【毕业学位论文】（Word原稿）花生青枯病抗性的分子标记研究作物遗传育种硕士论文

密级 ： 论文编号 ： 中 国 农 业 科 学 院 硕士学位论文 花生青枯病抗性的分子标记研究 A .) I .) I 摘 要 花生 (.)是世界上重要的经济和油料作物之一，也是许多发展中国家植物油和蛋白质的重要来源。我国是世界上最大的花生生产、消费和出口国，花生生产的发展对于增加农民收入和保障国家食物安全具有重要意义。由 起的细菌性青枯病是花生生 产中重要的病害之一，我国常年有 40 万 育和种植抗病品种是防治这一病害最为经济有效的途径。国内外在花生抗青枯病育种中已取得一定进展，抗病品种的推广起到了良好的防治作用。但是，我国的青枯病区普遍是花生低产区，抗青枯病品种在抗性水平、抗性稳定性、产量潜力及品质性状等方面还存在诸多缺陷，其原因与已有育种研究中所选用抗病亲本的遗传基础狭窄有关，同时现有抗性鉴定与筛选技术主要依靠田间试验，受环境影响较大，且费时费力，使近十多年来抗病育种进展缓慢。因此，有必要提高青枯病育种中亲本选配的针对性，丰富亲 本材料的遗传背景，同时建立青枯病抗性筛选的新方法。在此背景下，本研究对抗青枯病花生种质进行了 态性分析，明确了它们在分子水平上的分化和多样性，同时利用抗、感品种杂交获得的近交重组系群体（ 过抗性鉴定和 态性分析，在国内外首次获得了与花生青枯病抗性连锁的 要研究结论如下： 1、建立了 24 份不同类型抗青枯病花生种质的 纹图谱，仅用 6 对引物即可有效区分这些种质材料（ 为抗病种质的分子鉴别奠定了基础。 2、在分子水平上明确了我国抗青枯病花生种质的抗病种质的遗传多样性。发现龙生型与珍珠豆型在分子水平上存在类型间的系统差异，筛选到两个遗传差异较大的珍珠豆型高抗种质“远杂 9102”和“ 89可以作为抗青枯病育种的核心亲本。 3、利用“中花 5号远杂 9102”杂交组合的 国内外首次获得了与花生青枯病抗性基因连锁的两个分子标记“ “ 根据群体抗性鉴定结果，结合 析数据并经两点测验，明确这两个标记与抗性基因间的交换值分别为 换算后，两个标记与抗性基因间的遗传距离分别为 4、用 10 个抗青枯病花生种质对上述两个分子标记的有效性进行了验证。在 7个抗病种质中检测到标记 5个抗病种质检测到标记 步明确了两个标记在多数抗青枯病花生种质的鉴定和的应用价值。 关键词：花生， 枯病，分子标记 .) is an in It is an of in is in of of is s is is 00,000 is to of to in to in on in in in is It is to of In of to of a 102”. as 1. 4 to of 4 be by 4 be by 12a at 2. In to on on in At is of in to “102” 89 be as 3. in to in 3by SA 102 ”. 134. to to of 3 1 be in in 录 第一章 文献综述与研究背景 1 内外研究现状 1 生产业发展现状 1 生青枯病及其防治概述 2 青枯病种质收集与鉴定 3 生青枯病的抗性遗传 4 生青枯病的抗性机制 5 生抗青枯病育种研究现状 5 生抗青枯病育种存在的问题 5 子标记技术及其在作物育种中的应用 6 究目的与意义 9 第二章 花生抗青枯病的遗传多样性 10 料与方法 10 青枯病花生材料 10 剂及仪器 10 法 11 验设计 15 生种质抗性鉴定 15 生抗青枯病种质的 析 15 据统计与分析 16 果与分析 16 青枯病花生种质的鉴定 16 青枯病花生种质的 析 16 第三章 花生青枯病抗性的分子标记 21 料与方法 21 体构建材料 21 法 21 验设计 21 本材料一致性的检验 21 组近交系抗性的鉴定 22 选显示亲本间多态性的 物 22 抗池和感池的构建及抗感池间多态性引物的筛选 22 生青枯病抗性连锁的分子标记 22 据统计与分析 22 果与分析 22 本材料的一致性 22 本材料的抗性 23 组近交系的青枯病抗性鉴定结果 23 选 态性引物 29 池和感池的构建及抗感池间多态性引物的筛选 29 生青枯病抗性连锁的分子标记 30 第四章 花生青枯病抗性分子标记的验证 32 料与方法 32 料 32 法 32 果与分析 32 第五章 结论与讨论 34 于花生抗青枯病种质的遗传多样性 34 生抗青枯病种质 纹图谱的构建 34 生抗青枯病育种亲本的选择 34 于花生青枯病抗性的分子标记 35 记及其在花生上的应用潜力 35 记的转化与应用 35 于重组近交 系的构建 36 论 36 参考文献 37 致谢 43 作者简历 44 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述与研究背景 1 第一章 文献综述与研究背景 内外研究现状 生产业发展现状 花生 (.)是世界范围内重要的 油料和经济作物之一，是发展中国家重要的食用植物油和蛋白质来源。目前全球花生年种植面积 2400万公顷，年总产 3400万吨左右。花生起源于南美洲，目前在各大洲均有种植，尤其在热带和亚热带的干旱及半干旱地区种植相当普遍，在全球北纬 40至南纬 40之间的广大地区，只要热量充足，均可种植花生。亚洲是 20世纪花生种植规模最大的地区，占全球花生种植面积的 70左右，其中中国和印度是主要的花生生产国，占本地区花生种植规模的 90，其他亚洲国家种植花生较多的有印度尼西亚、缅甸、孟加拉国和越南等。非洲的花生种植面积仅次于亚洲 ，尼日利亚、塞内加尔、苏丹和南非等是主要的花生生产国。美洲花生种植规模居各大洲第三位。在北美洲，美国是主要的花生生产国，在南美洲，阿根廷和巴西是花生主要生产国。欧洲多数地区不适合种植花生，仅在保加利亚、希腊、西班亚和南斯拉夫等南部地区有少量种植。澳大利亚是澳洲花生主要生产国。 我国是世界花生生产大国，也是花生消费大国，在全球花生生产中举足轻重。据中国农业年鉴（ 2004）和农业部（ 2004）统计数据显示， 2003 年世界年收获面积为 公顷，年均总产为 吨，平均单产约为 斤 /公 顷，其中同期印度年均种植面积约为 830 万公顷，占世界花生面积的 居首位；总产 750万吨左右（占世界总产 ，居第二位。我国花生种植面积为 公顷，仅次于印度居世界第二位，占世界花生面积的 但年均总产 1342万吨，居世界首位，占世界花生总产的 单产比世界平均水平高一倍并已整体赶上美国的花生生产水平。自 1993 年以来，我国花生总产一直稳居世界第一位，因此就总产而言我国是世界最大的花生生产国。 花生在我国各省、市、自治区均有种植，但主要分布在山东、河南、河北、 安徽、广东、广西、四川、江苏、湖北、湖南等各省，其中山东、河南两省的种植面积在 90 万公顷以上。自二十世纪 80年以来的 20 多年中，我国花生生产得到了稳步发展。 随着我国农业产业结构的调整，我国花生种植规模将进一步扩大； 花生需求量的加大和经济效益的提高，这也是我国花生生产发展的主要原因。 花生在我国国民经济和社会发展中具有重要的地位和作用。花生是重要的食用植物油和蛋白质来源，我国花生总产中有 50 于榨油（与全球花生榨油比率相近），是花生消费的首要用途，占我国植物油脂的比率为 17，仅次于菜籽油和大豆油， 居第三位。长期以来，我国植物油脂供应缺口较大， 20 世纪 90 年代国内油脂消费量的三分之一左右依赖进口，并且随着我国人民生活水平的不断提高和食物结构的改善，花生的消费比率将呈上升趋势。花生对我国食用蛋白的供给同样具有重要作用，花生仁蛋白质含量为 28，我国花生总产中有 32左右用于直接食用和食品加工，平均年食用花生（仁）消费量在 400 万吨以上，折合优质蛋白质 80 万吨，由于我国也是蛋白质供给缺口很大的国家，油料蛋白质进口量也逐年上升。花生生产的发展对于增加我国蛋白质供给也具有重要作用。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述与研究背景 2 花生在增加农民收入和出口创 汇中具有重要作用。近几年来，随着花生单产水平的提高，花生在大宗农作物中的比较效益较高，同时受国内油脂供应短缺的影响，花生的市场价格一直较高且较为稳定，使花生的生产效益普遍高于其他大田作物，在大宗作物中单位面积收益居首位，对增加农民收入有重要意义。花生是我国出口量最大的油料作物，近五年来，我国花生出口量保持在 30国内花生总产的 5，占世界花生贸易量的 40以上，长期以来，我国食用型花生仁的国内市场平均价格比美国花生价格和国际市场价格低 20以上，具有相对较强的国际竞争力，是我国加入 调整农 业结构、增加农民收入和参与国际竞争的优势作物。 生青枯病及其防治概述 生青枯病的分布与流行 花生青枯病是由 起的细菌性枯萎病，在花生的细菌病害中，青枯病的经济重要性居首位。花生青枯病是一种典型土传维管束病害，在自然条件下，病原菌从根部侵入花生植株，通过在根和茎部维管束木质部增殖和一系列生化作用使导管丧失输水功能而突发性死亡。刚发病的植株仍可保持绿色，根或茎基部横切面可溢出白色菌液，这 是青枯病的一大诊断特征。花生青枯病于 1905 年在印度尼西亚首次报道，随后在 20多个国家均有过发生和流行的报道。目前，主要以中国、印度尼西亚和越南危害较严重。 我国关于花生青枯病报道始见于 30年代后期。目前，我国广东、广西、海南、四川、湖北、江西、湖南、浙江等 17 个省（自治区）均有该病发生，每年全国实际病地面积在 40 万 要集中在广东、广西、海南、福建和长江流域。在上述病区，种植感病品种时，一般发病率在10%减产 20%以上；重病区发病率可在 50%以上，严重病区可高达 100%，导致完全绝收。 从世界范围来看，花生青枯病在地域分布上是相对孤立的，不如蕃茄、马铃薯等作物青枯病广泛，该病在同一地区，病地与非病地相距甚近而分界明显。 花生青枯病的流行与土质、温度、降雨等有很大关系。 1986)和 983)在温室研究表明重粘土有利于病害发生； 候绪友（ 1990）等报道土壤容重与发病率呈显著负相关，而土壤非毛管孔酸度 和土壤中的空气量与发病率呈正相关。 在自然病区，气温日均稳定在 2O以上、 5厘米土层温度稳定在 25以上约 5一 8天，田间花生植株上即开始出现病症 。 旬平均气温在 25 以上、土温在 3O左右，发病进到高蜂。一般土温比气温对发病的影响大。在土温、气温均适于发病，又逢久旱降雨，雨后突然转晴时，病害发生严重。相反，长期多雨则病害发生缓慢。 此外土壤含菌量、品种的抗性、地形地貌、种植制度、栽培措施等也对病害流行有一定影响。 枯菌特性与传播 植物青枯菌寄主植物范围极广，是除土壤农杆菌外侵染植物种类最多的一个病原细菌，可以侵染拟南芥、蕃茄、马铃薯、花生、辣椒等 200多种植物。目前青枯菌共划分为 5个小种， 5个生物型。侵染花生的青枯菌均属 1号小种，亚洲花生菌系为生物型 3和 生物型 4，美洲的花生菌系为生物型 1。李文溶等（ 1987）将全国各地收集到的 36个菌株分为 7个致病型，其中 和 型是优势致病型；陈晓敏（ 2000）研究表明福建花生青枯菌致病型为 和 型，其中 型是优势致病型。中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述与研究背景 3 但目前还没有发现青枯菌株与花生品种间有明显的专化性存在。 花生青枯菌在土壤中栖息，近距离由土壤、流水以及农具、人畜、昆虫等传播（ 李文溶， 1990），远离疫区的新病区的病原菌来源有以下可能： (1)病原菌早已存在，只是以前因数量少或环境不适而未发病和检测到； (2)病原菌发生自发突变或诱发突变，使其从无毒性变为 有毒性菌系； (3)外地传入。 从病株上收获的花生荚果，种皮甚至种子内部都可分离到有活性的青桔菌。 据 1990)试验，从病株上收获的带菌种子播种 (消毒土壤 )后，可在 2 4周内出现青枯病病症。 生青枯病防治 目前花生青枯病防治措施主要有以下几种方法：化学防治、轮作、生物防治、培育和选用抗病品种。作为土传病害花生青枯病很难用化学方法防治，同时化学方法容易造成环境污染；较长周期的轮作有一定效果，但受耕地面积的限制；生物防治也是重要的方法，并取得一定效果， 福建农科院研究员刘波博士 （ 2003） 获得了具有自主知识产权的植物青枯病生防菌株 8098 75 85 。由于花生青枯病在花生各个时期（苗期、初花期、盛花期等）均有发生，应用化学防治和生物防治，增加费用。因此培育和选用抗青枯病花生品种仍是当前最重要的防治方法。 青枯病种质的收集与鉴定 生青枯病抗性的鉴定方法 目前花生青枯病鉴定方法主要有两种：田间自然鉴定和人工接种鉴定。 1)田间自然鉴定：在自然病区选择青枯病历年感病品种发病率在 70以上的地块作为病圃，同时病圃土壤质地、肥 料和发病程度均匀一致。田间种植可以是单行区，也可以是多行区，一般单行区每隔 10行种植典型的抗病品种和感病品种作为对照，多行区每隔 10行设置双对照（抗病品种和感病品种各一个）。将要鉴定的材料单粒播种，也可双粒播种。出苗后发病前调查清楚各区的基本苗数，并定期调查记载田间发病情况，注意辨别枯萎症状，剔除根腐、茎腐病造成的死苗，以成活植株百分率划分抗性级别，抗性分级如下： 抗病（ R）：抗病率在 80以上； 中抗（ 抗病率在 65 间； 感病（ S）：抗病率在 35 间； 高感（ 抗病率在 35以下。 2）人工接种鉴定：从自然病圃采集新鲜的病株分离细菌，用三氯苯基四氮唑（ 养基挑选中心粉红色、边缘乳白色的菌落，再转接到斜面培养基上培养 48 小时（ 28）。用无菌水冲洗菌落配制成 6亿 /毫升左右的菌液，浸种 20 分钟后播入沙土，及时浇水保证湿度。设置典型抗病品种和感病品种作为对照。出苗后调查记载基本苗数，定期调查发病情况。在感病对照发病率在 80以上，抗病对照的发病率小于 20的情况下，以植株存活率划分抗性级别，还可以根据症状分级来区分不同材料的抗性相对差异。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述与研究背景 4 生青枯病 抗性种质 自从 20 世纪初印度尼西亚首次发现抗青枯病花生种质以来，印度尼西亚育成了 1并以此创造了一批抗病资源，国际半干旱所（ 保存的一些由世界各地收集来的地方品种在印度尼西亚进行了抗性鉴定，并获得了一些新的资源。我国花生抗青枯病筛选鉴定工作最早在 20 世纪 30年代进行， 70年代中期（ 1974中国农业科学院油料作物研究所组织全国协作攻关，对当时收集到的花生品种进行抗性鉴定，筛选到以“协抗青”为代表的几个疏枝亚种抗源。到 2000 年，世界范围内鉴定出高抗青枯病的花生地方 品种超过 120 份，二倍体野生花生中也发现 20 多份抗青枯病材料。我国段乃雄（ 1993、 1994），姜慧芳（ 1998）先后 对 5700 份花生资源进行抗青枯病筛选 ， 并 筛选出高抗青枯病资源 102 份 。唐荣华（ 2000）对 27 份野生花生进行了抗性鉴定，筛选到 7份高抗青枯病的资源。但是迄今尚未发现对青枯病表现免疫的花生材料，所有抗性材料在高病害压力下均出现植株枯死或局部病状。 抗青枯病 种质的创新 主要来源于现有的栽培品种和野生资源，一般利用现有的抗性资源与目前主栽品种杂交，转移其抗性，从而获得抗青枯病新材料；也可以将野生花生 抗病基因通过远缘杂交、组织培养、转基因等技术导入栽培品种，如河南省农科院利用野生种 过远缘杂交育成了花生抗青枯病新品种远杂 9102和远杂 9307。 枯病的抗性遗传 大量研究表明花生青枯病抗性是由寡基因控制，但存在微效基因的修饰作用。如珍珠豆型花生的抗性受 2 对主效基因控制（廖伯寿等）；珍珠豆型和多粒型花生抗源对青枯病的抗性表现为部分显性（廖伯寿等， 1986）或隐性（王玉莹等， 1985）；而龙生型花生的青枯病抗性也表现为部分显性，其显性程度比蔬枝亚种抗源高，并且龙生型存在明显细 胞质效应（廖伯寿等， 1994），上述遗传特性的产生可能与龙生型花生的生长习性有关，一般而言，蔓生、晚熟的花生材料发病潜伏期长，发病速度慢，容易只表现局部症状，而直立、早熟的珍珠豆型花生或多粒型花生则潜伏期短，发病速度快。杂交实验表明，利用密枝亚种与蔬枝亚种的抗源杂交在 4代分离出感病家系，说明两个亚种的抗病基因存在抗性基因或等位点的分化（廖伯寿， 1995）。由于我国龙生型花生中抗病基因型频率远远高于其它三大类型，而且抗病的龙生型花生均来自病害重而病原菌分化较大的南方湿热地区，因此龙生型花生存在青枯病抗 性遗传基础分化也是可能的。 而在拟南芥上发现了隐性单基因 制青枯病抗性（ 2001），同时也发现了拟南芥抗青枯病材料 青枯菌株 抗性为单一显性位点（ 2002），这可能是研究材料不一样造成的，不同材料对青枯病抗性不一样。李海涛（ 2002）在茄子研究证明不同材料抗性不一样，抗病材料 由 1基因控制，其中一对基因是主效基因，而抗病材料中 2对基因是主效基因。 封林林 （ 2003） 结果表明，茄子对青枯病的抗性遗传规律 符合 “ 加性 显性 ” 效应模型。遗传效应中同时存在加性效应、显性效应和 细胞质 效应，但以加性效应为主。茄子对青枯病的抗病性表现隐性，感病性表现部分显性。 迄今关于花生、拟南芥、 茄子 等作物青枯病抗性遗传表现有较大差异，与所涉及试验材料的遗传背景有关，对青枯病抗性遗传也还需进一步深入研究。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述与研究背景 5 生青枯病的抗性机制 关于花生青枯病抗性机制，国内外尚缺乏较为系统的研究。单志慧对抗感花生品种接种青枯菌后，用 现抗感花生品种都能检测到青枯菌，只是青枯菌的浓度不一样，这也说明花生抗青枯 病机制存在“抗侵入”和“抗扩展”两种机制。“抗侵入”主要与花生根系的形态结构和根系表皮的通透性有关，在疏枝亚种的抗病品种与感病品种已发现这种差异。 迄今尚未发现对青枯病表现免疫的花生材料，所有抗性材料在合适的病害处压力下均出现植株枯死或局部病状，这也说明花生抗病品种和感病品种受 青枯菌侵染是普遍的，“抗侵入”是一个只具相对差异的抗性成分，而“抗扩展”应是更重要的抗性成分。 植物对病原菌侵入的抗性是寄主在形态结构和生理生化等方面在时间和空间上的综合表现。寄主植物的抗病机制包括预存性被动机制以及被病原菌侵染后诱发产 生的主动防卫机制。 抗病和感病的重要区别就在于寄主植物对病原侵入识别的时间性和激发寄主植物防卫机制的速度和有效性，感病植物由于防卫反应慢且信号弱，最终导致病原的蔓延而使植物受到严重损害。 而这些防卫反应包括酚类化合物的增加、植保素的合成、某些酶活性的提高以及脯氨酸的积累等。 彭忠（ 1994）在研究花生青枯病抗性的生化机制中发现多酚类化合物、 化酶、 生接种青枯菌后，在抗病品种中多酚类化合物含量增加， 感病品种则相反。同功酶系统也有显著变化。抗 病 品种的过氧化物酶带数增多且活性增强 ,酯酶带则有部分消失和新带出现 ,而感病品种中过氧化物酶带变化很小 , 单志慧 (1995)研究也表明 抗性品种酯酶带有大量新带出现。 廖伯寿（ 1997）研究表明花生中也遍存在不表现症状的潜伏侵染现象，不同品种抗性差异表现在对青枯菌在植物体内由下向上运动的限制能力不同，这与 1994）、 1992）在存活率很高的蕃茄抗病品种中研究结果相似。 花生青枯病抗性基因的研究仅姜慧芳（ 2003）用 的研究。主要是由于先前的研究表明栽培种花生在分子水平上差异贫乏，从而延迟了分子标记在花生上的应用。 生抗青枯病育种研究现状 印度尼西亚育成世界上第一个花生抗青枯病品种 1，随后又育出 花生品种（ 1986）。我国也在上个世纪 80 年代中后期、 90 年代前期先后育成鲁花 3号（ 1984）、鄂花 5号（ 1985）、粤油 92（ 1986）、桂油 28（ 1987）、中花 2号（ 1990）、粤油 256（ 1991）。由于我国的花生青枯病面积比较大，分布 地域广，这些适应不同生态区的抗病品种的育成和利用显著地克服了过去病区种植感病时的大面积枯死甚至绝收的问题，对当时的花生发展起了决定性单株生产力作用。 90 年代后期也培育出许多抗青枯病的品种或品系，如中花 6号、粤油 200（天府 11号）、远杂 9102和远杂 9307等已经在生产上大面积应用。 生抗青枯病育种存在的问题 1）花生抗青枯病亲本的遗传基础狭窄。世界范围内已经鉴定出许多抗青枯病花生种质，但是大多数未应用到育种上，目前在我国应用于育种主要亲本是协抗青、台山珍珠和台山三粒肉等及它们衍生出来的材料，导 致花生抗青枯病的抗源遗传基础比较狭窄，国外也存在同样的问题。中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述与研究背景 6 抗性资源遗传基础狭窄，限制了抗病育种的产量的持续提高，已有的研究表明，花生在单株荚果数、荚果产量、籽仁大小和出仁率等经济性状上都表现出杂种优势。从遗传上来说，扩大花生青枯病育种的遗传基础将有助于选择差异较大的亲本材料，提高花生产量。而仅从形态学选择亲本，由于形态学性状是基因与环境的互作的结果，这样选择的亲本遗传异质性不一定大。若从分子水平上选择亲本，将有助于减少环境因素的影响，从而更容易选择到遗传异质性大的亲本。 2）缺乏有效的抗性鉴定手段。田间自 然发病鉴定是以最后植株的存活率计算抗性。由于病圃的土壤质地、肥料和发病率不可能均匀一致，同时不同年份间的发病率也不一致，这就导致了田间自然鉴定的误差。印度尼西亚鉴定的抗青枯病材料，经国际半干旱所（ 次在当地鉴定时表现不抗，在我国引进的抗青枯病资源也存在这个问题。 多年多点试验鉴定虽可以解决这个问题，但是花生繁殖系数比较低，杂交早代不可能有大量的花生种用来鉴定青枯病抗性。 常规的花生育种虽然可获得带有目标基因的抗性材料，但同时也携带其它不必要的基因，许多抗病品种的产量并不高，这与抗病品种抗性基因 连锁的其它基因与产量呈负相关有关；同时常规抗病育种周期长、工作量大和抗病鉴定不稳定。随着 生青枯病的抗性鉴定和遗传改良研究正在向分子水平扩展。分子标记技术在花生抗青枯病育种上的应用，将缩短育种周期、减少工作量和增加抗性鉴定的稳定性。 子标记技术及其在作物育种中的应用 子标记技术发展 分子标记是在分子生物学基础上发展起来的新一代遗传标记，与原有的形态标记、细胞标记、生化标记不同，分子标记是建立在对 基因的直接反应。分子标记能对各个发 育时期的生物体进行检测，不受基因表达与否及环境的影响。利用获得的与目的基因紧密连锁的分子标记进行辅助选择育种，为克服常规抗性育种由于采用接种或自然胁迫进行抗性鉴定而产生的实验结果准确性、重复性差，育种周期长等弱点提供了强有力的技术手段。目前在多种作物上已经获得了大量的与作物抗性基因紧密连锁的分子标记，部分已开始应用于分子辅助选择育种。 目前，国内外已经开发出十几种 据技术原理的不同，分子标记可分为四大类： 1）基于 交的 限制性片段长度多态性（ 2）基于 3）基于 4）基于单核苷酸多态性的 记，如 下主要简述在作物遗传育种中广泛应用的 英文缩写，由 974 年创立，是最早的分子标记技术。 1980 年 1988年由 体间的核苷酸差别表现在对某种限制性核酸内切酶的结合点和切点不同，酶切的结果表现在个体间的 段长短不同，电泳时即出现不同的谱带。 失、易位、倒位、插入等多态性类型，多态性水平中等，共显性遗传，可靠性高。 英文缩写。 1990年由 第一章 文献综述与研究背景 7 等提 出，是建立在 础上的第一个分子标记技术。 于双引物在整个基因组结合位点间存在长度上的差异，经 增后，可用电泳检测到这种差异，表现为一种多态性。 术继承了 优点，同 比，具有操作简单、 量少，灵敏度较高、检测容易和不需放射性等特点，但 以区分杂合和纯合基因型，易受反应条件的影响，结果重复性差。 写，又叫微卫星 由 1991 年提出，其原理是根据真核生物基因组 广泛存在着由 2每个重复单位的数量可能不完全相同，因此形成多态性，一般 过设计特异引物，进行 以反映不同个体间的多态性。 基础，兼具 写， 1993年由 两种限制性内切酶切割基因组 到分子量大小不等的片段，然后在片段两端接上特定的接头，用与接头相匹配的引物进行 电泳，可检测到分子量大小不等的扩增产物，凝胶电泳检测便可反映出多态性。与其他 有多态性丰富、 量少、无须预知基因组序列信息、多态性高、稳定性好等优点，对于那些开展分子研究较少，基因序列未知的作物，尤其具有先进性和实用性。 995 年问世以来，在研究生物的遗传多样性、图谱构建、基因定位、品种鉴定、分子辅助育种 等领域得到了广泛的应用，涉及水稻、小麦、玉米、棉花、大豆、油菜等主要农作物。 研究的范围和深度远远落后于以上主要农作物。 基因标记中的应用 利用获得的与目标性状紧密连锁的分子标记进行辅助选择育种，为克服常规抗性育种中因采用接种或自然胁迫进行抗性鉴定而产生的实验结果准确性和重复性差、育种周期长等弱点提供了强有力的技术手段。近年来， 在大豆、大麦、马铃薯、水稻、小麦、玉米等重要农 作物中开展研究外，在芥菜、黄瓜、罗卜、葡萄、向日葵等小作物中也有报道，涉及的抗性基因包括细菌、真菌、病毒等基因，针对抗逆性如耐酸性、耐涝性基因的研究也有报道。 目前，根据利用群体的不同，采用 离法和分离群体分组分析法（ 些近等基因系只有目的基因不同