miRNA21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制.doc

miRNA21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制 第45卷第4期2019年7月Vol.45No.4Jul.2019772吉林大学学报（医学版）Journal ofJilin University（Medicine Edition）1671-5871 （2019）04-0772-07DOI10.13481/j.1671-587x.20190405miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制信瑞,李!,徐慧英，王春宇，（丹华,孙海峰|（1.吉林大学第二医院放射线科，吉林长春130041；2.吉林大学第二医院妇产科，吉林长春130041；3.吉林大学第一医院联合超声科，吉林长春130021；4.吉林大学第二医院放疗科，吉林长春130041；5.吉林大学第二医院呼吸与危重症医学科，吉林长春130041）摘要目的观察miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响，并初步探讨其作用机制。 方法乳腺癌T47D和MDA-MB361细胞分别给予0. 0、2.5和5.0Gy射线照射，CCK8法检测细胞存活率，流式细胞术分析细胞周期进程，实时定量PCR法检测72h内细胞中miRNA-21表达水平。 T47D和MDA-MB361细胞分别转染anti-miRNA-21序列（animiRNA-21组）和阴性对照序列（阴性对照组），并设置未转染细胞为空白对照组，实时定量PCR法检测各组细胞中miRNA-21表达水平；经0.0和5.0Gy射线照射后，CCK8法检测细胞存活率，流式细胞术分析细胞周期进程。 结果经5.0Gy射线照射后，T47D细胞存活率明显高于MDA-MB361细胞（PV0.05）；与0.0Gy照射组比较，5.0Gy照射组T47D和MDA-MB361细胞G/M期细胞百分率均明显升高（PV0.05）,miRNA-21表达水平均明显升高（PV0.05）。 与空白对照组比较，anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB361细胞中miRNA-21表达水平均明显降低（PV0.05或PV0.01）；给予5.0Gy射线照射后，anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB361细胞存活率均明显降低（PV0.05或PV0.01），T47D细胞G2/M期细胞百分率明显降低（PV0.05）,而sub G期细胞百分率明显升高（PV0.05）。 结论miRNA-21表达下调能够增强乳腺癌细胞的放射敏感性，其机制可能与抑制细胞周期G/M期阻滞有关。 关键词miRNA-21；乳腺肿瘤；放射敏感性；细胞存活率；G/M期阻滞R737.9文献标志码AInfluence of miRNA-21in radiosensitivity of breast cancer cells and iSsmechanismXIN Ri,LI Dong2,XU Huiying；,WANG Chunyu4,QU Danhuab,SUN Haifeng1（1.Department ofRadiology,Second Hospital,Jilin University,Changchun130041,China；2.Departmentof ObstetricsandGynecology,Second Hospital,Jilin University,Changchun130041,China；3.Departmentof Ultrasonography,FirstHospital,Jilin University,Changchun130021,China；4.Department ofRadiotherapy,Second Hospital,Jilin University,Changchun130041,China；5.Department ofRespiration andCritical Disease,Second Hospital,Jilin University,Changchun130041,China）ABSTRACT Objective:To observethe influenceof miRNA-21in theradiosensitivity ofthe breast cancer cells,and topreliminarily exploreits mechanism.MethodsThe breastcancer T47D andMDA-MB-361cells wereirradiated with0.0,2.5,and5.0Gy-ray,respectively；CCK8assay wasused to detect the survival rates of T47Dand MDA-MB-361cells and flow cytometry was used to analyze the cell cycle；real-time quantitativePCR wasused todetectthe expression levels of miRNA-21mcellsduring72h.The T47D andMDA-MB-361cells were2018-12-04基金项目吉林省科技厅优秀青年人才基金资助课题(201805xx7JH)作者简介信瑞(1982),男，黑龙江省齐齐哈尔市人，副主任技师，医学博士，主要从事放射生物学方面的研究。 通信作者曲丹华，副主任护师(TelE-mail61505502qq.)；孙海峰，主管技师(TeE-mail53518525qq.)信瑞，等.miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制773transfected withanti-miRNA-21sequence(anti-miRNA-21group)and negative control sequence(negativecontrol group),respectively；the untransfectedcellswere setas blank control group.Real-time quantitativePCR wasusedto detecttheexpression levelsof miRNA-21in cells in various groups.After irradiationwith0.0and5.0Gy-ray,CCK8assay wasusedtodetectthe survivalrates,andflow cytometrywasusedtoanalyzethecellcycle.ResultsAfter irradiationwith5.0Gy-ray,the survivalrate of T47D cellswas significantlyhigher than that ofthe MDA-MB-361cells(P0.05).Compared with0.0Gy radiationgroup,the percentagesof T47D andMDA-MB-361cells in G2/M phasein5.0Gy radiationgroup weresignificantly increased(PV0.05);the miRNA-21expression levelsin theT47D andMDA-MB-361cells weresignificantly increased(PV0.05).The miRNA-21expressionlevelsin theT47D andMDA-MB-361cells in anti-miRNA-21group werelower thanthosein blank control group(PV0.05).After irradiationwith5.0Gy-ray,the survivalrates of T47Dand MDA-MB-361cellsinanti-miRNA-21group weresignificantly lowerthan thosein blankcontrol group(PV0.05or PV0.01),and thepercentage ofT47D cellsinG2/M phaseinanti-miRNA-21group was significantly lowerthanthat in blankcontrol group(PV0.05),and thepercentage ofT47D cellsinsubGi phasewassignificantlyhigher thanthatinblankcontrolgroup(PV0.05).Conclusion:The down-regulation of miRNA-21may enhancetheradiosensitivity ofbreastcancer cells,and itsmechanism maybe relatedto the inhibition ofG2/M phasearrest.KEYWORDS miRNA-21；breast neoplasms；radiosensitivity；cell survivalrate；G2/M phasearrest放射治疗是乳腺癌标准治疗方式之一，据统计,70%?80%乳腺癌患者需要术后放疗B。 治疗早期，乳腺癌细胞对放射治疗比较敏感，但随着疗程的增加，其放射抵抗逐渐明显旧。 乳腺癌放射抗性产生是影响放疗疗效和肿瘤复发的重要因素，目前其产生的机制尚未阐明。 近年来研究表明:miRNA与肿瘤的形成、肿瘤细胞的增殖和治疗均有着密切的联系。 乳腺癌miRNA表达也存在异常，已有研究显示miRNA- 21、miRNA-16和miRNA-141等在乳腺癌组织中呈异常高表达。 miRNA-21是一种具有致癌作用的miRNA,在乳腺癌、胶质瘤、胆管癌囚和鼻咽癌囚等多种肿瘤中均存在高表达。 研究卩切显示miRNA-21与鼻咽癌等恶性肿瘤的放疗耐药有关。 另有研究表明miRNA-21表达与乳腺癌的分化、转移、分期和患者生存率有密切关联。 多种miRNA在肿瘤细胞中存在差异表达，能参与调节细胞周期和凋亡，以此改变肿瘤细胞的放射敏感性闪,但miRNA-21与乳腺癌细胞的生长和放射治疗的关联性目前尚无相关报道。 鉴于miRNA-21在乳腺癌中高表达,本研究旨在分析miRNA-21与乳腺癌辐射敏感性的关系，并初步探讨其分子机制，以期为乳腺癌的放射增敏提供实验依据。 1材料与方法1.1细胞株、组织标本和主要试剂人乳腺癌T47D和MDA-MB-361细胞株购自美国模式培养物集存库。 正常乳腺组织取自吉林大学第二医院病理室保存的手术标本。 DMEM培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司,青霉素和链霉素购自美国Hyclone公司，anti-miRNA-21反义寡核昔酸和阴性对照反义寡核昔酸由上海生工公司合成，lipofectamineTM2000试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司，CCK8试剂盒和PI染液购自上海碧云天生物技术研究所，焦碳酸二乙酯（DEPC水）、RNA分离试剂和实时定量PCR试剂盒购自宝生物工程（大连）有限公司。 1.2细胞培养和转染T47D和MDA-MB-361细胞培养于37C、5%CO和100%饱和湿度的CO2培养箱中，培养基为含10%胎牛血清、100U-mL-青霉素和100U-mL-链霉素的DMEM培养基。 每隔2?3d换液1次，毎天均使用倒置显微镜观察细胞，记录细胞数量和状态等指标。 anti-miRNA-21反义寡核昔酸和阴性对照反义寡核昔酸由上海生工公司合成，anti-miRNA-21序列为5/-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3/,阴性对照序列为5-CAGUACUUUUGUGU AGUACAA-3。 取对数生长期T47D和MDA-MB-361细胞，分为空白对照组（不转染细胞）、阴性对照组（转染阴性对照序列的细胞）和anti-miRNA-21组（转染anti-miRNA-21序列的细胞），以每孔5.0X10个细胞接种于6孔板中，在37C、CO细胞培养箱中孵育24h,按lipofeetamine wl2000说明书进行转染，最佳转染条件为20pmol-L-NC-FAM oligo:1gL774吉林大学学报（医学版）第45卷第4期2019年7月LipofactamineM2000。 1.3照射方法GC3000Elan辐射器（MDS Nordion，加拿大），射线，放射源为137Cs,活度为50.7E+12Bq,源皮距为100cm。 1.4CCK8实验检测细胞存活率T47D和MDA-MB-361细胞分别分为0. 0、2.5和5.0Gy射线照射组；收集对数期细胞，96孔板中每孔加入100gL,使待测细胞密度调至每孔5000个,置于37C、CO细胞培养箱中孵育24h。 协同射线辐射处理细胞（0. 0、2.5和5.0Gy）,设3个复孔，37C、CO?细胞培养箱中孵育24?72h,倒置显微镜下观察细胞形态。 每孔加入20g LCCK8试剂，避光培养4h。 使用酶标仪测定450nm波长处各孔的吸光度（A）值。 对照组细胞存活率设为100%,实验组细胞存活率=实验组A值/对照组A值X100%。 1.5流式细胞术检测不同周期细胞百分率T47D和MDA-MB-361细胞分别分为0. 0、2.5和5.0Gy射线照射组；收集对数生长期细胞接种于6孔板中，经0. 0、2.5和5.0Gy射线处理并连续培养24h后，收集细胞并调整细胞悬液数至约1X10mL-,收集培养细胞，加入0.5g?L1RNase50g L,混匀，37C水浴30min,PBS缓冲液洗去RNase,100g LPBS缓冲液重悬，再加入0.05g?L1PI染液4C避光染色5min,采用流式细胞仪检测，并采用CellQgest3.0软件进行细胞周期DNA含量分析，计算不同细胞周期细胞百分率。 1.6实时定量PCR miRNA-21引物由上海生工公司合成，上游引物为5-CAAG TGTGGGCT-GCTGAGGA-3,下游弓I物为5-AGCCTGGGTA-CAGGTTGTTGATG-3。 非照射条件下miRNA-21水平检测分为正常乳腺组织、T47D细胞和MDA-MB-361细胞组，照射条件下T47D和MDA-MB-361细胞分别分为0.0和5.0Gy射线照射组（检测时间0?72h）。 用RNA分离试剂抽提正常乳腺组织和细胞中总RNA,取5gg RNA用Promega MMLV逆转录酶试剂进行逆转录反应，反应体系为20g L,取0.5g LRT产物进行实时定量PCR反应。 反应条件10g LSYBRGreen Mix（2X）,0.4g LROX ReferenceDye II,1gL Primer1（5gmol?L_1）,1gL Primer2（5gmol?L_1）,0.5gL模板cDNA,7.1g LDEPC水。 荧光定量PCR扩增条件的设置94C、4min,94C、30s,50C、30s,72C、40s,40个循环。 以空白对照组组织或细胞中mRNA表达水平为1,计算实验组组织或细胞中mRNA表达水平。 1.7miRNA-21转染后各组细胞放射抗性和不同周期细胞百分率检测miRNA-21转染后，T47D和MDA-MB-361细胞分别分为空白对照组、阴性对照组和anti-miRNA-21组，照射剂量为0. 0、2.5和5.0Gy,采用1.3和1.6中的方法检测各组细胞存活率和miRNA-21表达水平，即细胞的放射抗性；T47D细胞分为空白对照组、阴性对照组和anti-miRNA-21组，照射剂量为0.0和5.0Gy,采用1.5中的方法检测各组细胞不同周期细胞百分率。 1.8统计学分析采用SPSS15.0统计软件进行统计学分析，采用Origin&0软件绘图。 各组细胞存活率、不同细胞周期细胞百分率和miRNA-21表达水平均以匚士s表示，计量资料符合正态分布,2组间样本均数比较采用t检验。 以P0.05表示差异有统计学意义。 2结果2.1射线照射后各组T47D和MDA-MB-361细胞存活率T47D和MDA-MB-361细胞经0. 0、2.5和5.0Gy射线照射后，继续培养72h,采用CCK8法检测细胞存活率。 与0.0Gy照射组比较，5.0Gy照射组T47D和MDA-MB-361组细胞存活率均明显降低（P0.05或P0.01）。 5.0Gy照射组T47D细胞存活率明显高于MDA-MB-361细胞（=6.521,P=0.003）,提示T47D细胞具有更强放射抗性。 见表1。 表1射线照射后T47D和MDA-MB361细胞存活率Tab.1Survival ratesofT47D andMDA-MB-361cells after-ray radiation（n=3,，士s,/%）GroupSurvival rateT47D cellsMDA-MB-361cells0.0Gy radiation100.0士3.9100.0士2.82.5Gy radiation92.2士2.974.0士3.6s5.0Gy radiation81.2士4.1叱39.4士2.6粋兴P0.05,P0.01pared with0.0Gy radiationgroup；P0.01pared withMDA-MB-361cells.2.2射线照射后各组不同细胞周期T47D和MDA-MEB-361细胞百分率T47D和MDA-MB-信瑞，等.miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制775361细胞经过0. 0、2.5和5.0Gy射线照射后，继续培养24h,采用流式细胞仪分析细胞周期分布。 与0.0Gy照射组比较，2.5和5.0Gy组T47D和MDA-MB-361细胞G2/M期细胞百分率明显升高（P0.05或P0.01）,G-/S期细胞百分率明显降低（P0.05或P0.01）。 经5.0Gy射线照射后，T47D细胞G/M期细胞百分率明显低于MDA-MB-361细胞（P0.05）,提示T47D细胞的放射抗性与细胞周期有关。 见图1和表2。 ACT47D cels；DFMDA-MB-361cels；A,D0.0Gy radiationgroup；B,E2.5Gy radiationgroup；C,F5.0Gy radiationgroup.图1流式细胞术检测射线照射后各组T47D和MDA-MB361细胞不同细胞周期细胞百分率Fig.1Percentages ofT47D andMDA-MB-361cells at different cell cycles in various groupsdetected byflowcytometryafter-ray radiation（n=3，尢士s,/%）表2射线照射后各组不同细胞周期T47D和MDA-MB361细胞百分率Tab.2Percentages ofT47D andMDA-MB-361cells atdifferent cell cycles in variousgroupsafter-ray radiationGroupPercentage ofT47D cellsPercentageofMDA-MB-361cellsG-i/S Go/M SubG-G-i/S G?/M SubGi0.0Gy radiation60.8士5.333.6士3.75.6士1.257.2+4?835.0+2?397.8+0?92.5Gy radiation46.7士4.7叱44.6士5.8驾&7+0?937.9士5.2紫47.6士5.114.5+2?15.0Gy radiation29.5士6.3労壮厶617+57兴叱&8+1?414.0士3.2粋68.8士8.4粋17.2+2?0P0.05,P0.01pared wth0.0Gy radiationgroup；P0.05,P0.01pared wthMDA-MB-361cells.2.3射线照射后T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达水平与正常乳腺组织比较,T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达水平升高，其中T47D细胞miRNA-21表达水平最高，是MDA-MB-361细胞的5倍（=14.214,P0.05）（图3A）。 0.0Gy射线照射后继续培养72h,与空白对照组（0.0Gy射线照射）比较,anti-miRNA-21组2种细胞存活率均明显降低（=5.625,P=0.006；t=5.848,P=0.005）；5.0G y射线照射后继续培养72h,与空白对照组（5.0Gy射线照射）比较，anti-miRNA-21组2种细胞存活率进一步降低（=3.387,P=0.019；t=5.794,P=0.005）,且明显低于0.0G y照射时的空白对照组（=5.479,P=0.006；t=17.374,P0.05）。 见图3B和C。 2.55.0Gy射线照射前后各组T47D细胞不同细胞周期细胞百分率与照射前比较，给予5.0Gy射线照射后，空白对照组细胞G/M期细胞百分率明显升高（t=4.628,P=0.009）。 5.0Gy射线照射前，与空白对照组比较,776吉林大学学报(医学版)第45卷第4期2019年7月anti-miRNA-21组G2/M期细胞百分率差异无统计学意义(P0.05),subG】期细胞百分率明显升高(=3.416,P=0.021)；给予5.0Gy射线照射后，与空白对照组比较，anti-miRNA-21组G/M期细胞百分率明显降低(t=6.883,P=0.003),subGi期细胞百分率明显升高(=6.025,P=0.004)。 见图4和表3。 3讨论miRNA是一类由18?25个核昔酸组成的非编码内源性RNA分子，在果蝇、线虫、小鼠及人类等真核生物细胞中广泛存在EmiRNA通过碱基互补配对的方式与靶基因结合，导致靶基因降解,在机体发育、细胞增殖、代谢、凋亡、衰老和肿瘤发生发展等多种生物学过程中发挥调控作用。 目前，经实验研究确认的miRNA共有234个，超过半数的miRNA定位于肿瘤发生相关的染色质区域,miRNA-21是一种具有致癌作用的miRNAm。 最初在恶性胶质瘤中发现miRNA-21的高表达，随后的研究囚也显示其在乳腺癌中的高表达。 MARTIN等口口采用实时定量PCR检测了369例乳腺癌患者的乳腺癌组织的miRNA-21表达发现乳腺癌组织中miRNA-21表达水平明显高于正常乳腺组织，且miRNA-21的高表达与乳腺癌患者肿瘤分级、不良预后和生存率有密切关联。 研究“报道miRNA21能够下调金属蛋白JO RA3u?s?u?s?.T47D cells?MDA-MB-361cells图2射线照射后不同时间乳腺癌T47D和MDA-MB361细胞中miRNA-21表达水平Fig.2Expression levelsofmiRNA-21in T47D andMDA-MB-361cells atdifferent timeafter-ray radiationIZIWN?UJOoAoA?j?j uu.?.?ssaldx ssaldxgroup group groupo o o o o o oo o o o o oo1210121086428642(X(X、巴Jfi Jfiv v。 GuGuf-JO2222wA.AJnsNegative controlAnti-miRNA-21group groupgroupo oooooQ Qoooooo2225258861614242JO总BJ?AJnsAJnsivc controlAnti-miRNA-21groupgroupgroup”P0.05,transfection；A BCP0.01pared wthblankcontrolgroup；AExpression levelsofmiRNA-21in T47D andMDA-MB-361cells afterB,CSurvival ratesofT47D andMDA-MB-361cells aftertransfection.图3各组T47D和MDA-MB-361细胞中miR-21表达水平和细胞存活率Expression levelsofmiRNA-21in T47D andMDA-MB-361cellsandsurvivalratesof cellsin variousgroups Fig.3A,BBlank controlgroup；C,DNegative controlgroup；E,FAnti-miRNA-21group；A,C,EBefore radiation；B,D,FAfter-ray5.0Gy.图4流式细胞术检测5.0Gy射线照射前后各组不同细胞周期T47D细胞百分率Fig.4Percentages ofT47D cellsatdifferentcellcyclesinvariousgroups beforeand after5.0Gy-ray radiationdetected byflowcytometry信瑞，等.miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制777表3流式细胞术检测5.0Gy射线照射前后各组不同细胞周期T47D细胞百分率Tab.3Percentages ofT47D cellsin differentcellcyclesinvariousgroups beforeand after5.0Gy-ray radiationdetected byflowcytometry（=3，尢士s,/%）Group Gi/S Gz/M SubGiBlankcontrolBefore radiation57.6士5.136.6士2.75.8+0?8After radiation29.2+2?664.0+5?6s6.8+2?0Negative controlBefore radiation59.8士6.529.6士4.110.6士2.1After radiation30.9+4?061.5+5?77.6士1.8Anti-miRN A-21Beforeradiation60.5+7?222.8+3?616.7+3?2厶After radiation54.0士6.2粋18.6士2.9沁27.4+4?1*P0.05,PV0.01?vs beforeradiation；_P0.05,，厶P0.01ds blankcontrolgroup.酶抑制因子1(tissue inhibitorof matrixmetalloproteinases1,TIMP1)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(phosphate andtension homologydeleted onchromsome10,PTEN)和程序性细胞死亡因子4(programmed celldeath4,PDCD4)等抑癌基因的表达，并起到致癌作用。 本研究分析2种乳腺癌细胞株T47D和MDA-MB-361的放射敏感性，结果显示给予同样剂量照射时，MDA-MB-361细胞存活率明显低于T47D细胞，证实其具有更强的放射敏感性；2种细胞中miRNA-21表达水平均明显高于正常乳腺组织，但是T47D细胞拥有更高的miRNA-21表达；2种乳腺癌细胞在照射后8h内均表现出明显的miRNA-21表达上调，提示miRNA-21与乳腺癌细胞的放射抗性有关。 狄英波等说研究了3种乳腺癌细胞的放射敏感性发现miRNA-21的表达从高到低分别为MDA-MB- 231、MCF7和MDA-MB-435s,而克隆形成实验显示辐射敏感性从高到低为MDA-MB435s、MCF7和MDA-MB-231,两者呈负相关关系，与本研究结果类似。 GABRIELY等口切在乳腺癌细胞株MCF7中敲除了miRNA-21表达，结果显示miRNA-21表达敲除后MCF7细胞体外增殖能力和小鼠异种移植瘤生长均被抑制，该抑制作用伴随着MCF7细胞凋亡率的升高。 为探讨miRNA-21与乳腺癌放射敏感性的关系，本研究采用慢病毒转染的方法降低了T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达，miRNA-21表达的下调明显降低了在放射条件下的2种细胞的细胞存活率，提示其表达下调能够起到乳腺癌放射增敏作用。 但T47D细胞存活率仍高于MDA-MB-361细胞，可能是虽然anti-miRNA-21转染降低了miRNA-21的表达，但T47D细胞中miRNA-21表达仍明显高于MDA-MB-361细胞的缘故。 本研究结果显示射线照射后T47D和MDA-MB-361细胞产生明显的G/M期细胞阻滞，与多数研究灼报道一致，且具有较强放射抗性的T47D细胞表现出较低的G/M期细胞阻滞。 放射治疗能引起肿瘤细胞DNA损伤，细胞在DNA双链断裂之后会立即启动检查点，以暂时停止细胞周期进程，主要的检查点在G-/S期和G/M期，肿瘤细胞的放射敏感性主要与G2/M期阻滞引起的细胞周期延长有关，这也与本研究中2种乳腺癌细胞阻滞在G/M期一致”切。 当转染降低miRNA-21表达后，流式细胞术结果显示T47D细胞的G/M期百分率由64.0%降至22.9%,明显消除了放射引发的G/M期阻滞，而凋亡峰subGi期细胞却明显增加。 ANASTASOV等却研究表明不可逆的G/M期阻滞导致了乳腺癌细胞的放射抵抗，提示miRNA-21通过介导G/M期阻滞调节乳腺癌细胞的放射抗性。 本研究中，由于5.0Gy射线照射anti-miRNA-21组MDA-MB-361细胞存活率低至(6.2士3.1)%,与照射前比较,MDA-MB-361的细胞周期分布差异无统计学意义，故仅报道了T47D细胞的周期分布结果。 本研究明确了miRNA-21在人乳腺癌细胞中的放射敏感性中的调节作用，其机制与抑制细胞周期G/M期阻滞有关。 本研究结果为乳腺癌的临床靶向治疗提供了实验依据。 参考文献1惠周光，张炸，张江鹄，等.xx年与xx年中国大陆地778吉林大学学报（医学版）第45卷第4期2019年7月区乳腺癌改良根治术后放疗现状比较JS.中华放射肿瘤学杂志，xx,21 (4)352-356.2CROKERAK,ALLAN AL.Inhibition ofaldehyde dehydrogenase(ALDH)activ让y reduceschemotherapy andradiation 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