月季的花药培养

JLSSYBYH 月季的花药培养 一 被子植物的花粉发育 F 生殖细胞游离存在于营养细胞的细胞质中 GH 3细胞型花粉 生殖细胞分裂形成2个精子 游离于营养细胞的细胞质中 花粉是由花粉母细胞 小孢子母细胞 经过减数分裂而形成的 因此 花粉是单倍体的生殖细胞 花粉的发育要经历 四分体时期 单核期 双核期等阶段 A 花粉是花粉母细胞经有丝分裂形成的B 花粉的发育要经历小孢子四分体时期 单核期和双核期C 花粉发育经历的四分体时期与减数分裂的四分体时期含义相同D 花粉母细胞形成花粉粒中精子的过程是一系列减数分裂的过程 1 下列关于被子植物花粉的形成 说法正确的是 B 2 下列关于被子植物花粉发育的说法 不正确的是 A 被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果B 花粉粒是在花妖中的花粉囊中形成的C 花粉粒在发育过程中 核先位于细胞中央 在移到细胞的一侧D 被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期 单核期和双核期等阶段 A 二 产生花粉植株的两种途径 移栽 两种途径之间无明显的界限 主要取决于培养基中的激素的种类及其浓度配比 体细胞胚 胚状体 在组织培养过程中 某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构 发育过程亦与合子胚类似 被称为体细胞胚 胚状体 3 下列对产生花粉植株途径的叙述 不正确的是 A 花粉通过胚状体阶段直接发育成植株B 花粉先形成愈伤组织在诱导分化成植株C 花粉经脱分化形成胚状体 在分化出根 然后诱导生芽D 两种途径并无绝对的界限 主要取决于培养基中激素的种类和浓度比例 C 1 材料的选择不同植物同一植物的不同生理状况 花期早期 初花期 合适的花粉发育期 单核居中期与靠边期之间 植株生长条件 材料低温预处理 接种密度等 三 影响花药培养的因素 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株 一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬 即月季的初花期 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素 一般来说 在单核期 细胞核由中央移向细胞一侧的时期 花药培养成功率最高 为了挑选到单核期的花药 通常选择完全未开放的花蕾 月季的花药培养 培养基的种类因植物的不同而有所变化 如小麦中为N6 马铃薯 月季中为MS 油菜中为B5培养基 2 培养基的组成 培养基各成分中 植物生长调节剂的水平和配比 常对诱导细胞的分裂 生长和分化起决定作用 月季花的培养基配方在1000mlMS培养基配方中添加2 4 D0 4mgKT0 2mgIAA4mg调节PH为5 8 实验操作 一 材料的选取二 材料的消毒三 接种和培养 一 材料的选取 选择花药时 一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期 最常用的方法有醋酸洋红法 但是 某些植物的花粉细胞核不易着色 需采用焙花青 铬矾法 这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 4 用醋酸洋红法确定花粉发育时期的原理是 A 醋酸洋红可使细胞全部着色B 醋酸洋红可使单核期的细胞着色C 醋酸洋红可使花粉细胞核着色D 醋酸洋红可进入细胞显示放射性标记 C 二 材料的消毒 1 花蕾用V V为70 的酒精浸泡30秒2 无菌水清洗3 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4 放入质量分数为0 1 的氯化汞溶液中2 4分钟 也可质量分数为1 的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液 5 无菌水冲洗3 5次 用于培养花药 实际上多数未熟 由于它的外面有花萼 花瓣或颖片保护 通常处于无菌状态 所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可 三 接种和培养 灭菌后花蕾 要在无菌条件下除去萼片和花瓣 并立即将花药接种到培养基上在剥离花药时 要尽量不损伤花药 否则接种后 容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织 同时还要彻底去除花丝 因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 通常每瓶接种花药7 10个 温度控制在25 左右 不需要光照 幼小植株形成后才需要光照 一般经过20 30天培养后 会发现花药开裂 长出愈伤组织或释放出胚状体 将愈伤组织及时转移到分化培养基上 以便进一步分化出再生植株 如果花药开裂释放出胚状体 则一个花药内就会产生大量幼小植株 必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开 分别移植到新的培养基上 否则这些植株将很难分开 在花药培养中 特别是通过愈伤组织形成的花粉植株 常常会出现染色体倍性的变化 主要原因是营养核和生殖核融合造成的 故需对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选 植物组织培养技术与花药培养技术的比较 植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是 培养基配制方法 无菌技术及接种操作等基本相同 不同之处在于 花药培养的选材非常重要 需事先摸索时期适宜的花蕾 花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基 花药培养对培养基配方的要求更为严格 这些都使花药培养的难度大为增加 课题成果评价 选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关键 应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉 课题成果评价 无菌技术是否过关如果出现了污染