血液常用检查一.ppt

血液常用检查 一 红细胞计数二 血红蛋白测定三 红细胞形态学检查四 白细胞计数五 白细胞分类计数六 白细胞形态学检查七 血小板计数八 血小板形态学检查 2020 4 9 1 红细胞计数 一 血红蛋白测定 二 红细胞形态检查 三 第二节血液常用检查 一 2020 4 9 2 教学目标 掌握红细胞计数 血红蛋白方法熟悉红细胞形态特点了解红细胞计数 血红蛋白测定临床意义 2020 4 9 3 红细胞的发育过程 造血干细胞 早幼红细胞 中幼红细胞 晚幼红细胞脱核 网织红细胞 成熟红细胞 红系祖细胞 原始红细胞 有丝分裂 48h 2020 4 9 4 成熟红细胞 铁 铁代谢原卟啉 胆色素代谢珠蛋白 蛋白质代谢 衰老红细胞 红细胞的发育过程 120天 2020 4 9 5 6 检测方法1 手工显微镜法2 血液分析仪法 一 红细胞计数 2020 4 9 6 7 1 手工显微镜法 1 血液分析仪的校正 2 适用基层医疗单位和分散就诊患者 3 费时 重复性差 准确性取决操作者技术水平2 血液分析仪法操作简便 重复性好 适用大批量集中检测准确性取决于仪器性能及工作状态 定期校准 质控 方法学评价 2020 4 9 7 手工显微镜法 8 定义 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后 滴入改良Neubauer计数板 在显微镜下计数一定范围内的红细胞数 经换算即可求得每升血液中的红细胞数 2020 4 9 8 9 改良牛鲍计数板 计数板 2020 4 9 9 2020 4 9 10 压线细胞的计数原则 数左不数右 数上不数下 2020 4 9 11 12 血细胞计数室各计数区的计数对象 范围和单位换算 计数区域计数细胞种类换算方式 以细胞个数 L计 四角4个大方格白细胞N 4 10 稀释倍数 106四角及中央5个中方格红细胞 血小板N 5 10 稀释倍数 106两侧计数室四角及中央嗜酸性粒细胞 体N 稀释倍数 1065个大方格共10个大方格腔液细胞 精子 2020 4 9 12 13 红细胞稀释液组成与作用 稀释液组成作用备注 Hayem液NaCl Na2SO4 HgCl2调节渗透压 增加红细胞悬浮性和防腐作用 高球蛋白血症时 蛋白质沉淀致红细胞凝集 枸橼酸钠稀释液NaCl 枸橼酸钠 甲醛NaCl和枸橼酸钠调节渗透压 枸橼酸钠具抗凝 甲醛防腐 生理盐水生理盐水急诊时用1 甲醛生理盐水甲醛 生理盐水急诊时用 2020 4 9 13 14 1 准备计数板2 加稀释液 2ml3 加血 10 l混匀4 充池5 计数6 计算 红细胞数 N 5 25 10 200 106 L结果报告方式 X X 1012 L 红细胞计数操作 2020 4 9 14 15 成年 男性 4 5 5 1012 L女性 3 5 5 0 1012 L新生儿 6 0 7 0 1012 L 参考值 2020 4 9 15 16 1 分析前质量控制患者准备 标本采集 存储温度和时间2 分析中质量控制计数误差 技术误差和固有误差 白细胞影响3 分析后质量控制结合临床资料 质量控制 2020 4 9 16 血红蛋白 血色素 Hb或HGB 组成 二 血红蛋白测定 珠蛋白 4条 种属特异性亚铁血红素 4个 无种属特异性 2020 4 9 17 亚铁血红素结构示意图 O2 2020 4 9 18 HbA 2 2成人占95 以上 HbA2 2 2成人约占2 3 HbF 胎儿Hb 2 2成人1 以下 每个Hb分子由2条 类肽链和2条非 类肽链组成 每条珠蛋白肽链含有1个亚铁血红素 2020 4 9 19 HbO2 氧合血红蛋白 各种血红蛋白衍生物 据铁原子第六配位键的结合情况 Hbred 还原血红蛋白 HbCO 碳氧血红蛋白 Hi 高铁血红蛋白 SHb 硫化血红蛋白 主要成分 少量 与氧结合 未结合 与CO结合 Fe2 Fe3 与S结合 2020 4 9 20 21 氰化高铁血红蛋白 HiCN 测定法十二烷基硫酸钠血红蛋白 SDS Hb 法叠氮高铁血红蛋白 HiN3 法碱羟血红蛋白法叠氮高铁血红蛋白测定法溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法 CTAB 检测方法 2020 4 9 21 一 原理 Hb CN 氧化 HiCN为棕红色 最大吸收峰540nm 根据标本的吸光度可知Hb浓度 HiCN Hi 注 硫化血红蛋白 SHb 不能被转化 2020 4 9 22 氰化钾0 05g高铁氰化钾0 2g磷酸二氢钾0 14g非离子表面活性剂1 0ml蒸馏水加至1000ml 二 试剂 HiCN转化液 文齐液 调pH7 0 7 4 置棕色玻璃瓶中密封保存 氧化 调节pH 促溶 防混浊 提供CN 2020 4 9 23 三 方法 4 实际工作中 可用HiCN参考液 按生化方法绘制标准曲线 或求出K值后计算 K Hb g A 1 5 0mlHb转化液 血20ul 混匀 静置5min 2 分光光度计比色 波长540nm 以空白转化液调零 测定吸光度 A 3 如用符合WHO标准的光度计 则可据 A 直接计算Hb浓度 氰化高铁血红蛋白测定法 2020 4 9 24 25 血红蛋白浓度计算公式 Hb g L A 540HiCN 44 64458 1000 251 A 367 7A 540HiCN 测定管吸光度44 毫摩尔消光系数64458 1000 1mmol LHb溶液中所含Hb克数251为稀释倍数 2020 4 9 25 三 方法 4 实际工作中 可用HiCN参考液 按生化方法绘制标准曲线 或求出K值后计算 K Hb g A 1 5 0mlHb转化液 血20ul 混匀 静置5min 2 分光光度计比色 波长540nm 以空白转化液调零 测定吸光度 A 3 如用符合WHO标准的光度计 则可据 A 直接计算Hb浓度 氰化高铁血红蛋白测定法 2020 4 9 26 Hb g L A500 1281000 2651500 3852000 523 K Hb A 500 1 301 384 32 Hb KA 氰化高铁血红蛋白测定法 2020 4 9 27 1 KCN为剧毒药品 防污染 2 HiCN转化液不能存于塑料瓶中 否则CN 下降 结果偏低 3 分光光度计应定期校正并使用配套的比色杯 4 标准曲线或K值应定期校正 四 注意事项 氰化高铁血红蛋白测定法 2020 4 9 28 29 血红蛋白 SDS Hb SDS 540nm 血红蛋白浓度 吸光度 十二烷基硫酸钠血红蛋白 SDS Hb 法 2020 4 9 29 方法学评价 HiCN法 SDS Hb法 优点 操作简便 显色快 结果稳定 缺点 氰化钾有剧毒 高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊 HbCO转化慢 参考方法 优点 操作简单 结果稳定 无公害 缺点 摩尔消光系数未确定 破坏白细胞 质量差异大 次选方法 2020 4 9 30 如何采用SDS Hb法进行血红蛋白测定 1 HiCN法绘制标准曲线 2 SDS Hb法标准工作曲线绘制 1 取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法测定吸光度 并求出其Hb浓度 2 再用SDS Hb法测定4份标本的吸光度 3 以4份标本Hb浓度为横坐标 SDS Hb法测得的吸光度为纵坐标 绘制标准工作曲线 2020 4 9 31 32 分析前质量控制 同红细胞计数分析中质量控制技术误差 稀释倍数 分光光度计波长 光缝 比色杯光径需校正HiCN转化液 棕色玻璃瓶HiCN参考液 关键质控物 室内质控分析后质量控制 同红细胞计数 质量控制 2020 4 9 32 33 成年 男性 120 160g L 女性 llO 150g L 新生儿 170 200g L 老年 70岁以上 男性 94 122g L 女性87 112g L 参考值 2020 4 9 33 34 轻度贫血 成年男性Hb 120g L 成年女性 110g L 中度贫血 90g L 重度贫血 60g L 极度贫血 30g L 临床意义 2020 4 9 34 35 三 红细胞形态检查 红细胞大小 形态 染色和内涵物的是否异常 2020 4 9 35 1 显微镜分析法采用人工显微镜法血涂片染色观察 是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法 2 计算机图像分析建立统计模型 以正常红细胞形态为参比 作出分析 可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断 3 血液分析仪法提供红细胞数量及其他相关参数 对异常结果报警 但不能提供确切信息 需用镜检血涂片核实 检测原理和方法学评价 2020 4 9 36 1 有合格的血液细胞形态检验人员2 选择细胞分布均匀区域进行镜检3 注意完整规范的检查顺序低倍镜细胞分布和染色油镜细胞形态 是否存在其他异常细胞4 减少人为影响因素全片浏览 质量保证 2020 4 9 37 38 2020 4 9 38 39 正常红细胞 双凹圆盘形大小均一 平均7 2 m 6 7 7 7 m 淡粉红色 Hb充盈良好 中央部位为生理性淡染区 大小约为直径的1 3 胞质内无异常结 2020 4 9 39 40 2020 4 9 40 外周血红细胞形态变化 红细胞大小异常小 大 巨 大小不均红细胞性状异常球 椭圆 靶 口 镰 棘 钝锯齿 泪滴 裂片 形态不整血红蛋白充盈度与着色异常低色素 高色素 嗜多色 着色不一红细胞内异常结构嗜碱性点彩 豪焦小体 卡波环 寄生虫 疟色素红细胞排列异常缗钱状形成 自凝现象有核红细胞 2020 4 9 41 1 红细胞大小异常 1 小红细胞 指直径小于6 m的红细胞 提示血红蛋白合成障碍 见于缺铁性贫血 珠蛋白生成障碍性贫血 2 大红细胞 指直径大于l0 m的红细胞 常见于巨幼细胞性贫血 也可见于溶血性贫血 恶性贫血等 2020 4 9 42 2020 4 9 43 3 巨红细胞 指直径大于15 m的红细胞 最常见于巨幼细胞性贫血 4 红细胞大小不均 指同一患者的红细胞之间直径相差一倍以上 大者红细胞直径可达12 m 小者直径仅2 5 m 常见于严重的增生性贫血 巨幼细胞性贫血时尤为明显 2020 4 9 44 2020 4 9 45 2020 4 9 46 2 红细胞形态异常 1 球形细胞 该红细胞在血液中为球形 而在涂片上则显示细胞中心着色深浓 体积较小 有球形之立体感 2 椭圆形细胞 红细胞呈椭圆形 杆形 两端钝圆 长轴增大 短轴缩短 见于遗传性椭圆形细胞增多症 大细胞性贫血 偶见于缺铁性贫血 骨髓纤维化 巨幼细胞贫血 镰形细胞性贫血 正常人血液中约占l 但不超过15 2020 4 9 47 2020 4 9 48 3 靶形细胞 红细胞中心部位和细胞周缘染色较深 其间为不染色的苍白区环 形如射击之靶 常见于各种低色素性贫血 尤见于珠蛋白生成障碍性贫血 HbC病 也见于阻塞性黄疽 脾切除后状态 4 口形细胞 红细胞中央有裂缝 中心苍白区呈扁平状 颇似张开的口形或鱼口 常见于口形红细胞增多症 小儿消化系统疾患引起的贫血 也可见于乙醇中毒 某些溶血性贫血及肝病患者等 正常人偶见 4 2020 4 9 49 2020 4 9 50 2020 4 9 51 5 镰形细胞 红细胞外形呈镰刀状 线条状 镰状细胞贫血 HbS S HbS C 和镰状细胞特性 HbA S 的血标本 在缺氧的条件下 有大量镰细胞 6 棘形细胞 红细胞表面有针尖状突起 其间距不规则 突起的长度和宽度可不一 多见于遗传性或获得性 脂白缺乏症 可高达70 80 也可见于脾切除后 酒精中毒性肝脏疾病 尿毒症 2020 4 9 52 2020 4 9 53 2020 4 9 54 7 新月形红细胞 红细胞残缺不全 体积大 状如新月形 直径约20 m 见于阵发性睡眠性血红蛋白尿 8 泪滴形细胞 成熟红细胞形如泪滴或梨状 多见于贫血 骨髓纤维化症时 偶见于正常人 2020 4 9 55 2020 4 9 56 9 缗钱状形成 红细胞表面电荷发生改变 而使其互相连接如缗钱状 10 裂红细胞 为红细胞碎片或不完整的红细胞 见于弥散性血管内凝血 微血管病性溶血性贫血 重型珠蛋白生成障碍性贫血 巨幼细胞性贫血 严重烧伤 正常人血涂片中裂片细胞小于2 2020 4 9 57 2020 4 9 58 11 红细胞形态不整指红细胞形态发生各种明显改变 出现不规则的奇异形状 如豆状 梨形 蝌蚪状 麦粒状和棍棒形等 此种细胞在某些感染或严重贫血时多见 最常见于巨幼细胞性贫血 2020 4 9 59 3 染色异常 1 正常色素性 见于正常人外 还见于急性失血 再生障碍性贫血和白血病等 2 低色素性 红细胞的生理性中心浅染区扩大 提示其血红蛋白含量明显减少 常见于缺铁性贫血 珠蛋白生成障碍性贫血 铁粒幼细胞性贫血 某些血红蛋白病 2020 4 9 60 2020 4 9 61 3 高色素性 中心淡染区消失 着色较深 胞体成红色 胞体大 最常见于巨幼细胞性贫血 4 嗜多色性 它是刚脱核而尚未完全成熟的红细胞 故其细胞体积较大 多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活跃 尤见于溶血性或急性失血性贫血 2020 4 9 62 2020 4 9 63 4 红细胞内出现异常结构 1 嗜碱性点彩红细胞 指在瑞氏染色条件下 成熟红细胞或幼红细胞的胞质内出现形态不一的蓝色点状物 即核糖核酸 RNA 属于未完全成熟红细胞 其颗粒大小不一 多少不等 常作为铅中毒诊断筛选指标 2020 4 9 64 202