【毕业学位论文】（Word原稿）金丝桃素的提取与化学合成工艺的研究基 础 兽 医 学硕士学位论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 金丝桃素的提取 与 化学合成工艺的研究 on of on of of I 摘 要 金丝桃素 (贯叶连翘中最具有生物活性的物质之一，研究发现其具有良好的 抗抑郁、抑制中枢神经、抗病毒活性和抗肿瘤的作用 。 其来源主要有两方面 ,即 贯叶连翘植物的提取 和化学合成 ,目前国内外均有报道 ,但前者存在提取分离工艺烦琐 ,后者存在产率低成本高等 问题 ,而使金丝桃素的产业化受阻 。 为此，本实验研究综合国内外的文献资料， 对其 提取和 合成工艺 路线进行优化 改进，具体设计如下： 金丝桃素的提取分离采取了两步除杂的方式 ， 然后经过乙酸乙酯萃取 ,浓缩萃取液为浸膏 ,后分别用 40%和 80%的乙醇作为洗脱剂 ,利用大孔吸附树脂柱层析进行分离 ,收集红色段液体 ,减压浓缩得金丝桃素浸膏 踪实验 ,最后通过 定金丝桃素浸膏含量。 成 以丙酮和甲酸乙酯为起始原料 ,经过缩合反应甲基化反应酰化反应还原反应等一系列化学反应最终 合成目标化合物金丝桃素 ， 期间我们对一些重要的中间体如 24 24 1,6,83黄素）以及 金丝桃素的化学结构经过了熔点的测定 ， 红外光谱（ 质谱（ 和核磁共振氢谱 （ 1波谱 的确证。 本研究通过实验条件的反复摸索，确立了适合本实验研究的金丝桃素含量测定方法，并严格按照药典（ 2005）规定对本实验提取的金丝桃素浸膏以及金丝桃素合成品进行了含量测定。 取得的结果如下 : 1. 从贯叶连翘中提取分离的金丝桃素含量达 远远超过国际市场上要求的 且提取率 (也超过了国内所报道的数值 ， 其产品具有吸湿性低发粘性低的特点。 2 经过一系列反应合成的金丝桃素的产率为 31%， 含量达到85% 极大的降低了成本 ， 并同时得到了几个重要的化学中间体。 综上所述 ,本实验所设计的关于金丝桃素的全合成路线和提取路线均有较好的可行性 ,为金丝桃素的产业化提供了有利的依据 ； 所建立的 测金丝桃素含量的方法，简便快速、灵敏准确 ， 适用于金丝桃素的提取分离，以及化学合成的整个生产 过程中的质量控制。 关键词： 贯叶连翘 , 金丝桃素，提取，分离， 化学合成， 含量测定 is of of It of of is at of of it So in of to as 1. of to by to 0% 0% to In we 2. as a of as to To we of 2 S 3. to to to 005) We to by as as to a of its its 5% we . of . It of in to of to of of . ， 录 第一章 文献综述 . 1 1 研究的目的和意义 . 1 2 贯叶连翘的研究进展 . 2 3 金丝桃素的研究进展 . 6 4 展望 . 14 第二章 贯叶连翘中金丝桃素提取方法的改进 . 15 1 材 料 . 15 2 工艺流程 . 15 3 实验部分 . 16 4 金丝桃素浸膏的检测 . 17 5 结果 . 19 6 讨论 . 19 第三章 金丝桃素的化学合成 . 22 1 材料 . 22 2 合成路线设计 . 22 3 实验内容 . 23 4 结果 . 30 5 讨论 . 30 第四章 金丝桃素的含量测定 . 38 1 材料 . 38 2 实验内容 . 38 3 结果 . 41 4 讨论 . 43 第五章 结 论 . 44 1 金丝桃素化学合成实验结论 . 44 2 贯叶连翘提取金丝桃素实验结论 . 44 3 金丝桃素含量测定实验结论 . 44 参考文献 . 45 致谢 . 50 作者简历 . 51 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 1 第一章 文献综述 1 研究的目的 和意义 贯叶连翘（ ）是藤黄科金丝桃属多年生草本植物，又称贯叶金丝桃、千层塔、小过路黄、小对月草、上天梯等。原产于欧亚大陆，生于山坡、草丛、田埂、路边。药用已有 2400 余年的历史。贯叶连翘味：苦、辛，性：平，全草入药，作为传统的中药，它具有清热解毒，收敛止血，利湿等功效。现代药理学研究证实其具有收缩血管、升高血压、利胆、抗菌、驱虫等作用，常用于抗菌消炎，治疗黄疸、尿路感染等，国外常用于多种疾病，如抑郁症、刀伤、肿瘤等，我国民间常将其全草鲜品捣烂或干品研末敷患处。贯叶 连翘是美国草药药典（ 已收入的有限几种草药之一，它作为食品添加剂已被广泛的使用，其提取物在美国市场份额的排名由 1996 年的 20 位之外到 1997 年的第 5、 1998 年的第 2；德国用它作抗抑郁症药已有 100多年的历史，其浸膏制剂已占领德国抗中、轻度抑郁症药物市场的将近 50%。金丝桃素（ 为贯叶连翘中最具有生物活性的物质，近年来的研究表明，金丝桃素具有抗抑郁、抗菌消炎、抗肿瘤、抗 毒等药理活性。此外金丝桃素还是一种有效的光敏剂，在光动力学治疗中表现出强的诱导肿瘤细胞凋亡的活 性 (， 2002； M, 2000)。在德国，金丝桃素已与蛋白结合，用于治疗艾滋病及甲乙型肝炎 (潘映红等 ,1993) 。由于金丝桃素具有的多种药理作用，使其成为当前国际研究开发继人参、银杏叶、红豆杉之后的热点之一，具有重大的新药开发价值。 目前全世界需要金丝桃素提取物 5 万吨以上，而现在仅能提供 2 万吨，其中我国占 60%，我国虽盛产贯叶连翘，但资料显示金丝桃素在贯叶连翘全草中的含量仅有万分之几，因此只有通过化学方法对其进行提取和精制，才能达到国际市场对贯叶连翘提取物中金丝桃 要求。国内有关金丝桃素的提取工艺研究进行的较晚，直到上世纪 90 年代末才有报道。到目前为止，现行的生产工艺大部分还停留在金丝桃素的提取工艺上，对其分离、纯化的方法研究的较少。而且尚存在产品易发粘、易吸湿、含量较低等缺点，本实验旨在对现行金丝桃素的提取工艺进行研究基础上进行改进，探索出一条较为理想的的分离、纯化工艺，为新药研究、开发指明了方向。 贯叶连翘的活性成分金丝桃素在花叶等器官中含量最高 ,因而多在花期大量采收 ,致使开花结果中断 ,个体繁殖受阻，种群数量剧减，导致资源严重枯竭。鉴于金丝 桃素类的重要药用价值和广阔的市场前景 ,凭借单一的提取、分离工艺远远不能满足市场需求，达到实现金丝桃素中试及产业化的目标有一定的困难，因此在不提高生产成本的前提下，我们考虑从化学合成的角度来实现这一目的，对实现金丝桃素中试及产业化的目标有一定的现实意义。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 2 2 贯叶连翘的研究进展 叶连翘的形态和分布 贯叶连翘（ .）在西方国家又名圣约翰草（ s ,为滕黄科金丝桃属 (.)植物贯叶连翘的全草（张群豪，等， 2002） , 这种野生 植物的全草或带根全草有药用价值。 贯叶连翘为多年生草本植物，株高 20 100直立 ,多分枝 ,茎或柄两侧有凸起纵脉一条 较密 ,无柄 ,椭圆形至条形 ,长 1 2 部抱茎 ,全缘 ,叶面满布透明腺点。花较大 ,黄色 ,成聚伞花序 ,萼片 5,分开 ,长 圆形或披针形 ,边缘疏布黑色腺点 ,花瓣 5,分开 ,长 花瓣较萼片长 ,花瓣边缘及花药上都有黑色腺点。雄蕊多数 ,子房 1室 ,花柱三裂 长约 5约 3子黑褐色 ,圆柱形，长约 1纵 棱，表面有细蜂窝纹。花期 6 7月，果期 9 10月（沈兆邦，等， 2000） 。 商品干燥药材主要是植物顶部开花的部分，包括叶、未开的芽以及花。叶为椭圆形至长方形，小而对生，无叶柄，绿色至灰绿色，无毛，全缘。花瓣为黄色至黄 棕色。干药材中有完整的花序或碎片。在 10倍放大镜下观察，可见叶和花具有许多特征的腺孔，直径 阳光下，叶腺透明，花瓣边缘的腺点为黑色。茎呈灰绿色，圆筒形，空心，有区别于本属其他种的特征性的不明显的长而对生的脊。粉末呈绿色到黄棕色，若花和未开的芽的量较多，则黄色更为明显。气味微 甜、有类似香脂的芳香气味。味道微甜，类似树脂且略带涩味（刘一兵， 1998）。 该属全世界约有 400余种，广泛分布于欧洲 (冰岛除外 )、小亚细亚、俄国、印度、北非、美洲、澳大利亚、北美（除在加拿大的最北端地区和美国的最南端地区无贯叶连翘生长外 ,其他各地均有其生长）。我国有 55种， 8个亚种，主要分布于四川、陕西、河北、山东、江西、江苏、湖北等地。 叶连翘的栽培、采集、加工及贮存 叶连翘的栽培 由于贯叶连翘和金丝桃素的多种药理作用，使其成为当前国际研究开发的热点。近年来，由于世界范围内对贯叶连翘大规模的开发利用 ，使贯叶连翘野生资源几近枯竭，传统的栽培技术己中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 3 不能满足市场需求，因此栽培技术的革新迫在眉睫。有关研究表明，贯叶连翘对土壤要求不严格，喜温暖气候，以湿润肥沃的沙壤土或夹沙土为佳。为防止铅和工业污物粉尘等，应选择远离公路及城市工业区的地块。要按照中药材生产规范和标准进行生产栽培。要求在前一年秋深翻地，并结合地块肥力拌入农家肥，尽量少施化肥。在病虫草害防治上应尽最大程度降低农药残留和重金属含量，以生物防治为主，结合化学防治，去除杂草和害虫，达到提高药材品质，满足制药企业及医疗保健事业的需求（刘继永，等， 2001） 。 叶连翘的采集 贯叶连翘的主要有效成分金丝桃素的含量与其贯叶连翘品种、采收方式、湿度、纬度、以及植物的不同部位关系密切，如澳大利亚的某一窄叶品种叶中含金丝桃素为 而同一地区的宽叶品种叶中含金丝桃素仅为 0. 037% 0. 058%，相差 3 倍。同一品种不同部位金丝桃素含量差异也很大，如同一宽叶品种，不同部位金丝桃素的含量分别为主茎含 侧枝含 底部叶含 顶部叶含 叶芽含 而花含 所以应选择金丝桃素含 量高的品种进行栽培，在盛花期进行采收，植物顶部开花的部位收割包括花、上部茎、叶和侧枝 (大约是顶部 10 30位 )。若连主茎及下部叶全部采集，则主成分相对含量将明显下降，其提取物主成分含量则达不到规定的质量标准。由于其主成分光敏性强，能使眼睑和前额发泡，所以采收时必须十分小心，最好戴手套，避免眼和外露的皮肤与植物接触（ et 1991）。 叶连翘的加工贮存 由于贯叶连翘中主要有效成分萘骈二蒽酮和间苯三酚化合物对光和热均不稳定， 14天内即降解。因此采收后应尽量避光并力求迅速干 燥。干燥方法以微波干燥为好，能最大限度地保存金丝桃素和伪金丝桃素（ ,et 1994），先以液氮处理，然后再冷冻干燥，黄酮类化合物和原花青素的含量明显提高。在 70下干燥 10h，也有利于各种成分保存 ;最好在开花起始期(6月 8月 )采收，将植物打成捆， 然后干燥。在天气温和条件下，可将植物铺在平板上干燥，在冷湿气候，则可吹以 30 40热风，在通风处尽快阴干也是可取的土办法。切不可在阳光下曝晒， 如在日晒下干燥将导致 80%的金丝桃素因氧化而损失。干燥的提取物在 20下可稳定贮存 1年以上 ，如在 60贮存 6周，金丝桃素含量就要迅速下降。所以新鲜植物必须在采集之后立即加工，在运输中可加冷冻剂或置于冷冻箱中，必须包装严实，使之保持干燥，防止光照和氧化，冷冻剂不能接触药材，以防药材污染。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 4 叶连翘的化学成分 贯叶连翘含有许多有效成分，包括苯甲基二蒽酮（如金丝桃素 其衍生物、伪金丝桃素 间苯三酚衍生物（贯叶金丝桃 贯叶金丝桃花青素 鞣质 及黄酮类如芦丁、 橡黄素、槲皮苷、和双芹菜甙元 ,此外，还含有一些挥发油、胆碱类、氨基酸和维生素等物质 (985； Ha et 1993； 1989)。一般认为 s 贯叶金丝桃素（ 因此许多厂商均以此两种成分为展品标准化的监控指标，进行原料筛选和产品质量监控。其中金丝桃素 (从贯叶连翘中提取的具最有生物活性的一种萘骈二蒽酮类化合物，首先作为抗菌活性物质由俄国 科学家发现并命名，并在 1975年测定其化学结构（白洁，等， 2004）。 叶连翘的质量标准及管理情况 美国草药药典 (定 “ 贯叶连翘 ” 由新鲜或干燥的整株植物或植物的某一部位组成，含金丝桃素 (萘骈二蒽酮化合物按金丝桃素计 ) 不低于 异物不高于 2%，总灰分 5%，酸不溶灰分不高于 水分不高于 12%，干燥失重不高于 10% (1000g 草药于100 105 干燥 2h)，鲜花水分不高于 干花水分不高于 6%，贯叶连翘提取物中 金丝桃素含量 文献（ 刘兵 .， 1998）报道德国：（德国药物法规） 1986 年规定贯叶金丝桃（药材）按金丝桃素 计算含金丝桃素类化合物不得少于 并规定适用于植物神经紊乱、抑郁、 恐慌、神经性焦虑、肌肉疼痛和级烧伤。 德国批准的标准金丝桃浸膏制剂 (含总金丝桃素 )， 用于治轻、中度抑郁症。 法国 :批准外用于荨麻疹、皲裂、挫伤、冻伤、虫咬伤、口腔和咽喉疼痛。 英国 :草药药典规定 (贯叶金丝桃 )作镇静和收敛用 ； 外用止痛、防腐抗菌 ； 适用于绝经后神经官能症、兴奋、神经痛、纤维组织炎、坐骨神经痛。 欧洲议会 ：认为 将贯叶金丝桃作为天然香料原料，规定在食品制品中金丝桃素含量不得超过0. 1mg/ 美国 :将贯叶金丝桃作为食品补充剂管理， 1994 年美国联邦注册办公室批准其作为饮料中的天然芳香剂，但其中必须不含金丝桃素。贯叶金丝桃是美国药典委员会推荐的 一种植物药， 1998 年 中载有贯叶金丝桃原料的 别、包装、贮存条件。说明书 (包括拉丁名 )微生物限制、总灰分、有机异物、水分、农药残留量等的规 定。 加拿大 : 1996 年加拿大非处方药管理局在 国家对活性组分的政策 中批准贯叶金丝桃的传统适应症为镇静，健神经剂、利尿及胃肠不适时抗痉挛，外用作为治伤痛药、皱缩以及缓解痔疮。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 5 叶连翘的开发现状及前景 叶连翘的开发现状 我国贯叶连翘地理分布广 ,资源丰富， 临床应用历史悠久。但 目前在资源开发利用以及药材收购、生药使用等方面存在着许多的问题。例如在采集、收购、加工等过程中混入多种伪品，其中最常见的混伪品是同科同属的赶山鞭 (在形态上与贯叶连翘极为相 似。此外贯叶连翘大都在花期进行采收，由于采收的盲目性，造成了严重的资源枯竭等问题， 极大地限制了我国贯叶连翘的开发利用及其产品的临床应用。 叶连翘的发展前景 医药行业中的发展前景 随着现代社会人们生活紧张，生活节奏加快，工作压力加大，抑郁症是三大精神病之一，且有上升趋势，已成为现代社会的常见病，因此寻找适宜的治疗药物对改善生活质量有着重要的意义。在中医药领域科技发展“十五”计划中，“抑郁症”的研究已作为重大科技问题的内容之一，要求“加强证侯演变规律的流行病学研究，寻找调节生理机能和心理状态的有效方法和系列 药物”。 贯叶连翘经过几个世纪的应用和大量的临床实验证实了它的安全有效性，引起了医药界的重视，对它的需求量与日俱增。从欧洲应用情况看，既有抗抑郁制剂又有外用制剂，用量都很大，据统计全世界患者达 药量极大。由此可见，未开发的国内及全球市场潜力巨大，值得深入研究并推上市场。并且，艾滋病在世界泛滥，而治疗方法和药物却不多，美国曾研制出少量药物，却又垄断专利。我国研究者可在这一方面深入研究，利用金丝桃素可抑制人免疫缺陷病毒逆转录酶的活性的特性，开发研制抗艾滋病新药，为人类造福。 基于金丝桃素在 抗病毒、抗肿瘤、治疗抑郁症、增强免疫等功能，使贯叶连翘在药用上具有非常广阔的开发前景。 畜牧行业中的发展前景 国外有报道金丝桃素作疫苗增强剂致免疫性 (注 :金丝桃素、原金丝桃素与病原体、微生物与之接触而灭活，更为可贵的是逆转录病毒与之接触而得以保护、增强其致免疫作用，在生产疫苗中有益 )（ et 1992 )。我国是农业大国，畜牧生产在农业生产中占有很大的比重。因此，将金丝桃素的新制剂应用在动物病毒性疾病的防治方面具有独特的优势和广阔的发展前景，亦能带来良好的经济效益和社会效益。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 6 3 金 丝桃素的研究进展 金丝桃素是从贯叶连翘中提取的主要活性成份之一 ,它除临床上用于抗抑郁、抑制中枢神经外 ,还是一种有前途的内源性光敏剂 ,可用于肿瘤的光化学诊断与治疗 ,具有显著的抗 此成为人们的研究热点之一。 丝桃素的提取与分离 国外有关金丝桃素的提取方法的研究是在 80 年代开始进行的，国内对贯叶连翘的研究主要集中在金丝桃素的药理方面，而对金丝桃素提取分离方法的研究进行的较晚，直到上世纪 90 年代末才有报道。目前，国内现行的方法大部分停留在金丝桃素的提取方法上，而对其分离、纯化的方法研究的较 少。主要采取以下几种方法： 提取法 在醇提法中，用乙醇作溶剂从贯叶连翘中提取金丝桃素是一种比较常用的方法。李俊等 （ 1998）等通过多次实验发现，用乙醇法提取贯叶连翘中的金丝桃素时，提取溶剂浓度和提取温度对贯叶连翘提取物的提取率和提取物中金丝桃素的含量影响显著 。 结果表明， 溶剂以 80%乙醇、温度以 80为宜，提取时间最佳为 2h，这样的条件下提取率最高。该方法具有溶剂价格便宜，易于回收，工艺简单，对环境造成的污染小的优点，但是所得提取物具有易吸湿，易发粘和其中金丝桃素的含量常因原料贯叶连翘中金丝桃素的含量变 化而发生波动的缺点。因此需要对该方法进行改进，温普红等对金丝桃素的醇法提取工艺进行了研究和改进。研制出了价廉、无毒、新型的除杂剂。由于该除杂剂的使用，使导致吸湿发粘的杂质如糖类、叶绿素等较彻底地除去，使生产工序大为简化，只需经过提取 、 除杂、调 可得到所需产品，且所得产品在空气中长期暴露仍保持粉末状不会发粘结块， 而且提高了金丝桃素的相对含量 (含量为 ，大大超过了国际市场对金丝桃素含量 要求，消除了原料中金丝桃素含量高低对产品质量的影响，但该实验中仅以金丝桃素含量为指标，没有 收率的相关指标，并且尚未报道除杂剂的组成成分和比例。该实验在调 现 (1) 越低，产品析出的速度越快，但产品中金丝桃素的含量相对降低。 (2)金丝桃素的析出酸度比黄酮类等其他物质的析出酸度低，析出速度也比其它物质快。因此，通过控制溶液的 以调节产品中金丝桃素的含量。但此方法析出金丝桃素时，在酸化的提取液中将会残留一定量的金丝桃素，造成金丝桃素的析出不完全，由于金丝桃素在贯叶连翘中含量极低，提取费时费力，应尽量减少提纯过程中的流失。温普红等（ 2002）分别用甲醇乙醇作提取 剂，进行比较实验。结果表明 ： 用乙醇作提取剂时，所得产品中金丝桃素的含量较高 ;但提取温度比甲醇时高，同时乙醇的价格也较甲醇贵。但综合考虑到甲醇的毒性较强，选用乙醇作提取剂较为适宜。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 7 液提取法 碱液提取法是近几年才发展起来的一种提取方法，李俊等 (1999)通过多次实验 ,确定最佳工艺为 :称取一定量干燥粉碎的贯叶连翘全草 ,用 30 倍原料重的 1%液在 95 100沸腾状态下浸提 12 ,提取 3次 ,集中滤液 ,用 ,真空浓缩干燥即得产品。此工艺的原料重量比、温度、提取时 间、溶剂浓度是通过多次正交设计实验得出的 ,在此条件下 ,提取物中金丝桃素含量最高 ,为大规模生产提供了理论依据， 谈曾毅等 (2002)通过采用碱溶液对贯叶连翘药材保温发酵，然后用甲醇 丙酮提取，做出的干浸膏中金丝桃素的含量与浸膏对照品基本一致，含量约为 ，收率为 同时采用多种溶剂提取，或加水后润湿提取，或加碱液提取，均不能使金丝桃素的含量达到满意的结果，只有加氢氧化纳碱溶液保温发酵后，方能达到最佳的效果。李翠芹等提取分离金丝桃素的方法是以金丝桃素含量和干品得率为指标，采用正交试验法研究了从贯叶连翘 中提取金丝桃素的工艺，经过综合考虑各种因素，结果表明较佳的提取工艺为 : 75%甲醇， 78 提取 5 次，每次 媒量 5 倍，浓缩和干燥温度 78 。 丝桃素的含量测定方法 效液相色谱法（ 目前 高效液相色谱法（ 借其操作简单、灵敏度高、重现性好等优点被广泛的应用于含量测定，近几年 测定贯叶连翘中金丝桃素的含量使用最多的是高效液相色谱法 (（李翠芹，等， 2001； 毛红胜 ,等， 2001；王文辉， 1999,等等）。由于实验条件不同，各自采用的流动相也不尽相同。通 过测定发现 ,贯叶连翘中花、叶内金丝桃素含量大于根、茎中的含量 ,尤其花中金丝桃素含量最高，且不同地区的金丝桃素含量也不尽相同。 外可见光谱测试法 (该法是利 用波长 (波数 )和吸光度描绘物质在紫外或可见区域所得的吸收曲线。 通过 研究物质分子对紫外和可见区波长 (200700光的相互作用，利用吸收谱带的波长位置的吸光度进行试样的定性、定量分析方法。 采用紫外可见光谱测试 ,金丝桃素在 589有最大吸收为其特征锋 ,以浓度为横坐标 ,吸光度 (A)为纵坐标 ,绘制金丝桃素的标准曲线。得回归方程为 Y=键，等，2000）。数据显示该方法精密度较好 ,回收率高 ,供试品溶液较为稳定 ,可作为金丝桃素的检测方法之一。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 8 层色谱法 (薄层色谱法 (,et 000)测定贯叶连翘中金丝桃素的含量 ,用水、甲醇、乙醇作溶剂 ,检测波长为 254。由于 薄层色谱法易受试验环境等多种因素的影响，方法重现性差， 所以较少用。 示脉冲极谱法 (差示脉冲极谱法 ,溶剂选用磷酸盐缓冲溶液 在 出现波峰（ et 000）。此法虽准确、快捷，但仪器昂贵，所以使用较少。 波长分光光度法 (以测定波长为 589比波长为 647行组合 ,甲醇为空白溶液。以金丝桃素对照品溶液浓度为横坐标 , 47 589 为纵坐标制得金丝桃素标准曲线。其回归方程为 47589=r=利宾 ,等， 2001）。该方法简单易行 ,结果较为准确 ,可排除大部分干扰测定 ,克服目前应用单波 长分光光度法抗干扰能力差的缺点。不足之处由于二阶导数光谱处理后 ,所需信息量大大减少 ,使测定相对误差增大。 效液相色谱 荧光检测法 (色谱条件：色谱柱 : m， 200流动相 :甲醇 55 45),流速： 温： 30，荧光检测波长： 80 00方法的线性范围为 102归方程为 Y=1953X+俊 ,2001）。 方法快速 ,简单 ,灵敏度高。由于金丝桃素为强酸性。 荧光强度有较大影响 ,测定时宜选取 此时灵敏度高 ,峰型好。 王峰等（ 2000）报道了 贯叶连翘片剂中有效成分金丝桃素和金丝桃苦的含量。本方法有良好的重现性及 精密度。 以上方法不仅可以测定贯叶连翘植物中的金丝桃素含量 ,还可检测贯叶连翘片剂中金丝桃素含量。 丝桃素的化学合成 丝桃素的理化性质 1891 年 离到金丝桃素， 1911 年 名为“ 1951 年 确定其化中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 9 学式为 4， 4 ， 5， 5 ， 7， 7一六羟基 2， 2一二甲基一中位一萘骈二蒽酮， 分子式为 子量为 构式如图 1丝桃素是一种蓝黑色针状结晶体，易溶于吡啶、甲醇、乙醇、乙酸乙酯 等有机溶剂和碱水溶液中，加热易分解，没有固定的熔点，对光敏感，需避光保存。 图 1of 化学合成 由于金丝桃素具有抗抑郁、抗菌消炎、抗 毒等药理活性，因此对其的 需求量与日俱增。我国虽然盛产贯叶连翘，但是由于金丝桃素在贯叶连翘全草中的含量仅有万分之几，即使通过改善提取工艺，提取分离出来的金丝桃素产量仍然较低，远远不能满足市场对金丝桃素的需求，实现金丝桃素产业化的目标有一定的困难，这样极大地限制了金丝桃素产品的临床应用。为了实现贯叶连翘资源的可持续发展，扩大金丝桃素的药物来源，以利于实现金丝桃素的产业化，因此，可通过化学合成的方法实现这一目的。目前，国外已有许多关于金丝桃素化学合成路线的报道，其一是以 3、 51957），整个合成路线需要十二步，而产率仅为 6 9；其二是以大黄素作为起始原料（ 1958），大黄素被直接转化成原金丝桃素，然后在可见光的照射下，再转化成金丝桃素，但第一次转化存在大黄素产率较低等问题。合成路线如下 : 上述合成路线均存在较大缺陷，因此迫切需要一条经济，操作简便、合理