中图版选修一 蛋白质的提取和分离 课件（31张）.ppt

血红蛋白的提取与分离 3 基本单位 氨基酸 蛋白质小知识 回忆 氨基nh2 cooh羧基 h r 导入新课 1 含量 占细胞干重的50 以上 是细胞中含量最多的有机化合物 2 组成元素 c h o n 主要 4 分子结构 氨基酸多肽蛋白质肽键 co nh 脱水缩合 盘曲折叠 导入新课 5 相对分子质量 高分子化合物 学习目标 学习目标 1 了解色谱法分离生物大分子的基本原理和方法 重 难点 2 了解电泳法分离生物大分子的基本原理和方法 1 分离生物大分子的基本思路是什么 10组 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么 提取分离方法 5组 3 凝胶色谱法的概念 凝胶色谱法的原理 3组 4 缓冲溶液的概念 作用 1组 5 电泳法的原理 9组 6 聚丙稀酰胺凝胶电泳原理 sds作用机理 7组 自学引导展示任务 1 分离生物大分子的基本思路是什么 10组 学生展示 1 分离生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 基础知识 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么 提取分离方法 5组 学生展示 凝胶色谱法 凝胶电泳法 基础知识 2 蛋白质分离和提取的原理 根据蛋白质各种特性的差异 如分子的形状和大小 所带电荷的性质和多少 溶解度 吸附性质和对其他分子的亲和力等等 可以用来分离不同种类的蛋白质 3 凝胶色谱法的概念 凝胶色谱法的原理 3组 学生展示 2 凝胶 大多数凝胶是由多糖类化合物 如葡聚糖或琼脂糖 构成的多孔小球体 内部有许多贯穿的通道 根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小 利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用 来进行分离 1 概念 一 凝胶色谱法 分配色谱法 基础知识 3 原理 当不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小 相对分子质量较大 凝胶内部的通道 容易进入 无法进入凝胶内部的通道 只能在凝胶外部移动 路程较长移动速度较慢 路程较短移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 较大 较小 垂直向下的运动 无规则的扩散运动 较快 较慢 较短 先流出 较长 后流出 4 缓冲溶液的概念 作用 1组 学生展示 二 缓冲溶液 1 概念 在一定的范围内 凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液ph值基本保持不变的混合溶液 能够抵制外界的酸和碱对溶液ph值的影响 维持ph基本不变 2 作用 基础知识 3 缓冲溶液的配制 通常由1 2种缓冲剂溶解于水中配制而成 调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同ph范围内使用的缓冲液 思考 说出人体血液中缓冲液 nah2po4 na2hpo4 h2co3 nahco3 基础知识 4 提问 在本课题中使用的缓冲液是 其目的是 利用缓冲液模拟细胞内的ph环境 保证血红蛋白的正常结构和功能 便于观察 红色 和科学研究 活性 磷酸缓冲液 基础知识 三 电泳 1 概念 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程 基础知识 5 电泳法的原理 9组 学生展示 2 原理 许多重要的生物大分子 如多肽 核酸等都具有可解离的基团 在一定的ph下 这些基团会带上正电或负电 在电场的作用下 这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小 形状的不同 使带电分子产生不同的迁移速度 从而实现样品中各种分子的分离 基础知识 影响蛋白质分子运动速度的因素 基础知识 在电场的作用下 这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 琼脂糖凝胶电泳示意图 3 类型 琼脂糖凝胶电泳 聚丙稀酰胺凝胶电泳 测定 通常用十二烷基硫酸钠 sds 聚丙稀酰胺凝胶电泳 蛋白质相对分子质量 基础知识 6 聚丙稀酰胺凝胶电泳原理 sds作用机理 7组 学生展示 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素 1 聚丙稀酰胺凝胶电泳原理 sds能使蛋白质发生完全变性 解聚成单条肽链 因此测定的结果只是单条肽链的分子量 sds能与各种蛋白质形成蛋白质 sds复合物 sds所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量 因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别 使电泳迁移率完全取决于分子的大小 2 sds作用机理 基础知识 思考 血液有哪些成分 1 凝胶色谱法是根据 分离蛋白质的有效方法 a分子的大小b相对分子质量的大小c带电荷的多少d溶解度2 缓冲液的作用是 在一定范围内 抵制外界的影响来维持 基本不变 a温度bphc渗透压d氧气浓度3 电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷 的电极移动 a相同b相反c相对d相向 b b b 目标检测 4 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中 关于蛋白质的叙述 正确的是 a相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质b相对分子