微生物取样方法

微生物取样方法微生物取样方法 举例一 一 空气采样及检验方法 1 培养基 普通营养琼脂平板 按 GB4789 28 中 3 7 条配制 2 采样 空气沉降法 2 1 布点 面积小于 30 平方米的车间 设一对角线 在线上取 3 点 即中心一点 两端在 距墙 1 米处各取一点 面积大于 30 平方米的车间 设东 西 南 北 中 5 个点 其中东 西 南 北点均距墙 1 米 2 2 采样高度 与地面垂直高度 80 150 厘米 2 3 采样方法 用直径为 9 厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露 20 分钟盖上送检培养 3 培养 于 37 培养 24 小时 4 检测频率 每周 空气质量标准 生车间 熟车间 成品车间 低于 100 个 半成品库 成品库 低于 10 个 二 设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位 实验室对其进行涂抹采样 进行细菌总数检验 1 采样方法 1 1 涂抹法 适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面 取经过灭菌的铝片框 框内面积为 50 平方厘米 放在需检查的部位上 用无菌棉球蘸上无 菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分 擦完后立即将棉球投入盛有 10 毫升无菌生理盐水的试 管中 此液每毫升代表 5 平方厘米 1 2 贴纸法 适用于表面不平坦的设备和工器具接处面 将无菌规格纸 5 5 厘米 纸质要薄而软 用无菌生理盐水泡湿后 于需测部分分别贴上 两张 两张纸面积共 50 平方厘米 然后取下放入盛有 10 毫升无菌生理盐水的试管中 此液 每毫升代表 5 平方厘米 2 检验方法 2 1 细菌总数的检验 将上述样液充分振摇 根据卫生情况 相应地做 10 倍递增稀释 选择其中 2 3 个合适的稀 释度作平皿倾注培养 培养基用普通营养琼脂 每个稀释度作 2 个平皿 每个平皿注入 1 毫 升样液 于 37 培养 24 小时后计菌落数 结果计算 表面细菌总数 cfu cm2 平皿上菌落的平均数 样液稀释倍数 30 2 2 2 致病菌的检验 沙门氏菌 参照 GB4789 4 进行 金黄色葡球菌 参照 GB7918 5 进行 4 检验合格标准 细菌总数 10 100 个 cm2 5 关键点 细菌总数 10 个 cm2 一般区域 细菌总数 100 个 cm2 三 人员手表面细菌污染情况的检验 1 采样方法 用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部 反复两次 涂擦的时候棉拭子要相应地转动 擦完后 将手接触部分剪去 将棉拭子放入装有 10 毫升 无菌生理盐水的试管内送检培养 2 检验方法 同工器具表面细菌总数检验方法 3 结果计算 每只手表面的细菌总数 cfu 只手 平皿上菌落的平均数 样液稀 释倍数 四 消毒液药效的微生物学鉴定法 1 采样对象 正常使用的消毒液 和已知配制好备用的消毒液 2 采样及检验方法 在无菌条件下 用无菌吸管吸取 1 毫升样液 加入 9 毫升稀释液中混匀 对于醇类与酚类消 毒剂 稀释液用普通营养肉汤即可 对于含氯消毒剂 含碘消毒剂 需在肉汤中加入 0 1 硫代硫酸钠 对洗必泰 季铵盐类消毒剂 需在肉汤中加入 3 W V 土温 80 和 0 3 卵磷 脂 对醛类消毒剂 需在肉汤中加入 0 3 甘氨酸 对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂 需在肉汤中加入 W V 土温 80 以中和被检样液中的残效作用 将注入了样液的稀释液充分摇匀 取 1 毫升注入平皿 随之倒入普通营养琼脂 待琼脂凝固 后 翻转平皿 将平皿于 37 条件下培养 24 小时后计平板上生长的菌落数 3 结果分析 平板上有菌生长 表明被检样液中有残存活菌 若每个平板菌落数在 10 个以下 仍可用于 消毒 若每个平板菌落数超过 10 个 说明每毫升被检样液含菌量已超过 100 个 即不宜在 用于消毒 该公式是一个经验公式 它的理论模式依据是 100CM2 的面积上 10MIN 降落的菌落数 等于 1 升空气中所含的细菌总数 系数 50000 基于上述假说和单位换算而来 细菌总数 CFU M3 5 10T 100 A 1000 N 50000 N AT 5 10T 实际放置了 5MIN 100 A A 单一培养皿面积 1000 1M3 1000L 啊 换算成 m3 N 平均菌落数 举例二 一 物体表面采样及检查方法 采样面积 被采表面 100cm2 取全部表面 被采表面 100cm2 取 100cm2 采样方法 用 5 5cm2 的标准灭菌规格板 放在被检物体表面 用浸有无菌生理盐水液的棉拭子 1 支 在规格板内横竖往返各涂抹 5 次 并随之转动棉拭于 连续采样 1 4 个规格板面积 剪去 手接触部分 将棉拭于放入装 10ml 采样液的试管中送检 门把手等小型物体则采用棉拭子 直接涂抹物体的方法采样 培养 略 二 空气及与食品接触面微生物检验方法 检验标准 1 目的 检测生产车间空气 操作人员手部 与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标 生产区 域环境当中病原微生物的监控 达到规定标准 以控制食品成品的质量 2 参照标准 中华人民共和国国家标准 一次性使用卫生用品卫生标准 GB15979 1995 HACCP 原理与 实施 中华人民共和国国家标准 公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定 GB T 18204 1 2000 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0169 92 SN 0172 92 SN 0170 92 出入境检验检疫局二 000 四年 出入食品微生物检验培训教材 中 出入食品生 产厂卫生细菌检验方法 日本东京冷冻食品检验方法 3 采样与检测方法 3 1 空气的采样与测试方法 3 1 1 样品采集 1 取样频率 a 车间转换不同卫生要求的产品时 在加工前进行采样 以便了解车间卫生清扫消毒情况 b 全厂统一放长假后 车间生产前 进行采样 c 产品检验结果超内控标准时 应及时对车间进行采样 如有检验不合格点 整改后再进行 采样检验 d 实验性新产品 按客户规定频率采样检验 e 正常生产状态的采样 每周一次 2 采样方法 在动态下进行 室内面积不超过 30 m2 在对角线上设里 中 外三点 里 外点位置距墙 1 m 室内面积超过 30 m2 设东 西 南 北 中五点 周围 4 点距墙 1 m 采样时 将含 平板计数琼脂培养基的平板 直径 9 cm 置采样点 约桌面高度 并避开空调 门窗等空气 流通处 打开平皿盖 使平板在空气中暴露 5 min 采样后必须尽快对样品进行相应指标的 检测 送检时间不得超过 6h 若样品保存于 0 4 条件时 送检时间不得超过 24h 3 1 2 菌落培养 1 在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置 37 1 培养 24 h 取出检查有无 污染 将污染培养基剔除 2 将已采集样品的培养基在 6 h 内送实验室 细菌总数于 37 1 培养 48h 观察结果 计数平板上细菌菌落数 3 菌落计算 a 记录平均菌落数 用 个 皿 来报告结果 用肉眼直接计数 标记或在菌落计数器上点 计 然后用 5 10 倍放大镜检查 不可遗漏 b 若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠 可分辨时仍以 2 个或 2 个以上菌落计数 3 2 工作台 机械器具 表面与工人手表面采样与测试方法 3 2 1 样品采集 1 取样频率 a 车间转换不同卫生要求的产品时 在加工前进行擦拭检验 以便了解车间卫生清扫消毒情 况 b 全厂统一放长假后 车间生产前 进行全面擦拭检验 c 产品检验结果超内控标准时 应及时对车间可疑处进行擦拭 如有检验不合格点 整改后 再进行擦拭检验 d 实验新产品 按客户规定擦拭频率擦拭检验 e 对工作表面消毒产生怀疑时 进行擦拭检验 f 正常生产状态的擦拭 每周一次 2 采样方法 a 工作台 机械器具 用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面 取与食品直接接触 或有一定影响的表面 取 25cm2 的面积 在其内涂抹 10 次 然后剪去手接触部分棉棒 将 棉签放入含 10mL 灭菌生理盐水的采样管内送检 b 工人手 被检人五指并拢 用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面 从指尖到指端来回涂 擦 10 次 然后剪去手接触部分棉棒 将棉签放入含 10mL 灭菌生理盐水的采样管内送检 3 采样注意事项 擦拭时棉签要随时转动 保证擦拭的准确性 对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置 擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间 3 2 2 细菌 大肠菌群的检测培养 样液稀释 将放有棉棒的试管充分振摇 此液为 1 10 稀释液 如污染严重 可十倍递增稀 释 吸取 1ml 1 10 样液加 9ml 无菌生理盐水中 混匀 此液为 1 100 稀释液 3 2 2 1 细菌总数 1 以无菌操作 选择 1 2 个稀释度各取 1ml 样液分别注入到无菌平皿内 每个稀释度做 两个平皿 平行样 将已融化冷至 45 左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿 每皿约 15ml 充分混合 2 待琼脂凝固后 将平皿翻转 置 36 1 培养 48 h 后计数 3 结果报告 报告每 25cm2 食品接触面中或每只手的菌落数 3 2 2 2 大肠菌群 1 平板法 a 以无菌操作 选择 1 2 个稀释度各取 1ml 样液分别注入到无菌平皿内 每个稀释度做两 个平皿 平行样 将已融化冷至 45 左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿 每皿约 15ml 充分混合 待琼脂凝固后 再覆盖一层培养基 约 3 5 ml b 待琼脂凝固后 将平皿翻转 置 36 1 培养 24h 后计数 c 结果计算 以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出 d 结果报告 报告每 25cm2 食品接触面中或每只手的菌落数 2 试管法 a 以无菌操作 选择 3 个稀释度各取 1ml 样液分别接种到 BGLB 肉汤培养基中 每个稀释度 接种三管 b 置 BGLB 肉汤管于 36 1 培养 48 2h 记录所有 BGLB 肉汤管的产气管数 c 结果报告 按 BGLB 肉汤管产气管数 查 MPN 表报告每 25cm2 食品接触面中或每只手的大 肠菌群值 3 2 3 金黄色葡萄球菌检测 1 定性检测 a 取 1ml 稀释液注入灭菌的平皿内 倾注 15 20ml 的 B P 培养基 或是吸取 0 1 稀释液 用 L 棒涂布于表面干燥的 B P 琼脂平板 放进 36 1 的恒温箱内培养 48 2 小时 b 从每个平板上至少挑取 1 个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验 c 结果报告 B P 琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性 即报告手 工器具 上 有金黄色葡萄球菌存在 2 定量检测 a 以无菌操作 选择 3 个稀释度各取 1ml 样液分别接种到含 10 氯化钠胰蛋白胨大豆肉 汤培养基中 每个稀释度接种三管 b 置肉汤管于 36 1 的恒温箱内培养 48 小时 划线接种于表面干燥的 B P 琼脂平板 置 36 1 培养 45 48 小时 c 从 B P 琼脂平板上 挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基 36 1 培养 20 24 小时 d 取肉汤培养物做血浆凝固酶试验 记录试验结果 e 报告结果 根据凝固酶试验结果 查 MPN 表报告每 25 cm2 食品接触面中或每只手的金 黄色葡萄球菌值 3 3 工厂环境中病原体的检测计划与方法 检测计划 为了保证食品安全 工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估 检测 项目包括李斯特菌 沙门氏菌等病原体微生物 化验室应该按照一定的计划对生产场所环境 中的病原体进行检测 其中包括地面 下水道 排水沟 墙壁 天花板 设备框架 运输 的支架 冷藏装置 速冻机 传送带 设备的螺丝 维修工具等部位 当某个点检测到病员 微生物时 应该对环境中的相似点加大检测频率 在把所有的预定点检测完后 应该对环境 中的病原微生物的存在状况进行全面评估 在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现 病原体的环境点 达到持续改进的目的 检测频率 每月两次 每次每个区域至少选取 5 个检测点 分别进行检测 3 3 1 环境李斯特菌的检测方法 3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片 3 3 1 1 用涂抹棒 海绵或者其他采样设备收集环境样本 3 3 1 2 将收集的样本添加 10 毫升灭菌的缓冲蛋白胨水 将样本与缓冲蛋白胨混合 1 分钟 将样品置于室温 20 30 1 小时 最久不超过 1 5 小时 以修复损伤的李斯特菌 3 3 1 3 将测试片放在平坦处 掀起上层膜 3 3 1 4 用移液器垂直滴加 3 毫升样品到下层膜中央 将上层膜缓慢盖下 以免产生气泡 3 3 1 5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上 不要压 扭转或者滑动压板 提起压板 等至少十分钟 以使胶体凝固 3 3 1 6 将测试片透明面朝上 可叠放至十片 在 37 1 培养 26 30 小时 可以用标准 菌落记数器或者其他光学放大器判读 不要记数圆形轮廓