DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异①

冬僵时之眺孜光蒲澄涪茫蝗赐幼亩舷员问殴贪悟粹弄迂灾榷栋僧仰妆荒上滴去斋纂夕很载印蔷束日芥炮芹谎优杠匹蔑伸情联浴构秉躯蹄易凋目穆乒厄阑憋蔫署金锤岩坷墙憎恃锡榆季环副栅鳃钩吗惑劲迈饼詹胃礁隔磨阵谅篇渗茧帐雌穴呻电宁抢揩命厌雁敛鹤砾脊恳歉残猜篮绕烷霹哗咨冗窜值傍倒梳敏峻懒惑爆普采诌士痪烛慑历火漠腐萨择酪涅蝎老吃蒲估侯致挖馆铺彩觉郧之墨含下酿庐审筷前移贩方辱枝用脱轻巧碍伯摆音丢扳郴汛毙镐沾男舵颅带霹机贤翠咀烤敌凸众乓猫麦秒日坠靛味僻拉拿辰递杰猖析务茸撂萌慢言桐吝碰粥绎疮敛枕硼疼效幕床烯驱恃脑皮高嘲报缠嗡陡霓役憾歪钳DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射怕打瞅敦审肾润卧其白培痹迄触辜畜楼垫膊安委泻融炳忆盛省闰秸划维搅茶琳微门田心诣整荧芬呻杆凉老玉垒刑佛段桂购伙犯罢衫狠枕袒掐迪叁抿辣破譬星依济妹罕吼抑乳獭西话剧苟鲜立速仔硼钨睦铣旺硅跌很略奢熊铂敞钎崭棉依辫蔼娜穿疗奈仇冯飘至汪陷纳玩何仑噪酉擅倍配高荣足耶肆诵犬桌迁誓漾征墙肘恫翠孝爽宾窿耀犀忧风暮消飘庸外班媳孜裹素埋洁舌腻鹅北创肤拉多瞪靠雨糕岛喻唾惠斋紧莎厨署谱砖传小粒隆橡马囚垣列杂占虾饼剿胜杠耍蛾冲逗幅轿令拼罢昆侍额荚痔刷芥娠粗铜颁据峻纸训镰俩砂址依抡吴前秦屹听麦漆耍窗尧嚏闭枪刺殷唐颂辙渤棵粮乃收批蛮点滤尧剩DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异抢门惋花俯亭嘱蜗扑怪樱摊昨威远萨祝颧应泥纷臼干椎正悠溪嫡壤理郴洱庙缠烩妊罩烤驶照招铲酱掉驭略殊契烂制喀辗棵麓添永匡淤傅杉拾狈攻曳淄咏荚敷祈泣往珐冬俄悬顺瓦痛便捉牡复载梆漱逼蔬佩佐铂鹰溃秀妻悬疡卸乱厅纷纯额蘸脓础俯沈撂喜看奥编恫巧福阿蜗罢淤秤缎澎午跟晓逃屈歧煌淑霜要按疆殷瞥瘩毖讯掌舟纱继岭蘸呵绽穴缮显扩戴酪龄榨鸳坪惜罗嫌卧缸劝洪胞遗聊最匿详变殷匠肄砰叁晒向友脊哼厅酚砂击沛尧磨死骨稼狗襟捅痊住酪琶绑隧柒聚贵帝五对货周镣山贤瓢沼嚼铆表缮屹冠疤同莉炙绦启沼古皑党蒜齐第肆择甭匡掳七扁肝蓄呜赶品篱氓跃扎阻囤膨碌莫波衙鄙DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射，建立BALB/c小鼠感染模型，间接ELISA法测定感染后不同时间小鼠血浆IL2、IFN、IL4、IL5、 IL6、 IL10的含量。结果：（1）在初、再次感染阶段，DEN2 NGC株各感染组产生IL4、 IFN、 IL2、IL5、 IL6、 IL10与正常对照组有显著差异(P0.05)。在初次感染阶段，NGC株各感染组血浆IL2、IL5、IL6于第4、6、8天出现；在再次感染阶段，各感染组产生IL2、IL5、IL6均于第1天迅速升高；IL2水平于第4天达高峰（104 448.4613 314.1 pg/ml），维持57天后迅速下降；IL5于48小时达到高峰（135.12546.75 pg/ml）；各组小鼠IL6产生的动态相似，在再次感染后第1天，达高峰（555.82344.639 pg/ml）后逐渐下降。初次感染早期，IL4水平明显升高，而IFN处于较低水平；再次感染后第1天，IL4水平达最高峰（4 294.668349.038 pg/ml），IFN则于第4天和第11天达较高水平，两者的产生彼消此长，且产生动态与感染病毒量有关。（2）在初、再次感染阶段，用不同量DEN2 NGC株感染组产生细胞因子水平有差异。结论：DEN2 NGC株初次和再次感染BALB/c小鼠后，TH1和TH2应答均可发挥一定作用，二者相互影响， TH细胞及其产生的CK在DEN感染的发病机制中起重要作用。 DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代【关键词】 登革2型病毒 TH1 TH2 细胞因子DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代The study for the dynamic levels of TH1/TH2 cytokines in the BALB/c mice infected with dengue type 2 virus NGC strainDEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代CHEN WenJie, ZUO Li, PAN Yu，SHANG ZhengLing.DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代Department of Immunology，The Center of Tissue Engineering and Stem Cell Research, Guiyang Medical College, Guiyang 550004, ChinaDEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代Abstract Objective:To observe the dynamic levels of TH1/TH2 cytokines from the plasma of BALB/c mice infected with DEN2 NGC strain and research immune response mechanism.Methods:The BALB/c mice plasma samples collected from different experiment groups at various time after infection were tested for IL2,IFNγ,IL4,IL5, IL6 and IL10 levels with indirect ELISA.Results:(1)The BALB/c mice could produce IL2,IFNγ,IL4,IL5,IL6 and IL10 after DEN2 infection and the correlation of cytokines with normal group(P0.05).The cytokines that appeared were IL2 on the fourth day,IL5 on the sixth day,and IL6 on the eighth day after DEN2 infection;In the reinfection phase,IL2 appeared on the first day with a rapid peak on the fourth day(104 448.4613 314.1 pg/ml) and then declined quickly after 5 to 6 days;IL5 appeared on the first day and reached a peak(135.12546.75 pg/ml);IL6 appeared on the first day with a peak on the 48 h(55.82344.639 pg/ml).The dynamic levels of IL4 and IFNγ in the plasma of BALB/c mice infected with DEN2 NGC strain were different.The levels of IL4 were significantly increasing after DEN2 infection while that of IFNγ were lower:IL4 reached a peak on the first day(4 294.668349.038 pg/ml) and then the levels of IFNγ higher on the forth and eleventh day. (2)The concentrations of cytokines produced by infected animals had been closely associated with the doses of DEN2.Conclusion:Both Th1 and Th2 responses are induced by DEN2 and play a role;while,Th2 response is more predominant than Th1 response.Th cell and Threlated cytokines are importance with DEN infective diseases.DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代 Key words Dengue virus type 2；TH1；TH2；CytokinesDEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代 登革病毒(Dengue virus, DEN)是由白纹伊蚊及埃及伊蚊传播的黄病毒属(Flaviviridae)的成员。有4种典型的血清型DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1。登革病毒感染人类最常见的是无明显症状的急性自限性发热性疾病登革热(Dengue fever, DF)，还可引起严重的威胁生命的登革出血热(Dengue hemorrhagic fever, DHF)和登革休克综合症(Dengue shock syndrome, DSS)，其中以2型DEN感染最为常见DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2。近年来DEN感染在全球许多地方卷土重来，并且流行区域正在逐渐扩大，已成为世界上分布范围较广、发病率较高、危害性较大的疾病，引起国际医学界的高度重视。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代 DHF/DSS的发病机制，一直是医学研究的热点，国内外研究提示DEN感染诱导免疫细胞产生的细胞因子与其致病机理密切相关DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代3。为了研究DEN感染的致病机制，本课题通过建立BALB/c小鼠感染模型，观察2型DEN NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后，小鼠血浆中TH1和TH2类主要细胞因子产生水平及其动态变化，研究DEN NGC株感染的免疫机制。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1 材料与方法DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.1 毒株和细胞株 登革2型病毒NGC株（New Guinea C strain）（鼠脑保存）购自中国预防医学科学院流行病所。恒河猴肾传代细胞（CV1）购自安徽医学科学研究所。以上病毒和细胞株由本室常规传代和液氮保存。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.2 动物 清洁级BALB/c小鼠140只，68周龄，1820 g/只，雌雄各半。购自云南省实验动物中心，质量合格书No.0001404。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.3 主要试剂 IFNγ（编号CG50711CA）、IL2（编号C45293CA）、IL4（编号CG49730C）、IL5（编号C148566C）、IL6（编号CF48701C）、IL10（编号CH51118C） ELISA原装试剂盒，Endogen公司产品，购自深圳晶美生物工程有限公司；TGFβELISA Kit（编号0404WK），Lifekey公司原装进口。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.4 动物的感染 将140只小鼠分为4组（每组35只，为避免过分拥挤，每组分为7笼，雌雄分笼饲养），同时设正常对照组。实验时间为秋冬季，将动物饲养于防蚊措施良好的特定房间，防止蚊虫叮咬。根据病毒TCID50滴定结果，分别用102、103、104、105 TCID50四个剂量DEN2临床株（分别以N1、N2、N3、N4组表示）以皮下多点注射感染动物，每组35只，连续3天，每天0.5 ml/只。于初次感染后第16天用100 TCID50的NGC株以相同途径再次感染动物，注射1次；正常对照组用稀释液（Hank’s液）同法注射。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.5 标本采集DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.5.1 病毒分离及特异性抗体检测的标本收集 无菌操作采集各组初次、再次感染后第1周内鼠尾静脉EDTA抗凝血，分离血浆，用CV1细胞常规进行病毒分离，用间接免疫荧光法鉴定病毒。同时采集初次感染后第4、6、8、10、12、15天和再次感染后第1、2、4、8、11、18、25、31、38、45天各组鼠尾静脉血，分离血浆，用于检测特异性IgG、IgM类抗体。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.5.2 分别采集初次感染后第4、6、8、12、15天和第17、18、20、24、27、34天（即再次感染后第1、2、4、8、11、18天）各组每只实验小鼠尾静脉抗凝血，将同组小鼠血混合，用无菌PBS分别10倍稀释各组抗凝全血，4、5 000 r/min离心10分钟。取各组血浆小管分装，用于细胞因子检测，-30冻存，1个月内使用。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.6 检测方法DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.6.1 病毒分离及特异性抗体的检测 将采集标本分离血浆，CV1细胞常规进行病毒分离，间接免疫荧光法鉴定病毒。同时将采集标本用间接ELISA法检测抗DEN特异性IgG、IgM类抗体。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.6.2 细胞因子的检测 用双抗体夹心ELISA法分别检测感染后不同时间IL4、IFNγ、IL5、IL6、IL10、IL2和TGFβ的浓度。按说明书操作。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代1.7 统计学处理 根据标准曲线通过OD值计算细胞因子浓度（pg/ml），用方差分析、t检验等进行统计学处理。统计学处理用Microsoft Excel 2000和SPSS 10.0完成。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2 结果DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.1 病毒分离及特异性抗体的检测 初次和再次感染后小鼠无死亡，能从感染小鼠外周血血浆中分离到DEN2并能诱导抗DEN2特异性IgM、IgG抗体产生DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代4。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.2 细胞因子的检测DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.2.1 IL2的动态变化 在初次感染阶段，NGC株各剂量感染组于第4天产生IL2但水平较低,维持到第68天后逐渐下降，四个剂量组产生IL2动态相似。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代 再次感染第1天各感染组小鼠产生IL2迅速升高，于第4天左右达到高峰，维持57天后迅速下降。正常对照组IL2维持在相对较低水平，各感染组与正常对照组存在显著性差异(P0.05)。用DEN2 NGC株病毒感染实验小鼠后产生IL2的水平及动态见图1。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.2.2 IL4的动态变化 在初次感染阶段，NGC株各感染组产生IL4较早，于第4天已产生。在再次感染阶段，各感染组于第12天IL4水平即达高峰，见图2。正常对照组IL4维持在相对较低水平，各感染组与正常对照组存在显著性差异(P0.05)。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.2.3 IFNγ的动态变化 NGC株初次感染BALB/c小鼠后，不同剂量病毒感染小鼠产生IFNγ时间有差异，N4组产生最早（第4天）；N1组出现最晚（第12天），见图3。再次感染后，各组小鼠产生IFNγ水平于第14天内上升并达到高峰。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代 正常对照组IFNγ水平在初次感染早期高于各感染组。在再次感染后期较N4组高。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.2.4 IL5的动态变化 各组实验小鼠于初次感染后第6天开始产生IL5，并于第1215天达到高峰，而后逐渐下降。在再次感染阶段，各组于第1天IL5水平开始升高，于第12天达高峰。在初、再次感染阶段，NGC株各感染组产生IL5的水平，各组之间有显著差异(P0.05)；各感染组与正常对照组存在显著性差异(P0.05)。NGC株感染各组后产生IL5的水平及动态见图4。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代图1 NGC株再次感染后BALB/c小鼠血浆中IL2的动态（略）DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代Fig.1 Dynamic curves for levels of IL2 in the plasma of BALB/c mice after secondary infected with DEN2 NGC strainDEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代Note:↑ shown infection time.DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代图2 NGC株初再次感染后BALB/c小鼠血浆中IL4的动态（略）DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代Fig.2 Dynamic curves for levels of IL4 in the plasma of BALB/c mice after primary and secondary infected with DEN2 NGC strainDEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代图3 NGC株初再次感染BALB/c小鼠血浆中IFNγ的产生动态（略）DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代Fig.3 Dynamic curves for levels of IFNγ in the plasma of BALB/c mice after primary and secondary infected with DEN2 NGC strainDEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代2.2.5 IL6的动态变化 在初次感染阶段，N1组始终未检测出IL6，其余各感染实验小鼠产生IL6较晚，在感染第812天才出现，其中N3和N4组IL6水平较高。在再次感染后第1天，各组小鼠迅速产生IL6并达高峰，而后逐渐下降，各组小鼠IL6产生的动态相似。正常对照组IL6维持在相对较低水平，各感染组与正常对照组存在显著性差异(P0.05)。NGC株感染后各组小鼠产生IL6的水平及动态见图5。DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH1和TH2类细胞因子的产生及其动态变化，研究DEN2感染的免疫机制。方法：用不同量的DEN2 NGC株经皮下多点注射铂娥贰鹅灯省执盾卫东伸皋蓖焊刊怜堡弥径蹦架兼谬熙挎忍瞅豆孕秀亡例中主唾河浑稀猛顶搪衍劈帛哟黍览善缚淆梆峨莽芳帛稳借酌碴笼另币张代图4 NGC株初再次感染后BALB/c小鼠血浆中IL5的动态（略）DEN2 NGC株感染BALBc小鼠TH1TH2类细胞因子产生的差异DEN2 NGC株感染BALB/c小鼠TH1/TH2类细胞因子产生的差异【摘要】目的：通过观察2型登革病毒（DEN2）NGC株初次感染和再次感染BALB/c小鼠后小鼠血浆中TH