组培实验报告.doc

专业班级：生物技术2班 学号：20120322229 姓名：蒋薇 同组人:卢晓燕、王雪娇、杨佳梅、袁蓉、莽斌、林兴龙、刘显浩、关德红、李玉胜试验日期：2014年3月10日 室温： 大气压：试验序号：1 试验名称：组培室的设计及实验仪器设备的使用一、 实验目的1.了解普通植物组织培养实验室和工厂育苗植物组织培养室的差别；2.掌握植物组织培养实验室的组成及各分室的功能；3.学会分析各种类型植物组织培养实验室的优点和缺点；4.学会常见植物组织培养设备的使用方法。二、 试验原理1.物组织培养实验室是完成植物组织培养的重要场所，植物组织培养实验室设计合理与否植影响着植物组织培养的成败。2.植物组织培养实验室有：准备室、接种室、培养室、温室。 准备室： 在准备室主要进行一些常规实验操作，如各种药品的储备，称量，器皿洗涤，培养基配制，培养基和培养器皿的灭菌，培养材料的预处理等。为了方便管理还可以将准备室进行适当的分区，如划分为药瓶储藏室，洗涤室，培养基配制室及灭菌室等。1 药品储藏室主要用于存放各种化学药品，要求室内干燥、通风、避光、应配制、备药品柜、冰箱等。各类化学试剂应按要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱内保存，有毒药品应按规定存放和管理。洗涤室用于玻璃器皿、用具及实验用具的洗涤、干燥和存放;；培养材料的预处理与清洗：组培苗的出瓶、清洗与整理等。要求有电源、自来水和水槽，上下水道畅通，排水良好，地面耐湿、防滑，便于清洁。应配备工作台、烘箱、晒瓶架、周转筐、毛刷等。（3）培养基配制室用于培养基的配制，还可以分为称重分室和配制分室。药品称量需配制各种规格的天平，包括普通天平和分析天平。培养基配制需要配备工作台、蒸馏水器、电炉（电饭锅或微波炉）、水浴锅、磁力搅拌器、过滤装置、酸度计、分注器、各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液管及移液管架以及贮藏母液的冰箱、移动式载物台（医用小推车）、周转筐等。(4)灭菌室用于培养基、器皿、用具、及其它物品的灭菌。灭菌室根据工作量的大小决定其面积的大小，一般控制在3050。要求、通风、明亮，墙壁和地面应防潮、耐高温。应配置高压电源和排水设施、高压蒸汽灭菌装置、干热消毒柜或烘箱、细菌过滤装置及移动式载物台、周转筐等。 准备室也可设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间按程序完成，以便于程序化操作与管理，从而提高工作效率。此外还便于培养基的配制、分装和灭菌的自动化操作程序设计，从而减少规模化生产的人工劳动，更便于无菌操作体系的建立。无菌操作室（接种室）无菌操作室也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培 养物的继代转接等无菌操作。由于植物组织培养时间较长，尤其需要防止细菌、真菌污染。因此，接种室内无菌条件控制的好坏直接影响培养物的污染率及接种工作效率等重要指标。接种室面积根据需要和环境控制的难易程度而定，在工作方面的前提下易小不宜大。室内地面、墙面、天花板应采用防水或耐腐蚀材料，符合无尘积累要求，易于清洁和消毒；门窗要求密闭性好，一般用滑动门窗，不能安装风扇，通风换气需通过空气调节装置进行。无菌室内安装紫外灯，每周照射12h，每次使用前照射1030min；定期用甲醛和高锰酸钾（或用臭氧发生器）熏蒸消毒。接种室内应配备超净工作台、灭菌器或酒精灯、酒精瓶及酒精棉球、接种工具、器械支架及移动式载物台。 接种室外还应设置预备室作为缓冲间，一方面可供操作人员更换工作服、工作帽、拖鞋及器皿准备、培养材料处理等，另一方面可减少工作人员将外界尘埃、杂菌等污染物直接带入接种室内。缓冲间与接种室之间最好安装塑钢玻璃及滑动门，以便于观察；而且缓冲间与接种室的门应该错开，也不得同时开启，以防止在工作人员进出时空气对流带入杂菌。缓冲间内应配备鞋架和衣帽挂钩，并备有清洁的工作服、工作帽、口罩及拖鞋；墙顶应安装12盏紫外灯，定时照射杀菌。培养室：用于对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养。培养室内放置培养架，方便操作，.并充分利用空间。培养室的大小可根据生产规模和培养架的大小、数目及其他附属设备而定，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。可采取多室设计方式，每个培养是面积不宜过大，约1020，以满足不同培养材料对环境条件控制的不同要求，也便于对同室内环境条件的均匀控制。室内天花板和内墙最好用塑钢板或瓷砖装修，地面铺设水模式或瓷砖，以保持室内明亮、平整，并方便清洁和消毒；室内还要安装紫外灯，定时进行杀菌处理。培养室内需要安装空调，以控制室内温度，一般要求保持在2027之间，低于15或高于35对植物的生长不利。培养室的光源一般使用白色日光灯，光周期可采用自动定时器来控制，光照强度一般控制为10006000lx，每天光照时间薇1016h。需要大量的暗培养时可以增设暗培养室，或使用暗箱培养。培养室内的相对湿度保持在7080为宜。湿度过高，容易使培养及污染；湿度过低，容易使培养基失水变硬，影响培养物生长。在梅雨季节可使用除湿机人工除湿，干燥季节可利用加湿器来增加湿度，也可采取防治水盆的方法来调节湿度。温室组培试管苗在进入大田栽培之前，必须经过一段时间的炼苗，即驯化移栽过程，使其逐渐适应自然条件。北方（长江以北）通常建造日光温室，而南方通常建造连栋温室大棚进行试管苗得分驯化移栽。日光温室：日光温室又称为钢拱式日光温室、节能温室，主要利用太阳能做热源提供室内温度。这种温室跨度为57米，中高2.43.0米，后墙用砖砌成，厚5080厘米，高1.62.0米。钢筋骨架，拱架为单片桁架，上弦为1416,的圆钢，下弦为1214,的圆钢，中间用810的钢筋做拉花，宽1520厘米，拱架上端搭在中柱上，下端固定在前端预埋水泥基础上。拱架间用三道单片桁架花梁横向拉接，以使整个骨架成为一体。温室后屋面可铺泡沫塑料板和水泥板，抹草泥封盖防寒，后墙没隔45米设通风口。此种温室坚固耐用，采光和通风性好，操作方便，适于北方地区使用，能充分利用太阳能，降低生产成本。智能连栋式温室：智能连栋式温室有屋脊形连栋温室和拱圆形连栋温室等类型，是由相等的双屋面借纵向侧柱相互连通，可以连续搭接，形成室内串通的大型温室。此类温室又被称为现代化温室，每栋可达数千或上万平方米，框架采用镀锌钢材，屋面用铝合金材料做桁条，覆盖物可采用玻璃、玻璃钢、塑料板材或者塑料薄膜，冬季通过热水、蒸汽或者热风加温，夏季采用通风与遮阳相互结合的方法降温。整栋温室的加温、通风遮阳和降温工作可全部或部分计算机控制。 3.高压灭菌锅、超净工作台等都是组培室必不可少的仪器和设备，只有科学正确的学会它们的使用方法，才能确保组培的成功。三、 主要材料、仪器、试剂材料：各种植物材料仪器：分析天平介绍: 精确度达0.0001g，用于称量微量元素、植物生长调节剂和一些高精确度的试验品。电子天平一般采用应变式传感器、电容式传感器、电磁平衡式传感器。应变式传感器，结构简单、造价低，但精度有限。在2009年前不能做到很高精度；电容式传感器称量速度快，性价比较高，但也不能达到很高精度；采用电磁平衡传感器的电子天平。其特点是称量准确可靠、显示快速清晰并且具有自动检测系统、简便的自动校准装置以及超载保护等装置。厂家：上海奔普仪器科技有限公司价格：6500元使用方法：1、 将天平置于稳定的工作台上避免振动、气流及阳光照射。2、 在使用前调整水平仪气泡至中间位置。3、 电子天平应按说明书的要求进行预热。4、 称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。5、 经常对电子天平进行自校或定期外校，保证其处于最佳状态。6、 如果电子天平出现故障应及时检修，不可带“病”工作。7、 操作天平不可过载使用以免损坏天平。8、 若长期不用电子天平时应暂时收藏为好。注意事项:一、 电子天平的心脏一重力电磁传感器簧片（一般共有六一八片细而薄，极易受损，且天平的精度越高，其重力传感簧片也越薄，所以在使用中应特别注意加以保护，不要向天平上加载重量超过其称量范围的物体，绝不能用手压称盘或使天平跌落地下，以免损坏 天平或使重力传感器的性能发生变化，另外称量一个物体以特别是较重的物体一般不要超过30秒钟搬动和运输时应将称盘及其托盘取下来。二、 电子天平实际上是测量地球对敞在称盘上的物体的引力即重力的仪器，而由于地球径纬度的不同，各地的重力加速度（9-9. 8m2/s并不相同,在使用当地其称量准确度取决于是否进行了正确的校正和校正砧码的精度，假如您发现在广州经校正好的天平，在当地称重有一定误差，这并不表示天平有任何故障请按各型号电子天平说明书介绍的方法用计量部门认可的标准砧码进行校正即可进行准确称量。三、电子天平的校正机构一般分三大类：全自动校正：内合标准砧码和电机伺服机构，只需按一个功能键即可在数十秒钟内完成校正，一般新型的万分之一克精度以上的电子天平均采用全自动校正机构;半自动校正：内装标准砧码但无伺服机构，在进入校正程序后，需要手动加载和卸下校正码;手动校正：天平内没有标准砧码和伺服机构需要手动进入校正程序并外加标准砧码进行校正一般精度较低的天平采用手动校正四、电子天平是一台对环境高度敏感的精密电子测量仪器，使用时应小心操作，安装台面应无明显振动，不要敞在空调口，若这些条件不能满足，应采取一些改进措施如变更使用地点装上防风墨等同时注意要调整底角螺丝使水平指示器的气泡居中。天平未调好水平也是产生称量误差的原因之一。粗天平：介绍：精确度达0.01g和0.1g，用于称量大量元素、琼脂、糖等用量较大的药品。厂家：北京信康亿达公司价格：1680元使用方法：1.要放置在水平的地方。游码要归零。2.调节平衡螺母(天平两端的螺母)调节零点直至指针对准中央刻度线。3.左托盘放称量物，右托盘放砝码（左物右码）。根据称量物的性状应放在玻璃器皿或洁净的纸上，事先应在同一天平上称得玻璃器皿或纸片的质量，然后称量待称物质。4.添加砝码从估计称量物的最大值加起，逐步减小。托盘天平只能称准到0.1克。加减砝码并移动标尺上的游码，直至指针再次对准中央刻度线。5.过冷过热的物体不可放在天平上称量。应先在干燥器内放置至室温后再称（或在特殊器皿中称量）。6.物体的质量 =砝码重量+游码所显示的度数7.取用砝码必须用镊子轻拿轻放，取下的砝码应放在砝码盒中，称量完毕，应把游码移回零点。8.称量干燥的固体药品时，应在两个托盘上各放一张相同质量的纸，然后把药品放在纸上称量。9.易潮解的药品，必须放在玻璃器皿上（如：小烧杯、表面皿）里称量。10.砝码若生锈，测量结果偏小；砝码若磨损，测量结果偏大。高压灭菌锅介绍：高压灭菌锅又名高压蒸汽灭菌锅，可分为手提式灭菌锅和立式高压灭菌锅。利用电热丝加热水产生蒸汽，并能维持一定压力的装置。主要有一个可以密封的桶体，压力表，排气阀，安全阀，电热丝等组成。安全阀：超过额定压力，释放压力；手 轮：旋转罗盘式开启盖门，简单方便（适合于40升以上产品）；压力表：指示压力显示；密封圈：自涨式密封圈；底部活动轮；蒸汽收集瓶：3L，聚乙烯材质（适合于内排式和带干燥型）具备产品医疗器械注册证，每台经过技术监督局严格检测（每台设备配一套检测证书）。厂家：创博环球北京生物科技有限公司价格：8000元使用方法:1.在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。2.加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。3.继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物注意事项1. 待灭菌的物品放置不宜过紧；2.必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；3.灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖；4.已有微电脑自动控制的高压灭菌锅，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。超净工作台介绍：超净工作台(clean bench)是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。超净工作台原理是在在特定的空间内，室内空气经预过滤器初滤，由小型离心风机压入静压箱，再经空气高效过滤器二级过滤，从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断面风速，可以排除工作区原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，以形成无菌的高洁净的工作环境。厂家：上海乔跃电子有限公司价格：9800元使用方法：超净台的优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率 ，预备时间短，开机10分钟以上即可操作，基本上可随时使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需 经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台由三相电机作鼓风动力，功率145260W左右，将空气通过由特 的微孔泡沫塑料片层叠合组 的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“ 有效的特殊空气”，它除去了大于0.3m的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为2430m/min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过 中不受污染。但是万一操作中途遇到停电，暴露在未过滤空气中的材料便难以幸免污染。这时应迅速结束工作，并在瓶上作出记号，内中的材料如处 增殖阶段，则以后不再用作增殖而转入生根培养。如为一般性生产材料， 极其丰富也可弃去。如处 生根过 ，则可留待以后种植用。注意事项：超净台电源多采用三相四线，其中有一零线，连通机器外壳，应接牢在地线上，另外三线都是相线，工作电压是380V。三线接入电路中有一定的顺序，如线头接错了，风机会反转，这时声音正常或稍不正常，超净台正面无风（可用酒精灯火焰观察动静，不宜久试），应及时切断电源，只将其中任何两相的线头交换一下位置再接上，就可解决。三相线如只接入两相，或三相中有一相接触不良，则机器声音很不正常，应立即切断电源仔细检修，否则会烧毁电机。这些常识应在开始使用超净台时就向工作人员讲解清楚，免除不应造成事故与损失。 超净台进风口在背面或正面的下方，金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布，用以阻拦大颗粒尘埃，应常检查、拆洗，如发泡沫塑料老化，及时更换。除进风口以外，如有漏气孔隙，应当堵严，如贴胶布，塞棉花，贴胶水纸等。工作台正面的金属网罩内是超级滤清器，超级滤清器也可更换，如使用年久，尘粒堵塞，风速减小，不能保证无菌操作时，则可换上新的。 超净台使用寿命的长短与空气的洁净度有。在温带地区超净台可在一般实验室使用，然而在热带或亚热带地区，由大气中含有量的花粉，或多粉尘的地区，超净台则宜放在较好的有双道门的室内使用。任何情下不应将超净台的进风罩对着开敞的门或窗，以免影响滤清器的使用寿命。 无菌室应定期用70%酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒，用2%新洁尔灭抹拭台面和用具（70%酒精也可），用福尔马林（40%甲醛）加少量钾定期密闭熏蒸，配合紫外线灭菌灯（每次开启15分钟以上）等等消毒灭菌手段，以使无菌室经常保持度的无菌状。接种箱内部也应装有紫外线灯，使用前开灯15分钟以上照射灭菌，但凡是照射不到之处仍是有菌的。在紫外线灯开启时间较长时，可激发空气中的氧分子缔合成臭氧分子，这种气分有很强的杀菌作用，可以对紫外线没有直接照到的角落产生灭菌效果。由于臭氧有碍健康，在进入操作之前应先掉紫外线灯，后十多分钟即可入内。在超净工作台上亦可吊装紫外线灯，但应装在照明灯罩之外，并错开照明灯的排列，这样在工作时不妨碍照明。若将紫外线灯装入照明灯罩（玻璃板）里面，这是毫无用处的，为紫外线不能穿透玻璃，它的灯管是石英玻璃，而不是硅酸盐玻璃的。 接种室内力求简洁，凡与本室工作无直接关系的物品一律不能放入，以保持无菌状。接种室内的空气与外界空气应绝对隔绝，预留的通气孔道应尽量密闭。通气孔道可设上下气窗，气窗面积宜稍大，需覆上4层纱布作简单滤尘。在一天工作之后，可开窗充分换气，然后再予以密闭。总之，既清洁无尘无菌，又空气新鲜，适宜工作。覆在通气窗上的纱布应经常换洗。但是上述种种措施只是理想的设计方案，往往不易全面做到，其实只严格无菌操作手续，在门窗敞开的室内，有一超净台的保护，接种的污染率仍可控在生产上可以容忍的水准。酸度计介绍：是一种常用的仪器设备，主要用来精密测量液体介质的酸碱度值，配上相应的离子选择电极也可以测量离子电极电位MV值，pH计被广泛应用于环保、污水处理、科研、制药、发酵、化工、养殖、自来水等领域。该仪器也是食品厂、饮用水厂办QS、HACCP认证中的必备检验设备。厂家：青岛得加利电子有限公司价格：2480元使用方法：1、校正：先将仪器斜率调节器调节在100%位置，再根据被测溶液的温度，调节温度调节器到该温度值。2、定位：把复合电极插入仪器。选择一种最接近样品pH值的缓冲溶液，把电极放入这一缓冲溶液里，摇动烧杯，使溶液均匀。待读数稳定后，该读数应是缓冲溶液的pH值，3、测量：经过pH标定的仪器，即可用来测定样品的pH值。用蒸馏水清洗电极，用滤纸吸干电极球部后，把电极插在盛有被测样品的烧杯内，轻轻摇动烧杯，待读数稳定后，就显示被测样品的pH值。测量完毕套上保护帽，帽内放少量补充液（3mol/L的氯化钾溶液），保持电极球泡湿润。试剂：各种大量元素、植物生长调节剂、各种有机物质。四、实验步骤1.在教室的带领下，参观学校植物组织培养实验室，并设计出植物组织培养实验室的组成。2.完成植物组织培养实验室常见仪器的使用方法。3.培养瓶和相关用具的清洗准备。4.植物材料的准备。五、试验讨论及思考题解答1.请绘制出植物组织培养实验室的结构示意图，并说明各分室的结构及功能。药品储藏室：主要用于存放各种化学药品，要求室内干燥、通风、避光、应配制、备药品柜、冰箱等。各类化学试剂应按要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱内保存，有毒药品应按规定存放和管理。洗涤室：用于玻璃器皿、用具及实验用具的洗涤、干燥和存放;；培养材料的预处理与清洗：组培苗的出瓶、清洗与整理等。要求有电源、自来水和水槽，上下水道畅通，排水良好，地面耐湿、防滑，便于清洁。应配备工作台、烘箱、晒瓶架、周转筐、毛刷等。培养基配制室：用于培养基的配制，还可以分为称重分室和配制分室。药品称量需配制各种规格的天平，包括普通天平和分析天平。培养基配制需要配备工作台、蒸馏水器、电炉（电饭锅或微波炉）、水浴锅、磁力搅拌器、过滤装置、酸度计、分注器、各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液管及移液管架以及贮藏母液的冰箱、移动式载物台（医用小推车）、周转筐等。灭菌室：用于培养基、器皿、用具、及其它物品的灭菌。灭菌室根据工作量的大小决定其面积的大小，一般控制在3050。要求、通风、明亮，墙壁和地面应防潮、耐高温。应配置高压电源和排水设施、高压蒸汽灭菌装置、干热消毒柜或烘箱、细菌过滤装置及移动式载物台、周转筐等。培养室：用于对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养。培养室内放置培养架，方便操作，.并充分利用空间。培养室的大小可根据生产规模和培养架的大小、数目及其他附属设备而定，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。可采取多室设计方式，每个培养是面积不宜过大，约1020，以满足不同培养材料对环境条件控制的不同要求，也便于对同室内环境条件的均匀控制。室内天花板和内墙最好用塑钢板或瓷砖装修，地面铺设水模式或瓷砖，以保持室内明亮、平整，并方便清洁和消毒；室内还要安装紫外灯，定时进行杀菌处理。培养室内需要安装空调，以控制室内温度，一般要求保持在2027之间，低于15或高于35对植物的生长不利。培养室的光源一般使用白色日光灯，光周期可采用自动定时器来控制，光照强度一般控制为10006000lx，每天光照时间薇1016h。需要大量的暗培养时可以增设暗培养室，或使用暗箱培养。培养室内的相对湿度保持在7080为宜。湿度过高，容易使培养及污染；湿度过低，容易使培养基失水变硬，影响培养物生长。在梅雨季节可使用除湿机人工除湿，干燥季节可利用加湿器来增加湿度，也可采取防治水盆的方法来调节湿度。2.请详细说明高压灭菌锅、超净工作台的操作要点。答：高压灭菌锅的操作要点：首先，检查锅内蒸馏水量是否充足，第二，检查个个阀门及开关是否工作正常。第三，将待灭菌的物品用一层牛皮纸或两层报纸包好，一定要包完整！放入锅内，物与物之间一定要有空隙。第四，盖好锅盖，螺母对称拧紧，打开放气阀，关闭安全阀。第五，打开电源观察放气阀是否有