【毕业学位论文】（Word原稿）中野1号大豆耐盐生理及遗传差异分析硕士论文

密级 ： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 中野 1 号大豆耐盐生理及遗传差异分析 o. 1” in o. 1” - I - 摘 要 本实验的目的是阐明大豆耐盐材料的耐盐生理，建立合适的大豆耐盐鉴定体系，利用子标记分析被鉴定的群体，揭示造成群体内单株间耐盐性差异的遗传或生理因素。 通过测定不同 度、不同处理时间的大豆耐盐品种茎叶和根中甘氨酸 甜菜碱和脯氨酸的 含量，表 明根中甘氨酸甜菜碱作为盐胁迫诱导积累的重要渗透调节物质，能根据胁迫浓度进行自身含量的调节，维持植株的渗透平衡和生理代谢功能；脯氨酸在根细胞中参与了对抗盐胁迫的生理调节，与抗性有关，而在茎叶细胞中，甘氨酸 甜菜碱和脯氨酸 与盐胁迫的关系不明显，由此认为大豆茎叶中的甘氨酸甜菜碱和脯氨酸的变化不能作为耐盐指标。 耐盐系数为指标的 大豆耐盐鉴定体系 实现了植物耐盐评价的质和量的统一。该方法使鉴定变得简便，标准一致。不仅能有效的反映出鉴定材料的耐盐性，还能反映出该群体耐盐的稳定性。在耐盐研究的文章中很少有谈论实验材料耐盐稳定 性的，提出材料耐盐的稳定性对耐盐材料遗传研究和耐盐育种都很有意义。 选用 232 对大豆 物扩增由中野 1 号耐盐植株和敏感植株 建的耐盐基因池和敏感基因池，在 3 个连锁群上发现 3 个差异区段，包括 5 个差异位点。利用筛选到的 5对 物对中野 1 号群体 行扩增，发现中野 1 号可细分为 A、 B 两个类型。利用简单配对参数估计基因频率 , 计算遗传相似系数 , A、 可以认定 A、 B 两个组来源于同一个杂交组合，而且两个组的遗传背景极其相似，中野 1 号是由同一杂交组合的高代品系姊妹株繁 育而成。 对 A、 B 两组植株的耐盐性进行 t 检验，发现他们耐盐性差异达极显著水平。考虑到两个群体的遗传背景极其相似，推测 A 组与 B 组的耐盐性差异可能与他们在连锁群上的差异位点有关。大豆应对盐胁迫的某个相关基因位点可能存在于这些差异区段中。这些差异位点分别是连锁群 锁群 锁群 N 上 间的 比较盐胁迫下 A、 B 两组植株耐 盐系数次数分布，发现大豆群体在盐胁迫下植株的死亡可分成几个阶段，大豆材料耐盐性差异在于这几个阶段出现的早晚。 关键词： 大豆耐盐，遗传差异， 记 - he of to of an of or of in SR By of in of it of be in by of on in a in to in it of it of in is of of in on of to of of of It is in we of as a of 32 SR to NA to “be to S of It It in of of It in of SR on . on to G to G D2 to G N. of in , it of to in of on - 英文名词及单位缩写索引 增片段长度多态性 割扩增长度多态性 增指纹 图谱 性梯度胶电泳 糖基甘油二酯 ds 分西门子每米 电导率单位 传相似系数 重任意扩增子分布 子标记辅助选 择 糖基甘油二酯 离子排除基因 离子积累基因 丙烯酰胺胶电泳 合酶链式反应 量性状位点 机扩增 微卫星 多态 性 机扩增多态 制性片段长度多态性 组近交系 列特征扩增区 核苷酸多态性 单重复序列 列标签位点 变数串联重复序列 - 目录 摘要 . . . I . . 文名词及单位缩写索引 . . . 录 . . 一章 引言 . . .渍化土壤的危害与利用 . . 土壤盐渍化现状及其危害 . . 盐渍化土壤开发利用的途径 .豆在农业生产中的地位 .豆在盐渍化土壤开发中 的应用 .内外大豆耐盐研究现状 . . 大豆耐盐机理的研究 . . 大豆耐盐鉴定方法的研究 . . 6 豆分子标记研究 . 分子标记的类型和特点 . 子标记的应用 . 大豆遗传图谱的 构建 . 大豆分子标记辅助选择 . 大豆耐盐分子标记的研究 . 我国大豆耐盐育种研究现状 .研究的目的和意义 . . .- V - 第二章 材料与方法 . . . .料 . . .法 . . 盐胁迫下的生化指标测定 . 苗期单株耐盐鉴定 . . . 提取 . . 基因池的构建 . . 记分析 . . . 数据分析 . . .三章 结果与分析 . . .胁迫下大豆植株生化指标测定 野 1 号耐盐性鉴定 . . .记分析结果 26 野 1 号分成的两个组植株耐盐性比较 . .野 1 号分成的两个组在连锁群上的差异位点 . . 四章 讨论 . .大豆耐盐起作用的生化指标 .盐鉴定评估方法的建立 .野 1 号耐盐差异株的 记分析 . . 胁迫下的盐害反应规律 . . . 结 . .考文献 - 附录 1 营养液配方 . . . . . . .录 2 实验所用试剂配制方法 . . . . 录 3 物序列特征 . . . .录 4 在读期间发表的论文 . . . .谢 者简历 . .国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 1 - 第一章 引 言 渍化土壤的危害与利用 壤盐渍化现状及其危害 土壤盐渍化是一个世 界性的资源问题和生态问题 ，成为 限制世界和我国农业生产的主要因素之一。据联合国粮农组织（ 2000年统计，世界盐渍化土壤面积为 平方公里（不包括不合理灌溉造成的次生盐渍化面积），占世界土壤总面积的 3%。其中欧洲盐渍化土壤面积 洲盐渍化土壤面积 亚和乌拉尔东部地区盐渍化土壤面积 非中东地区盐渍化土壤面积 哈拉以南非洲地区盐渍化土壤面积 太地区盐渍化土壤面积 国盐渍化土壤面积 中国土壤总面积的 8%。 我国盐渍土资源总面积 中包括草甸盐土、滨海盐土、酸性硫酸盐土、漠境盐土和寒原盐土 5种类型 布于华北、西北、东北及滨海地区；碱土总面积 外盐化和碱化土壤全国共计 且尚有暂难开发的漠境及高寒地区重含盐土壤 国土壤普查办公室， 1998）。 盐渍土造成的主要危害体现在使农作物减产或绝收，影响植被生长并间接造成生态环境恶化 。由于淡水资源缺乏或者利用灌溉方式改造盐渍化土壤代价昂贵，许 多盐渍化土壤没有了经济和利用价值。 对内蒙 古 河套平原统计，许多灌区每年因盐渍土死于苗期的农作物占播种面积的 10 20，甚至达 30以上；黄淮海平原轻度、中度盐渍土造成农作物减产 10 50，重度则颗粒无收，而山东省 年因盐渍化造成的经济损失就达 15 20亿元。严重的盐渍化，使土地的利用率降低，荒地增多，加深了人多地少的矛盾。 因此，开发利用盐渍化土壤，增加土壤的产出率和利用率已经成为迫在眉睫的研究任务。 渍化土壤开发利用的途径 盐渍化土壤严重 影响着农作物的产量、品质和效益。为了缓解盐渍化耕地和土壤次生盐渍化对农业生产的影响，以及盐碱荒地和沿海滩涂开发利用，进一步扩大种植面积，提高作物的单产和总产，增加经济效益和社会效益，各国政府和科研机构都加大了财力、人力投入。在二十世纪八十年代初期， 1980）等提出盐渍化土壤开发利用的二种途径：一是环境适应作物，即用传统水土工程改良盐碱地；二是培育适应逆境的品种。实践证明，第一条途径人力、物力、财力消耗巨大，成本昂贵，并耗费大量淡水资源，目前淡水资源匮乏，因而受到极大限制。因此，选育耐盐品种是 缓解土壤盐渍化、次生盐渍化对农业生产影响的最经济有效的方法（翁跃进，2002）。随着分子生物学的发展和研究手段的进步，加快了人们对耐盐机理的进一步认识。目前利用分子生物学技术，挖掘和克隆耐盐基因，进行遗传转化，改良和提高作物的抗逆性，成为重要的育种手段。 2001 年，多伦多大学的 2001）将拟南芥的钠离子泵蛋白基中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 2 - 因转到番茄中。当在含盐量仅是海水一半的水中生长时，正常番茄就干枯了，而转基因番茄生长完好且结果了，成为利用基因工程手段培育耐盐新品种的成功事例 。 豆在我国农 业生产中的地位 大豆一直作为我国的重要粮食作物之一，是植物蛋白和食用油的重要来源， 大豆蛋白含有人体不能合成的 8种必需氨基酸。大豆油脂中不饱和脂肪酸占 80% , 含有人体必需的亚油酸平均达5018% , 亚麻酸占 618% , 并且不含胆固醇。我国人多地少 , 蛋白质资源短缺 ,发展大豆产业符合我国国情 ,也有利于人民身体健康和膳食结构的改善。 因此大豆在食品工业和农业生产中占重要地位（邵弘 , 2000）。 豆 粕作为蛋白质饲料， 在畜牧业生产中也扮演着重要角色。 大豆的种植和加工利用起源于我国。 1949年中国的大豆单产 每公顷只有 611公斤， 1980年大豆单产达到每公顷 1989年达到每公顷 1996年后大豆每公顷产量基本维持在 国大豆的单产水平还比较低 ,2000年世界大豆每公顷产量平均为 巴西为 阿根廷为 中国为 中国的大豆单产分别为世界平均水平的78%、美国的 67%、巴西的 71%、阿根廷的 73%。 二十世纪 50年代 , 我国的大豆产量占世界总产量的80% 90% ,目前已排在美国、巴西、阿根廷之后。现在我国在大豆种植品种和大 豆产品深加工利用方面均已落后于发达国家。 中国的大豆生产量到 1993年提高到 1530万吨 ,在 1994年创最高记录 ,达 1560万吨 ,随后开始徘徊在 1400万 1500万吨之间 。 中国的大豆生产量长期徘徊 ,增长很慢 , 目前 中国的大豆生产能力不能满足畜牧业发展对豆粕需求的增长 ,只有增加大豆和豆粕的进口才能满足国内对豆粕的需求（朱希刚， 2003）。 豆在盐渍化土壤开发中的应用 栽培大豆（ 属于中等耐盐作物，其土壤盐度阈值是 溉水电导率超过 株就会 死亡（ 984）。大豆品种间耐盐性存在差异（ 992； 1997）。据 1964）的实验，当土壤盐度由 0.2 ds豆植株的死亡率和叶片坏死均增加，叶片出现缺绿，茎干重和籽实产量降低，盐敏感品种较耐盐品种受盐胁迫影响更大。不耐盐的大豆品种，茎叶中的氯化物积累量分别达到 150000000株即死亡。 大豆由于根瘤固氮作用 , 是生态农业、有机农业的重要作物。 进行大豆耐盐性研究，对增加粮油需求，提高盐碱地区作物产量，改善土壤结构和有机质含量，缓解土壤盐渍化危害具有重要意义。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 3 - 内外大豆耐盐研究现状 豆耐盐机理的研究 作物耐盐性是一种复杂的性状，涉及多种生理和代谢途径。近年来有关大豆耐盐机理和耐盐遗传方面，国内外均有一些报道。 基因控制的排氯机制 盐胁迫对植物造成危害主要是离子毒害、渗透胁迫和营养不平衡。 害和 豆盐害究竟是 应还是 丙军等（ 2002）通过对大豆苗期盐害离子效应的比较，认为 且报道在 渗胁迫下单 单 各大豆品种发芽率均有明显抑制作用，其顺序是 理单 理。 有些耐盐大豆具有 1969）认为 提议把此基因用 示，该基因对盐敏感大豆叶内 1969）提议用 示 ）是显性。邵桂花等（ 1994）利用耐盐品种与盐敏感品种配制了一系列正反杂交组合，进行大豆耐盐性遗传分析表明，大豆耐盐主要受一对基因控制，耐盐属显性，盐敏感为隐性；又根据大豆植株排斥 而认为大豆离子毒害主要是 究了对盐胁迫下大豆品种“ “ 离子分布表明，“ 片排出 过对“ 根内 的多。但在盐渍处理刚开始时，“ 运相当 数量的 后才有效地控制 X 射线微量分析表明， 根尖部的皮层里累积，说明根里累积 1979）。 （ 1994）试验认为在 养液中鉴定大豆耐盐性，以茎部 含 培养液电导率达 7.5 ds，能有效的把具有排 “ “ 、“ 叶内 其他 15 个品种区分开；但当含 养液达 10.9 ds，除“ ，茎部 。由此认为在 养液中 度可能是具有排 a+的吸收和转运 有些大豆品种耐盐性的差异取决于大豆根中 排除能力和限制 叶片运输的能力（ , 1995）。进入栽培大豆木质部液流中的 向叶片运输过程中可被木质部薄壁细胞重新吸收，跨膜横向运输至韧皮部，再运送 到根系，但对 以茎基部 量显著高于叶片（ ， 1994）。他们还提出了 过质膜 H+逆向运输方式进入木质部薄壁细胞的假说（ ， 1996）。 （ 2001）的试验表明，与盐敏感品种“ 比，耐盐品种“ 40 80 理下，无论蒸腾效率如何变化，都能有中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 4 - 效地控制 叶片中的积累，因而推测“ 收和向叶片的转运并不是靠蒸腾作用被动调节。但当 度达 120 时，“ 片中 积累随蒸腾作用下降而减少。可能是在较高浓度下，“ 主动调节作用已不能有效控制 吸收和向叶片转运，部分蒸腾作用被动运输到叶片。此试验中，盐敏感品种“ 40 80 理下，随蒸腾作用下降， 吸收和向叶片的转运降低，叶片中 积累减少。认为盐敏感品种 根部向地上部的转运是靠蒸腾作用控制的。提高空气中的相对湿度能够增加盐敏感品种的忍耐性，但对耐盐品种效果不明显。比较“ 和“ 中 量发现，“ 部积累很少的 说明“ 根比“ 较高的 除能力。 透调节作用 渗透调节是植物适应盐胁迫的最基本特征之一，植物为了消除盐胁迫所造成的伤害，通常在细胞内主动积累一些小分子有机化合物和蛋白类保护剂来维持渗透平衡和体内水分，一般称之为渗透调节剂（或保护剂） (这些小分子有机化合物有以下几类：（ 1）多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇等；（ 2）糖类物质，如蔗糖、海藻糖等； （ 3）氨基酸及其衍生物，如脯氨酸、甘氨酸甜菜碱（简称甜菜碱）等。 1992）等研究表明，栽培大豆“ 种适盐细胞以积累 脯氨酸、可溶性糖等有机溶质对渗透调节也有贡献。 1997）发现大豆耐盐品种“ 和“ 盐胁迫下体内可溶性蛋白、脯氨酸等游离氨基酸及 K、 累，而盐敏感品种“ 内糖、蛋白质、K、 物质减少。在含 选择培养基中获得的大豆小真叶愈伤组织，其脯氨酸含 量随 于愈伤组织进行渗透调节，吸水维持膨压。 脯氨酸作为耐盐性指标尚存在争议， 1995）发现大豆“ 盐胁迫下，尽管生长量显著下降达 55%，干物质产量、有机酸和脯氨酸则无明显变化。 1987）报道，大豆抗盐性强的品种“ 盐胁迫下，叶片脯氨酸含量增加和溶质势下降幅度均明显低于抗盐性弱的品种“ 并认为脯氨酸积累不能作为抗盐性或缓解盐胁迫的指标，而可能是一种伤害性反应。 1994）等发现，大豆品种“ “ 盐胁迫下根中磷脂含量和脂肪酸组分均无明显变化，而游离固醇和甘油三酯均上升，不同的是“ 中糖脂含量上升，而“ 保持不变，但 值由 升到 汝镇等（ 1994）的研究表明，低浓度盐胁迫使大豆籽粒蛋白质含量显著下降，脂肪含量显著提高，脂肪酸组成中的亚油酸和亚麻酸含量显著增加，油酸含量显著降低，并认为亚麻酸含量高利于作物提高抗逆性。但在高盐浓度下蛋白质含量显著提高，脂肪含量显著降低。万超 文等 (2002)的研究也得出相同结果，并发现相同盐浓度对不同耐盐类型品种作用效应不同，耐盐品种的蛋白质、亚油酸、亚麻酸含量及脂肪酸不饱和指数（ 于盐敏感品种。认为大豆籽粒蛋白质含量的提高，增强了细胞膜的亲水性，对盐胁迫的适应起到调节和保护作用，脂肪酸不饱和指数（ 提高增强了耐盐品种的中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 5 - 耐盐性。 胁迫下膜脂、蛋白质和脂肪酸组分变化 植物的膜系统主要由膜脂和膜蛋白组成，膜脂包括磷脂、糖脂和固醇。植物耐盐性与膜透性的保持呈正相关。在盐胁迫条件下，敏感品种的细胞膜受到较重破坏其透性 发生显著变化，而耐盐品种的膜透性稳定。这是由于耐盐品种在盐胁迫条件下改变了膜上类脂组成，从而维持了膜系统结构和功能的完整性（ 等， 1999）。邵桂花等（ 1993）研究表明，盐引起膜的渗漏，使细胞电解质、有机质等物质外渗，并产生毒害。电解质的外渗量与盐溶液的浓度成正比，盐浓度增加，膜的渗漏量加大。盐对膜造成的伤害不仅有渗透作用，还存在离子的毒害作用。 1996）研究了栽培大豆“ 种在盐胁迫下叶片质膜的膜脂组分及相变，结果表明，盐胁迫下质膜中饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比 值及膜脂相变的焓均上升，磷脂含量下降。 1996）报道在 25 迫下，大豆栽培品种“ 细胞质膜和其他微粒体膜中蛋白质含量无明显变化，但脂肪酸不饱和度分别下降 55%和 26%。另外，器官水平根的研究表明，盐胁迫下胆固醇 +菜油甾醇 /谷甾醇 +豆甾醇比值由对照的 至 谷甾醇 /豆甾醇的比值由对照的 至 膜膜脂饱和度的提高和谷甾醇 /豆甾醇的比值的提高，有利于盐胁迫下膜功能的调节，增强抗盐性。 （ 1997）通过线性蔗糖密 度梯度离心制备大豆“ 叶绿体外（封）（ 内（封）（ 种膜，发现盐胁迫使其叶绿体膜主要脂肪酸 油酸和棕榈酸合成能力下降，但稍低浓度的盐胁迫预锻炼可部分维持其合成功能。 盐胁迫下，大豆膜系统结构和功能的维持还涉及到相关酶类活性的变化。 （ 1995）发现经高渗锻炼的大豆幼苗比未受锻炼的幼苗有较高的谷胱甘肽还原酶，抗坏血酸过氧化物酶和脱氢抗坏血酸还原酶活性，这有利于降低膜脂过氧化程度，提高植株的耐盐性。陈一舞等（ 1994，1997）发现盐胁迫可诱导萌发大豆种子胚根中产生 较多新的 工酶带。以耐盐品种和敏感品种的子叶为材料 ,研究表明 性主要位于细胞溶质而线粒体、叶绿体较少，但叶绿体 耐盐品种和敏感品种的差异主要集中在叶绿体 谱上，它可能与大豆耐盐性有关。 生大豆泌盐结构 盐腺 盐腺是某些生长在盐碱地上的植物在叶、茎等部位的表面形成的一种泌盐结构。盐腺泌盐是耗能的主动过程，主要依赖腺体细胞中线粒体提供的 膜结合 H+化为离子跨膜运输的动力，进入分泌细胞原生质体中的盐分先泵 入液泡，然后通过质膜与液泡膜的融合，以胞吐的形式或通过离子通道排出体外。陆静梅和刘友良（ 1998）在大豆结构演化及其环境影响的研究中，首次从山东垦利县黄河入海口的盐碱滩地上发现了具有泌盐结构的一年生野生大豆种群。扫描电镜显示，盐腺着生于茎、叶外切向壁的间隙处，呈圆球形，体积大小不等，基部有一小柄，球形盐腺直径为 长 盐孔直径约为 嫩盐腺通过泌盐孔泌盐，成熟中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 6 - 盐腺则以整体破碎方式释盐。根据其茎皮内存在传递细胞的特点，认为盐分在腺体内的转运是以原生质体分泌形成角质化层，将含盐 小液泡包裹成小液泡包，在传递细胞的作用下，经胞间连丝进入柄细胞，再由胞间连丝进入球形分泌细胞。因此盐分在腺体内为共质体运输过程，此机制尚待研究和验证。周三等（ 2000）认为野生大豆盐腺实质上是盐囊泡，具有盐囊泡的形态结构和泌盐特点。周三的结论更为严谨。 豆 根瘤菌共生体与大豆耐盐性 盐胁迫对大豆根瘤发育和干物质产量影响较大，根瘤的形成及其固氮能力比植株生长对盐胁迫更敏感。盐胁迫使大豆植株根瘤数量及根瘤干重显著下降（ 1984），盐胁迫下大豆根瘤呼吸熵（ 酒精含量均明显 上升，也说明盐胁迫下根瘤细胞吸 1994）。根瘤菌吸 重盐胁迫下，根瘤固氮减弱可能还与根瘤中豆血红蛋白含量的下降有关（ 1994）。盐胁迫下大豆耐盐品种根瘤中豆血红蛋白、谷胱甘肽含量及乙炔还原酶活性比对照无明显变化，而盐敏感品种根瘤中豆血红蛋白、谷胱甘肽含量及乙炔还原酶活性都明显低于对照；盐敏感品种抗氧化酶下降，而耐盐品种则上升。敏感品种的膜脂过氧化程度增加达 50%，而耐盐品种膜脂过氧化程度较轻（ 1997）。 大豆的耐盐 性首先取决于其自身对盐胁迫的耐受能力，其次取决于与之共生的根瘤菌，而且根瘤形成的数量和固氮能力与其寄主的耐盐性呈正相关（ ， 1995； ， 1989；， 1994）。利用耐盐材料和敏感材料相互嫁接实验发现，耐盐大豆地上部能产生可传导的物质控制大豆根瘤的表达（ 1995）。 30 迫下，耐盐品种的固氮酶活性、根瘤数量、根瘤干物质量下降不明显，敏感品种则显著下降。耐盐品种接到敏感品种根上的植株与耐盐品种自嫁 接植株根部的固氮酶活性接近，而敏感品种接到耐盐品种根上的植株根部的固氮酶活性与耐盐品种自嫁接植株相比，根部固氮酶活性降低 75%，与敏感品种自嫁接植株的固氮酶活性相近。由此可见，耐盐大豆在盐胁迫下，地上部能产生某些物质调控根部的固氮酶活性。在 30 迫下，盐敏感品种自嫁接植株根瘤数量和根瘤干物质量下降 50%时，耐盐品种为接穗的植株仅分别下降 6%和 5%，敏感品种为接穗的植株仅下降 21%。由此表明盐胁迫下耐盐品种的地上部和地下部都能影响根瘤形成和根瘤干物质的积累（ 1998）。在 80 迫下，大豆根部能控制根瘤的表达（ 1990）。 豆耐盐鉴定方法的研究 在进行栽培和野生大豆耐盐种质资源评价和筛选中，人们建立和采用了多种方法，其中比较科学有效并具代表性的有：邵桂花（ 1987）建立的大豆耐盐性的田间鉴定方法，马淑时等（ 1994）采用的盐害指数为指标的芽期和苗期鉴定方法和 （ 1997）提出的耐盐系数为指标的苗期室内鉴定方法。 邵桂花（ 1987）建立的大豆耐盐性的田间鉴定方法，盐害调查方法有两种：（ 1）单株分类记载中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引 言 - 7 - 法，通过计算盐 害指数，评定品种耐盐级别。（ 2）田间直接分级（群体分级）法，依据调查标准按品种盐害表现在田间直接分级。 马淑时等（ 1994）采用的盐害指数为指标的苗期鉴定方法，基本是参照邵桂花的盐害指数的方法，但计算公式更尽完善。盐害指数的方法把植株盐害表现分为 0 6 个级别，计算盐害指数，再根据盐害指数，把品种耐盐性分为高耐、耐、中耐、敏感、高敏 5 种类型。盐害指数公式为： 盐害指数（ %） = 100 （ 1997）提出的耐盐系数为指标的苗期室 内鉴定方法，种子萌发后，用 养液水培一周后，加 理，浓度从 始， 5 天一个浓度，经过 最终 理浓度为 耐盐系数公式为： 耐盐系数 =（处理浓度该浓度下无盐害表现的天数） 大豆耐盐性的田间直接分级鉴定结果易受日照、气温、降水、风力等田间气候的影响而使鉴定结果的可重复性降低，而且只能用于对群体耐盐性进行评估。盐害指数把单株盐害表现定性分为 6种类型，再统计各类型株数，使盐害指标量化。但是统计每个单株受害叶片数及叶面积来界定盐害类型，在田间的工作量很大 ，并要求实验人员有一定的辨别盐害症状的经验。耐盐系数鉴定法以植株耐受浓度和时间乘积为指标既能显示质的区别，也能表现量的差异，并能区分开同一材料群体内各个单株的耐盐差异。是量变到质变的连续过程。其不足之处是，鉴定所需时间长。 豆分子标记研究