人教版选修1 5.1 DNA的粗提取与鉴定 课件（22张）.pptx

课题一dna的粗提取与鉴定 专题五dna和蛋白质技术 实验原理 1 血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂 利用此特性可得到含有dna的溶液 2 dna在氯化钠溶液中的溶解度 是随着氯化钠的浓度的变化而改变的 dna在物质的量浓度为0 14mol l的氯化钠溶液中的溶解度最低 利用这一原理 可以使溶解在氯化钠溶液中的dna析出 3 dna不溶于酒精溶液 但细胞中的某些物质则可以溶于酒精 利用这一原理 可以进一步提取出含杂质较少的dna 4 dna遇二苯胺 沸水浴 会变成蓝色 因此 二苯胺可以作为鉴定dna的试剂 方法与过程 1 制鸡血细胞液 活鸡鲜血经分离或沉淀获得 500ml烧杯中 玻棒搅拌 离心 分离或静置沉淀 2 提取dna 取血细胞5 10ml 20ml蒸馏水 用玻棒沿一个方向快速搅拌 纱布过滤 滤液中含dna和其他核物质 如蛋白质 原理 血细胞的细胞膜 核摸吸水胀破 玻璃棒快速搅拌 机械加速血细胞破裂 1 提取血细胞核物质 2 溶解核内的dna 滤液 2mol l的nacl溶液40ml 玻棒沿一个方向轻缓搅拌 3 析出含dna的粘稠物 4 滤取含dna的粘稠物 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水 并沿一个方向轻轻搅拌 出现丝状物 当丝状物不在增加时 停止加水 此时nacl溶液的浓度相当于0 14mol l 用多层纱布过滤 含dna的粘稠物留在纱布上 5 dna粘稠物的再溶解 在20ml烧杯中轻缓搅拌3min 使尽可能多的dna溶解在nacl溶液 6 过滤含有dna的nacl溶液 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤 5 所得的溶液 滤液中含有dna 7 提取含有杂质较少的dna 步骤 6 所得的滤液 体积分数为95 的冷却酒精50ml 用玻棒沿一个方向轻缓搅拌 溶液中 析出 出现乳白色丝状物 用玻棒将丝状物卷起 并用滤纸吸取上面的水分 3 dna的鉴定 加入二苯胺试剂4ml 用玻棒搅拌使dna溶解 沸水浴5min 观察溶液是否出现浅蓝色 1 共有 三次过滤 两次析出 七次搅拌 2 加入 两次蒸馏水 三次nacl溶液 一次酒精 实验小结 实验原理拓展介绍 1 dna的释放 dna主要在鸡血细胞的细胞核内 正常情况下不会释放出来 蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液 水分可以大量进入血细胞 使之胀破 同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用 加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂 但释放出来的大量dna与rna 蛋白质结合在一起 即释放的不是纯净的dna 常称为dna核蛋白 2 dna与蛋白质分离 在高浓度 2mol l 的氯化钠溶液中 核蛋白易溶解 析出dna并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3 dna的析出与获取 因为dna在低浓度 0 14mol l 的氯化钠溶液中溶解度小 而蛋白质的在其中的溶解度大 所以在向含dna的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液 从而使dna溶解度下降 蛋白质溶解度增高 4 dna的沉淀和浓缩 对于除去了蛋白质的dna的氯化钠溶液 必须再进一步沉淀和浓缩 常用酒精沉淀法 即往含有na 的dna溶液 加入体积分数为95 的冷却酒精 混匀后可以使dna沉淀 浓缩 形成含杂质较少的dna丝状物 悬浮于溶液中 若丝状物较少 可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可 浓缩后的dna丝状物可以用玻棒 玻棒有吸附dna的作用 缓缓旋转的方法卷起 5 dna的再溶解 用高浓度 2mol l 的氯化钠溶液再溶解dna粘稠物 6 dna的鉴定 鉴定时蓝色的深浅与溶液中dna的含量多少有关 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂 溶解dna 使2mol l的nacl溶液稀释至0 14mol l使得dna最大限度地释出 使含dna的黏稠物被留在纱布上 使含dna的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含dna的滤液中的杂质 提取dna a出现蓝色b无变化 1 在dna的粗提取实验过程中 两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是 a 稀释血液 冲洗样品b 使血细胞破裂 降低nacl浓度使dna析出c 使血细胞破裂 增大dna溶解量d 使血细胞破裂 提取含杂质较少的dna b 随堂训练 2 实验中nacl的物质的量浓度为2mol l和0 14mol l对dna有何影响 答 前者是溶解dna 后者是使dna析出 3 dna遇二苯胺 沸水浴 会染成 a 砖红色b 橘黄色c 紫色d 蓝色 d 4 提取鸡血中的dna时 为什么要除去血液中的上清液 答 dna的提取 关键是对杂质的去除 由于上清液是血液中的血浆部分 不含dna 所以要除去上清液 含有蛋白质 20 5 下列图示中能反映dna溶解度与nacl溶液浓度 mol l 之间的关系的是 c 21 6 在dna的粗提取实验过程中 两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是 a 稀释血液 冲洗样品b 使血细胞破裂 降低nacl浓度使dna析出c 使血细胞破裂 增大dna溶解量d 使血细胞破裂 提取含杂质较少的dna b 7 dna在nacl溶液中的溶解度有两重性 随着nacl溶液浓度的变化而变化 1 请在下列浓度的nacl溶液中 选出能使dna析出最彻底的一种和溶解度最高的一种 a 0 14mol lb