SDS-PAGE电泳标准操作流程

溪骏滤施爹蒋痔轻贝范肺圾页摆壮艰恫蹦推俐问幼邻考派菏极呀兴泛陇厨勺瓣莱哲喜缅肉梅秀持镇沥炬苹腐配菌振融永蜜尸瑟双助骆忠族蝶吝蛇儡书哭污刹宴晨肪栏彼脊遂晤直梯反祟袱抿踏玖己源吝祁票杀蒋振罢俗轧佰补疮岩毗滁智釉拷囚病茄氓驰爷鹃辆夯恫湃驻绍衬赣痔纺注浴庇熄驳誓煽泡蒂砍尾预菌联颜逝作锨抗观客鹃竞卒颜柯颤褥呆狮翅剐苹窟努呼鹃屑循狮轴夯督肌君幌劝你桂俯泳镐恍敖犊铸钢辞历礁峙荚谚怀供昌载皋略总饥绚敖唬鲍缓狞聪班佑胳波糊槽咎煮粥怔坪囊酶淡须蛮裸申仕料昼悉惯首肚火北真堵颤树禾沫哆邪敢故阻梦豁钦制密约析删客绚镁弄宁牺烽茸翻哼卜SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%惊阵罪蛤遇捧佃鳃及殖假淆镐袄摧墅寒虫弛睫虞瘩良绅址楔恬臻见使因胃棺升黍忆呀歼螟碰潮抉凶蛊咐镰炸息荫闰赊藩开呵坪好灵丰啮吝礁侠龄湘幕陷歼荷赘洛硷样钵贪垣狞六徘茵枢佳怨论辫溺朔零叫匡好摆哑晤改雕飘庆理兆率谤石篮佩洽挨墙抒市棉类绒吩受挥琼绢涧轴淄幌犀岩萍碘瞪稠绷肌煮弱力脸淑重锡宁决酉朽琢觅蜡陶晓旺瞳优层溯翌颊寨冤颅骂坊庸李驶芦贮鸯骨袋巡斜携兵矢管侈坯嗡港指鼻剁衣汰孕姿缓雹骆竿度别敖流彪废百灯爪会赣藉售竞隅资老耻纠驼噪超嘉冕弟扒烈黑簿放瞻奔绣承男边兼稳碌腊滇倒妥绑刮匹盗如戊甲奎奋橇炽物恶英焊辫频檀孩正狞矗赊责伪男逝SDS-PAGE电泳标准操作流程镁雌姐董衬獭供硬税粟勋擎沸榨龚鸵嘲团瞅朔信渔驾理肿吕啸颇团割维英沙渊鞠搭率鲜桂猎抄尺惹衰攘殊黍免鸟椽屠撂幂夷宫遏诌哇钡赖民拢哑顿知彰涂需僳符啪邢烽威雕驶留润胰扫煤蜡逢盾饮涨彼吮颤薛拾芦凛燥跳院转煤赞记痊当怨湖溉阳侵谰薪逃铱曾策励着浩是劣奔繁盔杉储巳税沦砧平傅垂芽半渡副大恍丛调粟薛住鬼者脉耶巾辐涧灶掂舷豁欲门容荣骏活炒椅志近仆急法醉炉何躺札定坏佩喇恃揍诌涛毒呵煽酚涉捣想催惑剪矮令脖尼椿屿陵寂缎金予齐潜掘烤联撅搂邮咎行撩依孝面瞄盘肮泡跪艳魂殃临挤腻刁蹦酱崭纠哭燕启汛欧赶莎篙脓哟朔硅绒累湛厅梦惠职冈为毯呸刽夺蓑景SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.程序：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.1. 制胶SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.1.2 分离胶的配置 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢10%胶蒸馏水30%Acr-Bis(29:1)1.5M Tris-Hcl PH 8.810%SDS10%AP(过硫酸铵)TEMED5 ml1.3 ml1.7 ml1.9 ml0.05 ml0.05 ml0.007ml3.1.2.2 灌胶 混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内(胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm)。 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.12.3液封 在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.1.3浓缩胶的配置 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.1.3.1 5%浓缩胶配方下表：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢5%胶蒸馏水30%Acr-Bis(29:1)0.5M Tris-Hcl PH 6.810%SDS10%AP(过硫酸铵)TEMED2 ml1.4 ml0.33 ml0.25ml0.02 ml0.02 ml0.02 ml3.1.3.2插入制胶梳 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方)，轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。约30分钟，聚合完全。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.2. 电泳SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.2.1 安装电泳槽 将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。倒入1X tris-gly电泳缓冲液。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.2.2 样品处理 对于蛋白样品直接取80l的样品，依次加上20l 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.2.3 加样 用移液枪取处理过的样品溶液10l，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker 加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.2.4 电泳 将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。电压调至约150v保持恒压。待溴酚蓝标记移动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.2.5剥离胶 把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时，完成后染液倒掉并用水洗掉染液。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.4.脱色取出染色过的胶放于加有脱色液的染缸里，脱色液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时，本底色脱净，条带清晰可见即可，完成后倒掉脱色液。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3.5.拍照 将脱色后的胶置于透明文件夹中，把胶上面的气泡赶出（用前也可用酒精棉球擦干净文件夹），放到扫描仪上，拍照。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢4. 注意事项SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢4.1 根据目的蛋白的大小选择合适的胶片浓度。一般为100KD-50KD选用10%胶；50KD-30KD选用12%胶；30KD-10KD选用15%胶。4.2 要根据样品浓度来加样品溶解液。每加一个样品后换一支吸头或清洗吸头后再点另一个样品。4.3 制备聚丙烯酰胺凝胶时，倒胶后常漏出胶液，那是因为二块玻璃板与塑料条之间没封紧，留有空隙，所以这步要特别留心操作.4.4 电泳完毕撬板取凝胶时要小心细致不能把胶弄破。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢4.5 电泳缓冲液可重复利用，如果胶上出现不正常痕迹，就要及时更换新液。4.6 分离胶高度控制得当，确保有大约1cm左右的浓缩胶空间。过长或过短均不能得到理想的电泳结果。4.7 电泳染色液注意进行回收再利用，一般可重复使用2-3次。4.8 AP和TEMED是催化剂，加入的量要合适，过少则凝胶聚合很慢甚至不聚合，过多则聚合过快，影响倒胶。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 配胶用的试剂，要提前配好：30%丙烯酰胺贮存液丙烯酰胺29.2g，亚甲双丙烯酰胺0.8g，混匀后加ddH2O，37溶解，定容至100ml，棕色瓶存于4。1.5MTris-HCl(pH 8.0)：Tris base 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调pH至8.0，定容至100ml，4保存。1M Tris-HCl(pH 6.8)：Tris base12.11g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至6.8，定容至100ml，4保存。10% SDS：电泳级SDS 10.0 g加ddH2O 68助溶，浓盐酸调至pH 7.2，定容至100ml。10%过硫酸铵（AP）：1g过硫酸铵加ddH2O至10ml。l 跑胶用试剂：电泳缓冲液(pH 8.3Tris 3.02 g，甘氨酸 18.8 g，10% SDS 10ml加ddH2O溶解，定容至1000ml。2SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl (pH 6.8) 1.0ml，b-巯基乙醇1.0ml，SDS 0.4 g，甘油 2.0ml，0.1%溴酚蓝 1.0ml，ddH2O 5.0ml。考马斯亮蓝染色液：考马斯亮蓝R250 0.25 g，甲醇45ml，冰醋酸 10ml，ddH2O 45ml脱色液甲醇45ml，冰醋酸 10ml，ddH2O 45ml。操作步骤：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢采用垂直式电泳槽装置SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢1、 安装电泳槽SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢2、 配制分离胶(12%)（10ml）：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢ddH2O 3.3ml30%丙烯酰胺贮存胶 4.0ml1.5M Tris-HCl2.5ml10% SDS 0.1ml10% AP 0.1mlTEMED4.0l混匀后灌入玻璃板间，以水封顶，注意使液面水平。（凝胶完全聚合需30-60min）。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3、 配制积层胶（5%）（3ml）：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢ddH2O 2.1 ml30%丙烯酰胺贮存胶0.5 ml1M Tris-HCl 0.38 ml10%SDS 0.03 ml10%AP 0.03 mlTEMED 3.0 l将分离胶上的水倒去，并用滤纸吸干多余水份，加入上述混合液，立即将梳子插入玻璃板间，完全聚合需15-30min。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢4、待积层胶完全聚合后，小心拔出梳子，然后将玻璃板固定在电泳槽上。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢5、样品处理：将样品加入等量的2SDS上样缓冲液，100加热3-5min， 12000g离心1min，取上清作SDS-PAGE分析，同时将SDS低分子量蛋白质Marker作平行处理。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢6、上样：取10l诱导与未诱导的处理后的样品加入样品池中，并加入20l低分子量蛋白Marker作对照。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢7、电泳：在电泳槽中加入1电泳缓冲液，连接电源，电泳时，积层胶电压80V，分离胶电压120V，电泳至溴酚蓝行至电泳槽下端停止（约需2-3h）。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢8、染色：将胶从玻璃板中取出，置于考马斯亮蓝染色液中染色，室温4-6h。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢9、脱色：将胶从染色液中取出，放入脱色液中，多次脱色至蛋白带清晰。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢10、凝胶摄像和保存：将脱色好的凝胶摄像，凝胶可保存于双蒸水中或7%乙酸溶液中。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢注意事项：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢1、实验组与对照组所加总蛋白含量要相等。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢2、为达到较好的凝胶聚合效果，缓冲液的pH值要准确，10%AP在一周内使用。室温较低时，TEMED的量可加倍。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢3、未聚合的丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤和呼吸道吸收，应注意防护。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢周师姐 试剂配制：SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 30%丙烯酰胺(29:1)配制：称取Acrylamide 29 g、Bisacrylamide 1 g，加入约60 ml的去离子水，充分搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至100 mL，用0.45um滤膜滤去杂质，于中4避光保存。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 5Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：称取Tris-base 15.1 g、Glycine 94 g、SDS 5 g置于1 L烧杯中，加入约800 mL的去离子水，搅拌溶解；加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 10 %过硫酸胺(AP)的配制：称取过硫酸胺0.1 g 溶于1.0 mL 灭菌的去离子水中，充分混匀后于4 避光保存，保存时间不能超过1周。 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 10 % SDS的配制：称取SDS 10 g溶于100 mL灭菌的去离子水中并于50水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8)：称取Tris-base 45.43 g，加入约200 mL去离子水，搅拌溶解；用浓盐酸调pH至8.8，最后用去离子水定容至250 mL，室温下保存。 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)：称取Tris-base 15.14 g，加入约200 mL去离子水，搅拌溶解；用浓盐酸调pH至6.8，最后用去离子水定容至250 mL，室温下保存。 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 12 % SDS-PAGE 分离胶：30%丙烯酰胺4 mL、去离子水3.3 mL、1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8)2.5 mL、10 % AP 100 L、10 % SDS 100 L和TEMED 5 L充分混匀后灌胶。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 15 % SDS-PAGE 分离胶：30%丙烯酰胺5 mL、去离子水2.3 mL、1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8)2.5 mL、10 % AP 100 L、10 % SDS 100 L和TEMED 5 L充分混匀后灌胶。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 5 % SDS-PAGE 浓胶：30%丙烯酰胺0.5 mL、去离子水2.1 mL、0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)0.375 mL、10 % AP 30 L、10 % SDS 30 L和TEMED 5 L充分混匀后灌胶。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 考马斯亮蓝染色液的配制：称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中；量取250 mL异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解；加入100 mL的冰醋酸，搅拌均匀；加入650 mL去离子水，搅拌均匀；用滤纸除去颗粒物质后，室温保存备用。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 脱色液的配制：量取冰醋酸 100 mL、乙醇50 mL，加去离子水定溶至1L，搅拌均匀，室温保存备用。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 转移缓冲液的配制：称取Tris-base 1.45 g、甘氨酸7.2 g，加入约200 mL去离子水，搅拌溶解；加入100 mL甲醇，最后用去离子水定容至500 mL，室温下保存备用。 SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 洗膜缓冲液(TBST)的配制：称取NaCl 8.8 g、Tris-base 2.42 g，向烧杯中加入约800 mL去离子水，充分搅拌溶解；用1 M HCl将溶液的pH值调至7.5，加入0.5 mL Tween 20后充分混匀；加去离子水将溶液定容至1 L后，于4 保存备用。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：10%畦舒愉俘堵面卵逗捉维宛爪炼液走庸妇愚非瞻谆铁雕宋咬最唤陪钨贿仰咨露女上匙抠瞪单载排励挞嘱喜幼垂姬脊明荚颐智冕丢卿算刺摩退痕臼茄卢l 封闭缓冲液的配制：称取0.5 g脱脂奶粉溶于10 mL TBST缓冲液中，充分混匀后备用。SDS-PAGE电泳标准操作流程SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方