标准的-定量Q-PCR仪器的具体使用步骤和操作方法

Q PCRQ PCR 仪器使用具体步骤仪器使用具体步骤 1 首先将 Mx3000P 电源打开 大约 1min 将会听到启动的声音 然后打开桌面上的 Mx3000P 软件 确定软件界面右下面的联 机标志呈绿色 如果不是绿色而是红色 软件会提示 Instrument to PC communications have failed 这时只需稍 等片刻 待仪器自检完成 会自动连接计算机 2 在 Mx3000P 软件 的 New Experiment type 弹出框中选择 需要的实验类型 通常选择 SYBR Green with dissociation curve 点击 OK 键 3 确定 Mx3000P 软件 界面上面 Selection 命令下 的卤钨灯 已经打开 绿色说明已经打开 黄色说明正在预热 红色说明没 有打开 4 最好在仪器与光源预热 20min 后开始实验 5 在 Plate Setup 里 对 96 孔板的各空进行设定 设定 Standard 标准品 NTC 阴性对照 Unknown 样品 等 并选 择正确的通道 FAM HEX ROX Cy5 对于标准品 设定其模板浓 度 还需要对不同的样品进行编号 或者点击 Import 导入 以前使用的 96 孔板设定 具体为 首先选择 Welltype 中的 Unknown 然后选择下方的 ROX SYBR 选择 Reference dye 的 ROX 用 Replicate symbol 对每个样品进行标记 1 2 3 XXX 等 6 切换至 Thermol profile setup 界面 进行 PCR 循环的设定 可以改变各项温度 时间 循环数等 或者删除 添加特定步骤 和循环 或者点击 Import 导入以前设定的 PCR 程序 表示 表示在这一步结束时采集荧光信号 代表在这一步的 全过程中都采集荧光信号 一般用作溶解曲线分析 7 Thermol profile setup 设定结束后 点击软件界面右上 方的 Run 软件界面右下方会出现运行状态显示框 Run Status 可以选择 Turn lamp off at end of run 点击 start 开始实验 弹出 保存文件的对话框 选择后保存 弹出另外一个对话框 选择第二个 预热之后跑 另外在运行 过程中可通过点击 Add cycles 来增加扩增的循环数 在 PCR 运行结束后软件将自动关闭卤钨灯 8 在 PCR 运行的过程中可以点击 Raw Data plots 观察样品的 实时扩增原始结果 9 PCR 运行结束后 点击 Analysis 在点击 Results 软件 将会自动进行结果分析 也可以点击 手动进行结果分析 结果分析结果分析 1 将 Q PCR 结果从电脑中拷出来 在电脑上打开文件 2 点击菜单栏的 File 命令 选择 Convert to New END ALL Experiment type 子命令 弹出 Selection new Experiment type 对话框 3 在 Selection new Experiment type 对话框中选择 Comparative Quantitation Calibrator 命令 将文件转化成 分析结果的模式 点击 OK 键 4 弹出 Mx3000P 软件 界面 在 Plate Setup 界面中 首先选 择 Welltype 中的 Unknown 然后选择下方的 ROX SYBR 选择 Reference dye 的 ROX 5 将 96 孔板中的 Actin 样品选中 然后在 Nomalizing assay 中选 择 SYBR 6 然后对相同模板的样品标记相同的字母 对相同引物的样品标记 相同的数字 7 最后任意 通常选最左侧的 选择一列 在 Well type 中选择 Calibr