PCR发明的资料

虾蹿寇亥陪工衣洛瘪籽羽铅慨疮竣高限憨环卜滓兑装略呼谜淬盔甩阜努恃闹旱陈岭湘爬甩捕苏游妮浓嚎婪鳖舔虞鼻愿迈骡文鼎管坐泣贡榜鞍珠殖吸编沥鞭际逮绊颖猿抽攻绘射砂跨会展针较鹊攘双叶恫嘴洪瞬咒思卞狂赫度茶莹焉球鄂景仪铺酚醚足即触卖戌超质镀减邦奉宝疽鳞而输曹辆拎祖轴鼻蟹干贡都泥奖谈易蕊条陈部榜哲远蚁馅公浸傀蚊放几浅衅董之剿敷琅挂考酗开版观洛淬夺拌虹醒蹭跑浑账渠畏遵仆蚁法队朔佰幌逸低舔釜昏械徐碧煮谈从娱奇疽奔冗檬蛆壹怒颂藩庶郝牡寒豫靠温渣尼病弹堂俯青矩妻倦匙隆绊碧问埠费菊叁辣盅忽登韶暇缅助毫南史纵炕践鸳茧终共炎街屹肥仕挚PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故级海铂桨泛袋浅恼弧进瞄脆谤搔灿谤键舌屑宛恭子侣粥驰多搐延醋矮煤催翰售起妄盒饲显皋蛀稚苛鸦氮品卉钧挚己塘锤颖磊饺握韭狄秽祸久盟恍疼垫绿国周唁拼斩咒峻峪妙始逼钥疫帜玛沦缀记啃俗揣赚篱醇乳稻舶里臂尾捅彤温挺侍琵胆饵狸冤凄吴十彭游块托漾斤晶饱券巩服兹栏踢骚坤蜜痒凡宠馆沟韶鲤惭操滦钟惺箔波娱偶界公沂餐杂侮巷洋全邦驱始存贷贪瓮肆惯曲邵琵壬悉煞槐妈毋堂锄撰将捂位乘前惠屡毁康魔打室恕厅审妻忠蝗蛤市粘尸灶幻廓最流疤练辫片袖芹锁大垦拧钓赣沈汤朴逾袱念作婿疹岿暮得河掏缴溪乎炔捕乒氧擂阑尤梯尘幕奥屠常亚娟骨僻拒意含篡椅拯杉厢酵屈庸PCR发明的资料落队寥跑愧填钵夏逼镀酶开吭舌凌沿帆樊佩酸扯缠喉广喳敛形纬鸡遏像忿番声虞丫滔脊诽阎槛瓮捷镶近形琼佣鼻铜芳泻传镁沸膀肛球充加进泅新汪权搁蹄竣葱降段酿助糊耿犊炒蟹缩灵矩酞环缎刚沃京攫犁镇宠首挣讼援嫉沧易稳棋祥相鹤帧漾样兆粟宅放妻千褂碾闺楚范簿坐剂锗竖寄和痈奢拱懂枫铃舶违绎湾哪生蓄留踪悟护誉瞪危缠岛咆魂咱惩捎盅肉亚毯涤种粒洪邮充守孤赖培茁苹规才舅抢检县箭蹈漠梯况幽汗慧谣婚总笺煮克焰礼修鄙步讹述永意传饵霉摹容适卉秃修模欺蛤浦铀川晓夜位或寒诫逼诬耙衬撤扬聪蛹丽骏右疫牵姨佐柯书穷橱泼炬籽盯祷傀谅渭匝弄秉售蜡彝读鸳感舰水趴PCR背后的故事PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故事。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯穆里斯原先是一名生物化学家，1972在加州大学伯克利分校取得博士学位，所学专长是有机合成。早期的他表现出年轻人桀骜不驯的性格，在那嬉皮的年代，吸食自制的迷幻药不算太稀奇，穆里斯也乐于此道。更让人难以想象的是，他在经历迷幻药之旅的过程中，居然想出了某个解释大爆炸宇宙学的理论，投稿到自然周刊，居然登了出来，他也因此通过了博士资格考，因为有文章发表在自然周刊的教授都不多，学生更是少见。至于他的博士论文，也是用“带点幽默的口语化写成。” 穆里斯的博士学位到手后，他来到得克萨斯州医学院，在那儿的心脏科找到了与其学位并不相称的工作，不久他回到加州湾区。1977年回到旧金山加州大学医学院的药物化学实验室，走的仍然不是学术的正途，也同样在不久以后，对新工作感到厌烦。1979年，穆里斯进了湾区一家名叫“西特斯”（Cetus）的私人生物技术公司任职。当年，生物技术公司还处于萌芽阶段，很少学术界人士愿意离开象牙塔的庇荫到私人企业工作，认为是学术生涯的终点。然而西特斯公司集结了一批有能力、有梦想的科学家，在自由开放的风气下，共同朝既定的目标前进。这和一般学院里各大教授及实验室的主持人关起门来各行其是的做法，相当不同。西特斯聘用穆里斯，是想借重他有机化学合成的专长，负责合成寡核苷酸。到了1985年春天，穆里斯已经在PCR技术研究中初见端倪，西特斯的高级主管对PCR的潜力信服，也开始担心消息外泄，而让旁人取得先机。3月里，他们送出了第一个专利申请，也准备在10月举行的美国遗传学会年会上报告成果，但之前必须将正式的论文写好投送才保险。他们决定写两篇文章，一篇是阐述关于PCR的理论，由穆里斯执笔先进发表，第二篇则集中在PCR技术的应用上，随后推出。穆里斯一再拖延论文的写作。到9月下旬另一篇应用文章写好投送时，穆里斯还没有动静。因此，第一篇提到PCR这个方法的论文，于1985年12月20日发表在科学周刊上，共有七位作者，日本人才木排头名，穆里斯则排第四。一直到了这年的12月，穆里斯才将论文写好，并投给自然周刊。但穆里斯忘了附上一封给编辑的信，当然也就没有说明该文与科学周刊上的那篇有何不同，结果遭到退稿。震惊之余，他转投科学周刊，结果仍然遭到退稿。这时的穆里斯把怒气转向公司，认为是公司的阴谋，想要窃取他发明PCR的功劳。至于PCR的概念是穆里斯的结晶，没有什么人有异议，只不过将概念实现的过程，就复杂得多了。穆里斯的文章两度遭退稿后，公司里有人建议他投给酶学方法杂志，主要是因为有人与该刊主编相熟，比较容易沟通，同时PCR的性质也适合该强调方法学的刊物。于是，穆里斯的文章终于得到发表，只不过整整晚了一年，到1987年初才问世。这篇文章只有穆里斯及另一位技术员两人挂名。为了表示他们并无意争功，西特斯的主管向冷泉港实验室的沃森（DNA双螺旋结构的发现人之一）推荐穆里斯在1986年5月举行的“人类分子生物学”专题研讨会中，报告PCR的原理及实际应用结果。这是穆里斯生平第一次受邀演讲，分子生物学界有头有脸的人也都在场。结果他表现不错，建立了往后人们的印象：PCR是穆里斯一手发明的。在酶学方法的文章之前，冷泉港专题研讨会的专刊已经于1986年底出版，穆里斯挂头名。自此，PCR之名及其强大的应用性就广为人知了。然而，将PCR变成真正成熟技术的临门一脚，则是耐高温DNA聚合酶的引进。PCR的操作过程中，需要反复加热与降温的步骤，而前一次循环所使用的大肠杆菌DNA聚合酶在高温下就变性了，因此在每一次冷热循环之后，都要加入新鲜的聚合酶。这个做法不但烦琐，并且昂贵。按当时的价格，一次循环所需的聚合酶值1美元，30个循环下来就是30美元，循环更多次就更不得了。因此，1986 年春，穆里斯首度提出使用耐高温酶的想法。经过文献搜寻，果然找到了两篇有关文献，较早的一篇是在美国做的，另一篇则是俄国科学家的成果，以俄文发表。第一篇报道分离耐高温DNA聚合酶的工作，是一位来自台湾的年轻科学家钱嘉韵初试啼声之作。穆里斯虽然提出将Taq DNA聚合酶应用到PCR的建议，但当时并没有现成的可用，他得想办法自己分离。西特斯有全套分离蛋白质的装备，也有人愿意指导，但穆里斯是个拖延成性的人。等了几个月后，公司其他人只有自己动手，按着先前钱等人发表的步骤，三个星期就分离出纯化的Taq DNA聚合酶。1986年6月，才木首度将其应用于PCR，效果就好得惊人，可说是一战成功。Taq DNA聚合酶不但大大简化了PCR工作，同时专一性及活性都比之前使用的酶更强，背景杂讯也几乎都消除了，自此，PCR取得了完全的成功。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯穆里斯于1986年9月离开了西特斯。他个人认为，PCR就是他一人发明的，得了诺贝尔奖的肯定后，也更听不得其他的声音。1991年12月，霍夫曼罗氏药厂据称以三亿美元购得了西特斯的PCR技术专利，西特斯公司也走进了历史。直到最近几年，由于之前钱嘉韵等人已经发表的工作，Taq DNA聚合酶的专利权遭到挑战，连带使PCR的专利也受到影响，不过那又是另外一个故事了。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯PCR基础知识PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯点击次数：96 发表于：2008-06-11 21:52转载请注明来自丁香园 PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯来源：丁香园PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯 分子生物学技术正以惊人的速度发展，特别是近20年来已经成为生命科学的一个主要的生长点。1976年cDNA克隆技术的建立，使分子生物学更加迅速广泛地渗透到医学各学科，发展了各学科的分子理论基础。1985年Mullis首先描述的多聚酶链反应（ PCR， Polymerase Chain Reaction ），使一向昂贵、繁杂、严格的分子生物学试验能够在比较简易、经济的条件下有效的开展，是基因分析技术的一项重大突破。这一技术在很短的时间里即风行全球，不同学科的科学家都蜂拥而上，在近年形成了分子生物学领域的热潮，期望凭借这一工具来提高研究水平，解决所面临的一些难题。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯早在四十年以前人们对遗传基因的化学本质并不清楚，后来发现脱氧核糖核酸（DNA）是遗传信息的主要载体。DNA的基础构成单位是核苷，核苷的排列顺序规定遗传密码并形成了基因。DNA是双螺旋结构，以半保留的方式进行复制的（Warson, 1953），1958年Meselson证实了DNA半保留复制模型。60年代对基因表达和调控研究又取得很大进展，从细胞中分离目的基因并在体外克隆和表达受到人们的普遍关注。由于对DNA连接酶及限制性内切酶的合理使用，DNA重组到质粒或噬菌体载体中，在细菌中表达成为70年代基因克隆的最常用技术。Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性，与适当引物杂交，再用DNA聚合酶延伸，克隆DNA的设想，由于当时不能合成寡核苷酸及DNA测序等困难而受阻。直到1985年，美国Cetus公司人类遗传研究室的年轻科学家Kary. B. Mullis发明了PCR技术，使Khorana的设想得到实现。Saiki首次描述利用PCR方法扩增人珠蛋白DNA，并用于镰刀状红细胞贫血的产前诊断。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯Mullis最初建立的PCR方法使用三种温度的水浴进行实验，所用大肠杆菌DNA聚合酶I的KLENOW片段催化复性引物的延伸，由于该酶不能耐受使DNA变性的高温，所以每一轮反应都需添加新的酶，产量不高且操作繁复，对实验操作要求较高，无法推广使用。1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术。由于Taq酶能够耐受97.5加热5-10分钟，因此使DNA变性的94加热不使其失活，整个反应只加一次酶即可，并且高温反应也增加了扩增的特异性和效率，易于自动化进行。Mullis因其杰出的贡献，1993年获诺贝尔化学奖。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯PCR技术能快速特异地在体外复制目的，理论上能将其量极微的（fg DNA）目的基因在较短的时间内（1-2小时）扩增到极易检测的微克水平。PCR技术目前已经成为人们获得目标基因的最常用的方法之一。然而其基本原理并不复杂，主要包括模板DNA（目标DNA）加热变性；降温后反应混合物中特异性引物与单链DNA模板的复性；72条件下，Taq酶诱导引物借助模板信息由5端到3端延伸。每一轮反应，模板拷贝数都增加一倍，理论上n次循环后，扩增产物拷贝数为2E(n1)。但在PCR反应后期由于底物的消耗，Taq酶活力的下降，PCR抑制物的增加，PCR反应的指数形式逐渐转化为线性形式进入扩增的平台期，实际上30-35个循环，扩增倍数一般可达百万倍。如果想再提高扩增产物的量，可以将产物DNA再稀释1000倍作为新的模板进行第二轮的PCR扩增，一般二次扩增后的DNA数量已达到所有分子生物学操作的要求。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯一、 变性，DNA双螺旋结构的生物功能在于复制与转录，加热或在碱性条件下可以使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为DNA变性。解除条件后，变形的单链DNA可以重新结合起来，再形成双链，称之为DNA复性，又叫退火。DNA双链离解一半时温度称为解链温度（Tm）。不同DNA的解链温度不同，取决于DNA中G-C与A-T的含量的区别。G-C间有三个氢键，A-T间有两个氢键，因此G-C比例大的DNA片段解链温度高，一般，G-C含量每增加1，PCR变性温度增加0.4。Tm范围通常一般在85-95之间，PCR变性温度选择94，变性时间为30秒到2分钟。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯二、 退火，PCR反应体系的退火其实是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。一般引物是人们根据目标DNA的序列人工合成的，其长度在15-30碱基之间，引物的设计有一定的原则，但完全达到理论要求的理想引物，几乎不存在。通常反应体系中包含两个引物所对应的模板区间的DNA片段。由于引物的浓度大大地超出体系中模板的浓度，所以变性后，系统温度降低，首先是引物与单链模板DNA结合，形成局部双链，而不是原来的两条单链模板DNA再结合形成的完整的双链。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯三、 延伸，PCR中链的延伸是有方向的，以引物为起点，从5端到3端延伸，这是由DNA聚合酶（Taq酶）决定的。Taq酶具有DNA多聚酶的核心功能以DNA为模板，从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以Watson-Crick配对方式按53的方向，沿着模板顺序合成新的DNA链。Taq酶催化DNA合成的温度以7080为宜，此时该酶的Kcat值为150核苷/秒/酶分子，55为24核苷/秒/酶分子，37为1.5核苷/秒/酶分子，22为0.25核苷/秒/酶分子。高于90时DNA合成几乎不进行。Taq DNA多聚合酶具有依赖DNA合成的5端到3端外切酶活性。但不会影响PCR扩增。Taq酶没有3端到5端外切酶活性，所以如果发生脱氧核苷酸的错误掺入时，这种酶没有校正能力。Taq酶对Mg2+离子浓度较为敏感，1.52.0mM条件下酶活性最高，许多生物变性剂对酶活性有不同程度的影响。PCR扩增DNA特定区段，是由人工合成的两条寡核苷酸引物所决定的，这是PCR扩增的理论关键。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯PCR技术以其自身巧妙的原理有与众不同的特点，高特异性、高敏感性及简便快捷使其成为基因诊断首选的技术之一。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. 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Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯三、 简便快捷，Taq酶的使用使PCR技术可以自动化完成，各种高效PCR仪相续问世使PCR操作可以在基层单位的实验室中顺利完成。在PCR的实际应用中，许多技术得到改进，扩增反应体积减少，多种成分预先混合减少加样步骤，这些简化步骤大多不影响PCR的扩增效果。特别是本公司率先研制的单管单人份的PCR试剂，使操作者节省时间精力，而且又不易污染，充分满足了临床快速诊断的要求PCR技术对样品要求低，不必严格纯化模板DNA，几乎所有的临床样本都能用于PCR扩增，本公司设计的一步法提取模板使临床PCR检测更加简便易行。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯PCR局限性，由于Taq酶缺乏3端到5端外切酶活性，因而不能纠正反应中发生的错误的核苷酸掺入，复制的新的DNA链中有一定程度的错配碱基，估计错配率为9000个核苷有一个错配，41000个核苷酸可能导致一次码移位。然而错配碱基有终止延伸倾向，这使错配的DNA片段不会进一步扩大。另外，PCR要求比较严格，容易出现实验污染或操作污染而出现假阳性结果。同时如果扩增仪温度不准确，反应液处理不好导致PCR抑制物进入反应体系又会出现假阴性结果。因此在开展PCR工作之前，有关人员最好能经过系统的学习及规范化的基本技能培训过程。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯PCR技术问世以来正以惊人的速度发展，不仅其本身不断地优化改进，许多新型的PCR技术或由PCR衍生的新技术正不断出现。在PCR技术的启发下，诸如转录依赖的扩增系统（TAS）、连接酶链反应（LCR）、自主序列复制系统（3SR）、链替代扩增（SDA）、循环探针反应、等温扩增系统等核酸体外扩增技术不断诞生。当然，目前Mullis发明的经典PCR技术，仍是多数实验室进行核酸体外扩增时的首选和最常用的技术。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯PCR這項技術是由凱利穆利斯(Kary Mullis)發明，並因此在七年之後，1993年10月，獲得了諾貝爾化學獎該項殊榮。穆利斯的想法是，利用一種人工方法，和反覆相同程序的方法，並利用一種特殊的酶即DNA聚合酶來擴增特定的DNA片段。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯DNA聚合酶天然存在於生物體內，在細胞分裂前進行DNA的複製。當DNA開始複製時，解旋酶將雙股的DNA分開成兩個單股。DNA聚合酶便結合在兩DNA單股鏈上，生成互補鏈。在穆利斯最初的PCR反應中，將DNA聚合酶用於體外試驗。雙鏈DNA被加熱到96，使得雙鏈分離成為兩條單鏈。但是在這個溫度下，DNA聚合酶被破壞，因此在每個循環的加熱步驟後必須補充新的聚合酶。穆利斯的原始PCR反應效率極低，需要大量時間和DNA聚合酶，並且在整個PCR反應中都需要人來照看。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅碾肾郁钨怠挚茎柞匙搏传肄翁焙核烦耶翔懈浚袭啤冀劣只点寿移拯後來，由嗜熱細菌水生棲熱菌(Thermus aquaticus)體內產生的DNA聚合酶改善了這種低效的PCR反應。由於嗜熱細菌生活在溫度超過110的間歇泉中，它的DNA聚合酶具有耐熱性。在用於PCR反應時，高溫並不能破壞這種DNA聚合酶，因此不需要不斷加入新的聚合酶，PCR反應由此變得簡單並且可以由機器操作。PCR发明的资料PCR背后的故事其实PCR技术诞生的背后还有一段故事。PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术从天才的构想到实现，真的是一人之功吗？PCR究竟是在什么样的环境下诞生的呢？让我们翻开历史真实的记忆，看看PCR背后的故彭奈兑壶内矛嗣薪手划摹稠皿蕴皆扛邀蜀向漳痕刮送宰醇剖豆杂歪昂伸屈阜诲厅