安捷伦1220高效液相色谱仪操作规程.doc

学习资料收集于网络，仅供参考安捷伦1220高效液相色谱仪操作规程1.目的：确保安捷伦1220高效液相色谱仪的正确使用和维护。2.适用范围：安捷伦1220高效液相色谱仪在使用中的操作。3.职责：化验员负责实施，品控部经理负责监督。4.操作规程4.1工作原理HPLC由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成，工作时储备器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。4.2操作步骤4.2.1开机 先打开仪器电源，打开电脑桌面上的【1220联机】图标，进入软件视图介面，双击【控制】图标下的【仪器状态】图标，点视图介面上的【开启】图标，待视图介面各状态都变成绿色后，先打开【冲洗阀】排除系统中的气泡，光标移到视图菜单【梯度泵】，右键点击【方法】将【流量】改成3mL/min,溶剂A （100%）、B（100%）各放空冲洗35分钟后（无气泡），关闭【冲洗阀】。将【流量】设为所需流速，用纯有机相冲洗系统30分钟，（如果使用缓冲溶液与盐做流动相需用10%的有机相+水冲冼系统30分钟后更换流动相）换上所需流动相（排气泡）平衡仪器稳定。4.2.2方法的建立点击视图菜单中的【仪器向导】双击视图菜单中的【创建新方法】，将方法改好后，点【文件】另存为【方法】命名，点【控制】【下载方法】点查看【在线信号】看基线是否平稳。4.2.3 序列的建立在视图菜单中点【序列】中的【编辑】，将序列中的【重复次】【样品瓶】【体积】【样品ID 】【方法】【文件名】【样品制备】（样品制备视情况设定）编好后点【文件】另存为【序列】设好文件名，保存。4.2.4 分析样品待仪器基线平稳后，查看软件上方的方法与序列是否是你所需要运行的序列，并检查好样品瓶与洗针瓶（需要才放，视方法而定）的位置与序列中设置的是否能对号入座，如果是的话就可以点【控制】下的【序列运行】4.2.5数据分析 打开电脑桌面上的【1220脱机】，点视图上的【文件】打开一个【结果集】或【数据】 选中所要处理的图谱，点视图上的【文件】打开【方法】，找到【积分事件】进行谱图优，将积分变化保存到方法，点视图【分析】（如外标法）等所需峰出来后，点视图上的【定义单峰】后，点【分析单一级别校正】后点【检查校正】就能得出曲线。4.2.6外标法需计算得出结果（按使用方法上的计算公式来计算）4.2.7 关机打开电脑桌面上的【1220联机】图标，进入软件视图介面，双击【控制】图标下的【仪器状态】图标，光标移到视图菜单【梯度泵】，右键点击【方法】将【流量】改成0mL/min,打开【冲洗阀】【应用】再将溶剂A （100%）、B（100%）各【流量】改成3mL/min放空冲洗35分钟后（无气泡），关闭【冲洗阀】。将【流量】设为【1mL/min】，用纯有机相冲洗系统60分钟，（如果使用了缓冲溶液与盐做流动相需用10%的有机相+水冲冼系统90分钟后更换流动相，换上纯有机相后排气泡再冲洗60分钟）仪器冲洗好后点【控制】图标下的【仪器状态】图标，光标移到视图菜单【梯度泵】，右键点击【方法】将【流量】改成0mL/min,【应用】点视图介面上的【关闭】图标，待视图介面各状态都变成灰色后，关掉仪器上的电源，电脑关机。4.3注意事项4.3.1 HPLC必需使用色谱纯试剂与超纯水，溶剂需先脱气与过滤后使用，避免溶剂瓶直接日照，定期更换溶剂，避免使用对不锈钢有腐蚀性溶剂，不使用混溶性溶剂，样品的检测波长应至少大于所用溶剂的截止波长20nm以上。水最好放在棕色瓶中，以防长菌（也可加入少许叠氮化钠或有机溶剂，抑制长菌。）4.3.2 选用色谱柱必须与仪器连接性好，减少死体积，新装到系统上的色谱柱需要进行初始化：先断开柱子与检测器间的管路，用流动相将色谱柱中的原有流动相或气泡移出色谱柱，再将色谱柱和检测器间的管路重新接好。4.3.3 玻璃吸滤头不能用超声波清洗，用36%的浓硝酸浸泡2个小时左右。5. 仪器的保养与维护5.1日常开机操作时需要进行系统的初始化和柱平衡，每天实验结束前都应该用适当的溶剂充分冲洗色谱柱，不同色谱柱所需的冲洗溶剂也不相同，请参考所用色谱柱的说明书进行操作。5.1 .1定期更换冲洗阀的PTFE过滤白头，在实验室中至少应备有510个过滤白头，一般打开冲洗阀，以水为溶剂，流速为5ml/min,系统压力大于10bar就应该更换冲洗阀中的过滤白头了。5.1.2当使用缓冲盐做流动相的时候 ，采用手动控制密封垫清洗装置（乳胶管和流量调节器），一般维持每分钟几滴的流量清洗缓冲盐即可。5.1.3 使用自动进样器时，样品瓶上的盖密封垫为一次性用品，需要及时更换，而且在盖样品瓶时不能盖得过紧，以不漏为准，过紧对进样针会造成损伤。5.1.4