江苏省宿迁市马陵中学高考生物专题复习 微生物的实验室培养课件.ppt

课题1微生物的实验室培养 微生物的实验室培养条件 合适的营养和环境条件 确保其他微生物无法混入 一 培养基 1 概念 按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 需要加入琼脂 凝固剂 多糖 2 种类 按物理形态分 液体培养基 半固体培养基固体培养基 应用微生物分离 鉴定 计数和菌种保存等方面 按照培养基用途 功能 分 基础培养基选择培养基鉴别培养基 按照培养基的成分来分 合成培养基 天然培养基 半合成培养基 各自优缺点 选择培养基 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物加入四环素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞不加氨基嘌呤 次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基 分离杂交瘤细胞加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌 从成分上判断 牛肉膏蛋白胨培养基麦芽汁培养基葡萄糖铵盐培养基马铃薯蔗糖培养基 天然培养基 天然培养基 合成养基 半合成养基 3 成分 水 无机盐 碳源 氮源 生长因子 满足微生物对ph 特殊营养物质 氧气的要求 培养乳酸菌添加维生素培养霉菌ph调至酸性培养细菌ph调至中性或微碱 c c 二 无菌技术 1 无菌技术2 消毒和灭菌有何不同 泛指培养微生物操作中 所有防止杂菌污染的方法 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染 3 常用的消毒方法 煮沸消毒法巴氏消毒法紫外线化学药剂消毒法 70 75 30分钟80 15分钟牛奶 接种室 接种箱或超净工作台 酒精 氯气 水 接种环 接种针 4 常用的灭菌方法 灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌培养基100kpa121 15 30min 接种环 接种针 试管口 瓶口 玻璃器皿和金属 判断下列各项是否需要消毒或灭菌 如需要 选择合适方法 1 豆浆2 游泳池3 超净工作台4 玻棒 试管 吸管 锥形瓶5 培养细菌用的培养皿6 无菌水7 牛肉膏蛋白胨培养基8 接种环 接种针9 实验操作者的双手 微生物实验室培养的基本操作程序 计算 称量溶化灭菌倒平板 分装 接种 方法 培养保存 制备培养基 纯化细菌 调节ph 4 倒平板 冷却至50 1 为什么需要使锥形瓶口通过火焰 2 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 3 如何知道灭菌后的培养基是否还有杂菌 4 接种细菌后 培养基还需倒置培养吗 问题讨论 复习 1 按照用途分培养基可分为哪几类 其中添加青霉素的培养基为哪种类型 添加伊红 美蓝的为哪种培养基 2 培养基的成分都含有哪些 3 配制培养基时是先调节ph值 还是先灭菌 4 无菌操作是如何实现的 5 接种 方法接种针穿刺接种接种环平板划线法玻璃刮铲稀释涂布平板法 平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面 在数次画线后 可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 这就是菌落 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在最后一次划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 操作的第一步灼烧接种环 每次划线前灼烧接种环 最后一次划线结束后灼烧接种环 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次划线时 接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌落 及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 以免接种环温度太高 杀死菌种 划线后 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 稀释涂布平板法 菌液稀释度足够高的菌液里 微生物被分散成单个细胞 从而在培养基表面形成单个菌落 系列梯度稀释 涂布到培养基 问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求 想一想 第2步应如何进行无菌操作 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围等等 将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温培养箱中培养 12h和24h后观察观察菌落的颜色 形状 大小是否符合某种细菌的菌落特征未接种的培养基表面如果有菌落生长 说明什么 微生物的恒温培养