3-Methyladenine.docx

生物活性产品描述3-Methyladenine (3-MA)是一种选择性PI3K抑制剂，作用于Vps34和PI3K，在 HeLa细胞中IC50分别为25 M和60 M；永久性抑制I型PI3K，但对III型PI3K的抑制是短暂的，也会阻断自噬体的形成。靶点Vps34 1PI3K 1IC5025 M60 M体外研究3-MA对Vps34轻微的偏向性可能是由于Vps34中某个特异性的疏水环形结构可以环绕在3-MA的3-甲基基团外面造成的1 。据报道对于正常培养和饥饿处理的癌细胞3-MA都能引起细胞死亡。3-MA还可以不通过抑制自吞噬来抑制细胞迁移和入侵，这表明3-MA 除了抑制自吞噬之外还有其它生物功能。3-MA可以造成半胱天冬酶依赖的细胞死亡，这一功能与它对自吞噬的抑制无关。用5mM 3-MA处理葡萄糖饥饿Hela细胞可降低gfp-lc3阳性细胞比例至23%。3-MA处理细胞12到48小时内 LC3-I 的水平上升而LC3-II 水平下降。LC3-I转为为 LC3-II 的过程被3-MA抑制了。 2.5 mM 或5 mM 3-MA 处理HeLa 细胞一天并不影响细胞存活率, 而 10 mM 3-MA 处理一天会造成细胞存活率下降25.0% 。 2.5, 5 或 10 mM 3-MA 处理细胞两天分别使细胞存活率下降 11.5%, 38.0% 和79.4% 。3-MA 降低细胞存活率的作用具有时间和剂量依赖特性。3-MA 明显缩短nocodazole诱导的前中期阻断时间2。3-MA 通过抑制自吞噬来抑制SU11274诱导的细胞死亡3。 在野生型MEF细胞中延长 3-MA处理时间 (最多 9 小时) 明显造成 LC3 I 到 II 转换。延长 3-MA处理时间会明显增加GFP-LC3的聚集而wortmannin不具有此功能。3-MA介导的LC3 转换和游离 GFP 释放是ATG7依赖的。 3-MA处理会导致 p62 蛋白水平明显升高。即使在Atg5/ 的MEF细胞中3-MA 也会使p62 水平升高，就像在DOX介导的ATG5缺失的细胞中一样 。3-MA以不同方式抑制 I 型和 III型 PI3K。与野生型细胞相比，在Tsc2/细胞中3-MA诱导的 LC3 I 到 LC3 II 转换过程大幅下降。3-MA会破坏mTOR复合物1的拮抗自吞噬功能4。体内研究3-Methyladenine (3-MA)可以通过对磷酸肌醇3磷酸激酶(PI3K) 的作用来阻断自吞噬, 而PI3K的活性对于自噬体形成早期膜池的成核和组装是必须的。与SAH 处理组相比3-MA并不会改变出血的程度。与SAH +对照成分组相比经过3-MA预处理后会明显加重神经病学症状。3-MA处理会减少自吞噬发生5。 相反地,在SAH + 3-MA组里 断裂的半胱天冬酶表达量明显上调，与此一致的是与SAH + 对照成分组相比，SAH + 3-MA组中右脑皮层里原位末端标记阳性细胞数量明显增多5。特征推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性) 激酶实验: 4 Protein degradation assayHeLa cells are radiolabeled for 24 hours with 0.05 mCi/mL l-U- 14Cvaline. At the end of the labeling period, cells are rinsed three times with PBS. Cells are incubated for the designated times in either full medium or EBSS with or without the presence of 10 mM 3-Methyladenine.细胞试验: 2 细胞系HeLa 细胞系浓度1-10 mM处理时间3 分钟方法用台盼蓝染色法分析细胞存活率（如HeLa细胞）。简言之, 经过3-MA处理后将贴壁的与漂浮的细胞都用PBS( pH 7.4)重悬，密度控制在每毫升1-2106。加入等体积的0.4% 台盼蓝并彻底混匀。室温孵育3分钟后用血细胞计数器对细胞计数分析。动物实验: 5 动物模型体重 300-350 g 的成年雄性SpragueDawley 大鼠配制生理盐水配制剂量400 nM给药处理脑室给药不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）小鼠大鼠兔豚鼠仓鼠狗猴狒狒重量 (kg)0.020.151.80.40.0810312体表面积 (m2)0.0070.0250.150.050.020.50.240.6Km 系数361285201220动物A (mg/kg) = 动物B (mg/kg) 动物B的Km系数 动物A的Km系数例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg。大鼠剂量 (mg/kg) = 小鼠剂量 (22.4 mg/kg) 小鼠的Km系数(3)= 11.2 mg/kg大鼠的Km系数(6)1 参考文献 1 Miller S, et al. Autophagy. 2010, 6(6), 805-807. 2 Hou H, et al. PLoS One. 2012, 7(4), e35665.view more3 Liu Y, et al. J Pharmacol Sci. 2012, 118(4), 423-432. 4 Wu YT, et al. J Biol Chem. 2010, 285(14), 10850-10861.5 Jing CH, et al. Neuroscience. 2012.化学数据点击下载3-Methyladenine (3-MA) (SDF格式文件) 分子量149.15化学式C6H7N5CAS号5142-23-4稳定性3年 -20粉状6个月-80溶于溶剂别名NSC 66389 溶解性 (25C) *体外EMEM: Eagles minimal essential medium 25 mg/mL warmed (167.61 mM) 乙醇4 mg/mL (26.81 mM) DMSO3 mg/mL warmed (20.11 mM) 体内30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W30 mg/mL* 99%【同义名】：(3-MA)（NSC 66389）【中文名】：3-甲基腺嘌呤订购信息：（原装进口，常备现货）货号名称CAS号规格目录价IPA1009-0010MG3-Methyladenine (3-MA,NSC 66389）3-甲基腺嘌呤5142-23-410MG379 IPA1009-0050MG5142-23-450MG569IPA1009-0100MG5142-23-4100MG1049产品描述：3-Methyladenine (3-MA, NSC 66389)是一种广泛应用的细胞自噬抑制剂，可以抑制PI3K活性，具有限制性抑制作用，对PI3K Vps34的抑制作用强于PI3K，IC50分别为25 M，60 M1。 3-Methyladenine以时间和剂量依赖的方式降低细胞活力，其作用caspase-3的活化相关。在正常和饥饿条件下，3-MA都可以引起癌症细胞死亡，并抑制细胞迁移和侵袭，该作用与其抑制细胞自噬的能力无关2。3-MA阻断自噬体的形成，有效抑制细胞内蛋白降解，但是，对细胞内蛋白酶活性没有影响，抑制烟草细胞的细胞自噬反应3。产品结构：基本特性：CAS号：5142-23-4， 分子式：C6H7N5， 分子量：149.15溶解与保存：粉末直接保存于-20 C，有效期2年。DMSO溶解配制储存液（50 mM）。建议分装后-20C避光保存，避免反复冻存，至少可存放6个月。使用浓度：3-Methyladenine (3-MA)的具体使用浓度请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化。应用实例（仅作参考）：(1) 为检测3-Methyladenine (3-MA)对细胞自我吞噬的抑制作用，用5 mM 3-Methyladenine处理HeLa 细胞，结果显示，3-MA可以抑制无葡萄糖条件和正常条件下的HeLa细胞。为检测3-MA对HeLa细胞活力的作用，分别用0, 2.5, 5 和10 mM 3-MA处理 HeLa细胞，发现用2.5 mM或5 mM 3-MA处理HeLa细胞1天后不会影响细胞