序：xxxx页码：第4 页，共5 页 c某些皮肤病：湿疹、牛皮癣、剥脱性皮炎等。 d某些血液病：慢粒、恶性淋巴瘤、嗜酸性粒细胞性白血症、多发性骨髓瘤、何杰金氏病等。 减少见于： a应用糖皮质激素、促肾上腺皮质激素。 b伤寒、副伤寒等病患者。 （3）嗜碱性粒细胞（B） 嗜碱性粒细胞主要参与特殊的免疫反应。 增多见于：a慢性粒细胞白血病、嗜碱性粒细胞白血病。 b某些转移癌及骨髓纤维化。 嗜碱粒细胞减少无临床意义。 （4）淋巴细胞（L）：淋巴细胞能产生和运载抗体，在防御病毒感染方面有重要作用。 增多见于：a某些病毒或细菌所致的传染病：传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症、传染病恢复期、结核病、百日咳。 b淋巴细胞性白血病、白血性淋巴肉瘤。 减少见于：a应用肾上腺皮质激素、接触放射线。 b细胞免疫缺陷病、某些传染病的急性期。 （5）单核细胞（M）：单核细胞具有游走性和吞噬作用，除吞噬细胞和异物外，又能吞噬原虫及具有类脂质包膜的结核杆菌及麻风杆菌。 增多见于：a某些感染：伤寒、结核、疟疾、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎。 b某些血液病：单核细胞性白血病、淋巴瘤、骨髓异常增殖综合症、恶性组织细胞病。 减少一般无临床意义。常见的异常白细胞形态的变化 在外周血象中，除了各类白血病幼稚细胞外，通常能见到一些细胞形态上的异常变化。(一) 中性粒细胞 1核象变化：反映中性粒细胞的成熟程度。正常血象中有少量杆状核细胞出现，它与分叶核细胞之间的比值约占1：13。 (1) 核左移：是指杆状核细胞增多，常见于感染。如晚幼粒、中幼粒等细胞增多为核象极度左移，多见于类白血病反应或白血病。 伴白细胞总数增高的核左移：称再生性左移，常见于急性化脓性感染，如大叶性肺炎等。 白细胞总数不增加或减低的核左移：称退行性左移，常见于严重感染、机体抵抗力低下时，如伤寒、伴感染中毒性休克的败血症等。xxxx医院 临床检验实验室文件编号：XXXX白细胞分类计数（手工法）版序：xxxx页码：第5 页，共5 页 (2) 核右移：是指不仅分叶核粒细胞增多，且分叶过多，常见4叶、5叶(正常时多分3叶)，这是造血功能衰退或造血物质缺乏的表现。常见于营养性巨幼细胞性贫血和使用抗代谢药物后。此外，在疾病进行期突然出现核象右移，表示预后不良。 2毒性变化：严重感染、恶性肿瘤、各种重金属或药物中毒、大面积烧伤等症时，中性粒细胞可出现形态变异。 (l) 细胞大小不均：为骨髓内幼稚粒细胞发生不规则的分裂增殖所致。 (2) 毒性颗粒：胞浆中部分或全部颗粒变粗，着色深，颗粒的分布及大小不等。可能为中性颗粒成熟过程中发生变性所致。 (3) 空泡：可在胞浆或核中出现，常为多个，被认为是细胞脂肪变性后未能着色所致。 (4) Dohle体：脑浆内出现嗜碱性点、线、梨形或云雾状物质，可能为核浆发育不平衡所致，为细胞严重毒性变的表现。 (5) 核棘突：胞核有各种形态的芽状突出，临床意义尚不明确，可能与中毒、癌转移、严重放射损伤等有关。 3退行性变：表现为胞体肿大，结