多酚含量测定法-总酚含量测定法-Folin酚法-Folin-Ciocalteu试剂法-操作图解.doc

多（总）酚含量测定法（Folin-Ciocalteu试剂法）李熙灿/Xican Li（广州中医药大学）文献 Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.操作图解溶液配制1 Folin-Ciocalteu试剂(0.25mol/L)的配制取2mol/L Folin-Ciocalteu试剂1mL，加蒸馏水7mL，充分混合，得0.25mol/L的Folin-Ciocalteu试剂,共8mL。2 15%Na2CO3溶液（W/V）的配制 取Na2CO310H2O溶3.0g，溶于20mL水中，混匀即得。3 标准溶液的配制（以连苯三酚为例）精确称取连苯三酚标准品10mg用水溶解并定容到50mL，得0.2mg/mL的对照品标准溶液。4 连苯三酚标准曲线的绘制样品液浓度mgmL加 样 量A7600.2mg/mL样品母液/ mL补加溶剂95乙醇/ mLA760平均值SD0.00000.500.030.0386670.01744200.500.02300.500.0630.0040.010.490.150.1666670.0158610.010.490.1620.010.490.1880.0080.020.480.290.2946670.0036820.020.480.2990.020.480.2950.020.050.450.7490.7290.0167530.050.450.7080.050.450.730.0320.080.421.0881.0920.004320.080.421.090.080.421.0980.040.10.41.3931.3943330.0318570.10.41.3560.10.41.4340.0480.120.381.7471.6360.0923070.120.381.5210.120.381.640.060.150.351.9831.9276670.0415160.150.351.8830.150.351.917A = 32.16733*C + 0.06012, R=0.998线性范围：连苯三酚0.00-0.06mg/mL，A值在0.039-1.928之间。5 样品溶液的配制样品母液（1mg/mL）：精确称取样品2mg，用95乙醇溶解并定容到2mL，得1mg/mL样品母液。 0.2mg/mL样品母液/ mL补加溶剂95乙醇/ mL次数现象0.20.3平行测三次变蓝 如怀疑样品自身有吸收，可加做空白对照组。用0.5mL95乙醇代替0.5mLFolin-Ciocalteu试剂+即可，注意观察A值大小。6 多酚含量的计算依上述公式A = 32.16733*C + 0.06012, 由A值即可求得浓度C值。 7 说明7.1 不同的分光光度计所测得的A值可能不一样，所以，同一次实验要用同一台分光光度计；7.2 Folin-Ciocalteu试剂：可向试剂公司购买，一般其浓度为2 M，使用前最好稀释。也可以自配方法如下：将100g钨酸钠(Na2WO4 2H2O), 25g钼酸钠( Na2MoO42H2O) ,700 mL蒸馏水，50 mL 85%磷酸及100 mL浓盐酸装入带回流装置的2000mL圆底烧瓶中，充分混合，文火缓慢回流10h,在加入150g硫酸锂(Li2SO4),50 mL蒸馏水及数滴液溴，然后将烧瓶内溶液开口